三七活络膏的初步质量标准研究

邝洁容　陈伯丛　罗德祥（广东省佛山市中医院药剂科　佛山　528000）

三七活络膏的初步质量标准研究

邝洁容陈伯丛罗德祥（广东省佛山市中医院药剂科佛山528000）

目的：建立三七活络膏的薄层色谱鉴别方法，为其质量控制标准的制定提供试验依据。方法：采用薄层色谱鉴别法鉴别处方中的骨碎补、樟脑、羌活、甘草、防风等多味药。结果：处方中的骨碎补、樟脑、羌活、甘草、防风五味药的薄层色谱具有鉴别特征，斑点均清晰，阴性无干扰。白芷、三七斑点不明显，不能作为薄层色谱法鉴别的方法。结论：薄层色谱鉴别方法简便快捷，专属性及重现性好，为三七活络膏的质量控制提供有力的支撑。初步稳定性试验表明本品质量稳定。

三七活络膏 质量标准 薄层色谱法 初步稳定性试验

三七活络膏是由三七、骨碎补、白芷、羌活、防风、木瓜、甘草、樟脑、薄荷脑、当归、伸筋草等二十一味药材制成的中药制剂，具有活血祛瘀、消肿止痛、祛风去湿、舒经活络作用，治跌打损伤、瘀肿疼痛、筋骨酸软、关节不利，临床用于治疗多种骨折创伤，毒副作用相对西药较小，患者的顺应性也好，对于跌打损伤的治疗有一定的意义。因此建立三七活络膏的薄层色谱法定性鉴别质量标准，不仅对制剂的工艺设计提供数据的参考，保证质量，提高疗效，方便患者使用，而且具有较大的市场发展前景。

1　材料与仪器

1.1材料：羌活、骨碎补、樟脑、防风、甘草等药材（均购自广东天泰药业有限公司中药饮片厂），经中药学院中药鉴定教研室鉴定符合药典中的药材来源与标准；三七跌打软膏，自制；硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；香草醛、乙酸乙酯、氯仿等试剂均为分析纯；甘油、白凡士林等均为化学纯。

1.2仪器：HH数显恒温水浴锅、ZF-20D暗箱式紫外分析仪、85-2A型数显恒温磁力搅拌器、TDL-80-2B离心机、SK8200H超声波清洗器、数显鼓风干燥器。

2　方法与结果

2.1骨碎补的薄层鉴别：取本品20g，加水100mL，超声提取40 min，过滤，取滤液50mL，用氯仿萃取两次，每次50mL，舍去氯仿萃取液；药液部分继续用乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，于水浴上浓缩至干，残渣加甲醇2mL使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。取骨碎补对照药材1g，加乙酸乙酯溶液20mL，其余做法与供试品相同作为对照药材溶液。阴性对照溶液制法与供试品溶液制备方法相同。照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液、阴性对照溶液各2μL，对照药材溶液4μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸-水（1∶12∶2.5∶3）为展开剂，预饱和30min，上行展开，取出晾干，喷以硫酸香草醛溶液，在105℃下烘至斑点显色清晰。在日光下检视。（见图1）［1］

2.2羌活的薄层鉴别：取本品20g，加水100mL，超声提取30min，过滤，取滤液50mL，用乙醚萃取两次每次50mL，萃取液舍去。药液部分继续用三氯甲烷萃取两次，每次30mL，合并萃取液于水浴浓缩至干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。取羌活对照药材1g，加入甲醇10mL，其余做法参照供试品溶液的做法，为对照药材溶液。阴性对照溶液按供试品溶液制备方法制成。照薄层色谱法试验，吸取以上三种试液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶1.5∶0.5）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。（见图2）［2］

2.3樟脑的薄层鉴别：取本品20g，加水100mL，低温超声，过滤，滤液用三氯甲烷萃取两次，每次30mL，合并滤液，取滤液2mL，作为供试品溶液。取樟脑对照药材1g，加1%乙醇溶液10mL溶解，制成对照药材溶液。阴性对照溶液按供试品溶液制备方法制成。照薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液及阴性对照溶液各5μL，对照药材溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（9∶2）为展开剂，预饱和15min，上行展开，取出晾干，喷以5%硫酸香草醛溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。（见图3）［3］

2.4甘草的薄层鉴别：取本品20g，加水100mL，超声，过滤，取滤液50mL，用50mL乙醚萃取，共两次，合并乙醚液，浓缩至干，用甲醇2mL使残渣溶解，为供试品溶液。

取对照药材甘草1g，加入甲醇10mL，超声提取30min，滤过，滤液水浴上蒸干，用甲醇2mL将残渣溶解，为对照药材溶液。阴性对照溶液按供试品溶液制备方法制成。照薄层色谱法试验，分别吸取以上三种试液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-水（5∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。（见图4）［4］

2.5防风的薄层鉴别：取本品20g，加水100mL，超声，过滤，取滤液50mL，用乙醚萃取两次每次50mL，药液部分继续用三氯甲烷30mL萃取，共两次，合并萃取液，于水浴上浓缩至干，加甲醇2mL使残渣溶解，为供试品溶液。称取对照药材防风1g，加入三氯甲烷20mL，超声提取20min，滤过，滤液水浴上蒸干，用甲醇2mL使残渣溶解，为对照药材溶液。制成阴性对照溶液方法与供试品溶液相同。照薄层色谱法试验，分别吸取以上三种试液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。（见图5）［5］

3　讨论

该实验主要以薄层色谱法对三七活络膏的质量进行控制，三七活络膏为0/W型乳膏，因为其剂型特点，在供试品制备过程中遇到较大的问题：供试品溶液过于黏稠、没有出现特征斑点、斑点模糊及阴性干扰大等现象。最后根据文献等资料选择了一条途径重新制备供试品，经过多次预实验发现：根据分步萃取的思路和药典及文献质量标准制定常用提取部位，选择了乙醚→氯仿→乙酸乙酯→水饱和正丁醇的提取路线，供试品制备方法为：取本品20g，加水100mL，超声30min，过滤，滤液用乙醚萃取两次，每次30mL，合并乙醚液，乙醚液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液乙醚部位，药液继续用氯仿萃取两次，每次30mL，合并氯仿液，氯仿液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液氯仿部位，药液继续用乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品乙酸乙酯部位，药液继续用水饱和正丁醇萃取两次，每次30mL，合并水饱和正丁醇液，水饱和正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液水饱和正丁醇部位，根据所要研究的成分性质选择实验需要的部位。

复方制剂中由于药材品种多，各种药材所含的成分更多，它们相互之间影响因素不一样，就算两种药材或两个复方制剂均含有同一种成分，但是它们受到的影响环境不一样，得出的结果也不可能相同，结果很难有统一标准衡量，可能出现的情况是：可能斑点的Rf值相同，但是斑点颜色不一样，或者斑点颜色一样，但是Rf值不相同。出现这种情况的原因就是它们之间的各个成分相互干扰，哪种成分干扰没有进一步研究，对科技工作者提出了新的要求，是今后努力的方向。有时能找到两个药材的相同成分，但是要排除阴性干扰，又要找出所研究的复方制剂的各药材之间的不同成分，但是它们又不是主要成分、活性成分，没有进一步研究的价值。在鉴别过程中会出现薄层色谱实验常出现的问题，如：斑点拖尾；Rf值过大过小、斑点不清晰或分不开、斑点颜色较浅、边缘效应等。经过查找大量文献，收集了较多的解决方法，有：调整点样量大小，原点直径应不大于3mm；喷显色剂使斑点清晰或加大供试品溶液点样量或者浓度；展开剂应现配现用，预饱和时间应为30min，展开缸的密闭性应良好等，建立了骨碎补、羌活、甘草、防风及樟脑的薄层鉴别方法，经过反复实验验证研究，也做了方法学考察，表明该质量标准的可行性、重现性及耐用性良好，可以作为该制剂的质量标准。

［1］张彬，李萍.跌打活血散中的骨碎补薄层色谱鉴定［J］.山西医学院学报，1996，10（27）：15-16.

［2］郭宏彦.丁桂活络凝胶膏的质量标准研究 ［J］.中国药房，2014，25（43）：4076-4077.

［3］张波.薄层层析法和气相色谱法测定伤痛外搽灵中冰片樟脑薄荷脑的比较研究［J］.湖南中医学院学报，1998，18（4）：19-20.

［4］李光喜，邓红，张蜀.青梅感冒冲剂中的岗梅和甘草的薄层色谱鉴别［J］.广东药学院学报，2003，19（2）：107-108.

［5］黄兰芷.连防感冒颗粒中防风薄层鉴别方法改进［J］.中南药学，2007，5（2）：149-150.

R286.0

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1672-8351（2016）09-0012-02