不同产地白术药材中白术内酯I和II的含量测定

2016-09-20吴梓春何兆锦广东省佛山市第一人民医院中山大学附属佛山医院药学部佛山528000

北方药学 2016年9期

吴梓春　何兆锦（广东省佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药学部　佛山　528000）

吴梓春何兆锦（广东省佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院）药学部佛山528000）

目的：探讨不同产地白术药材中白术内酯I和白术内酯II的高效液相测定方法。方法：选择浙江、安徽、甘肃、江西四个产地的白术药材，色谱柱采用Hypersil 0DS（4.6mm×250mm，2.5μm），流动相为乙腈∶水=55∶45，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长223nm。结果：白术内酯I的线性关系方程为：Y=3.546×104+0.524×104（r=0.9998），在0.5～500μg范围内线性关系良好；白术内酯II的线性关系方程为：Y=4.746×104+0.949×104（r=0.9997），在0.5～500μg范围内线性关系良好。白术内酯I的平均加样回收率为99.74%，RSD1.32%，白术内酯II平均加样回收率为99.68%，RSD为2.01%。浙江产白术药材中两种有效成分含量最高，江西产白术药材的两种有效成分含量较低。结论：高效液相色谱法测定不同产地白术中的有效成分，方法简单易操作，灵敏度高，准确性好，重复性强，可以作为白术质量控制的定量指标。

白术内酯I白术内酯II高效液相色谱不同产地

中药白术为菊科（Composetae）苍术属（Atractylodes）植物白术（Atractylodes macrocephala Koidz）的干燥根茎［1］，多数分布于我国的浙江、安徽、甘肃、湖南以及江西等产地［2］。白术味苦、甘，性温，主要归脾胃经，功能健脾益气，燥湿利水，为补益类的补气中药材［3］。由于我国白术的产地较多，药材的质量也有一定的差异，我国各个地域的生态环境、气候等不同，导致了不同产地白术药材有效成分的含量存在差异。为了加强白术药材的质量控制，本研究以白术中白术内酯I、白术内酯II的含量作为观察指标，采用高效液相色谱法观察不同产地白术中上述两种有效成分的含量。

1　仪器与试药

1.1实验仪器：日本岛津LC-10AT型单泵高效液相色谱仪，SPD-10AVP型紫外检测器，岛津CBM色谱工作站。手提式高速万能粉碎机DFD-100、4号筛，电热恒温鼓风干燥箱，KQ-500E型超声波清洗仪，美国梅特勒电子分析天平（精密度为0.0001g），PL-80离心沉淀机。

1.2实验试药：白术药材采自浙江、安徽、甘肃、江西四个产地，药材均经专家鉴定分别为菊科（Compositae）植物白术（Atractylodes macrocephala koidz）的干燥根茎和菊科植物Atractylades macrocephalacv.Yuzhu的干燥根茎。乙腈为色谱纯，水为三蒸水，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件的选择：色谱柱采用Hypersil 0DS（4.6mm×250mm，2.5μm），流动相为乙腈∶水=55∶45，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长223nm，进样量为20μL。以白术内酯I作为参考，色谱柱的理论塔板数＞5000。

2.2对照品溶液的制备：精密称定白术内酯I对照品0.4mg，置于5ml容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度后摇匀，静置；取白术内酯II对照品0.45mg精密称定后置于5ml容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度后摇匀，静置。两种对照品溶液置于-20℃冰箱中保存，备用。

2.3供试品溶液的制备：取白术药材2.0g置于粉碎机中粉碎后过4号筛，精密称定后置于加塞锥形瓶中，加入甲醇溶液50ml后称定重量，超声处理40min。放冷后再次称定重量，甲醇溶液将减少的重量补足后以塞盖住锥形瓶，摇匀，过0.45μm微孔滤膜后，置于3000转/min的离心机中离心10min，取上清液即得供试品溶液。

2.4标准曲线的绘制：将分别溶解于甲醇溶液中的白术内酯I、白术内酯II对照品溶液稀释成0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0μg/ml的白术内酯I、II标准溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，分别进样20μL，以白术内酯I、II色谱峰面积作为纵坐标，白术内酯I、II对照品质量浓度为横坐标绘制标准曲线，得到回归方程以及相关系数。白术内酯I的线性关系方程为：Y= 3.546×104+0.524×104（r=0.9998），在0.5～500μg范围内线性关系良好；白术内酯II的线性关系方程为：Y=4.746×104+0.949×104（r=0.9997），在0.5～500μg范围内线性关系良好。

2.5稳定性考察：取同一批次的样品药材，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法进行操作，制备供试品溶液后精密吸取同一供试品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进样，分别在配制溶液后0、1、4、6、8、12、24h吸取20μL进样分析，按照线性关系方程计算白术内酯I、白术内酯II在供试品溶液中的稳定性，结果表明白术内酯I的RSD值为2.14%，白术内酯II的RSD值为2.01%，表明溶液在24h内较为稳定。

2.6精密度考察：将：2.5：项下配制的同一批次供试品溶液，吸取20μL，按照“2.1”项下的色谱条件重复进样5次，计算峰面积值，结果表明其RSD值为1.36%，表明该仪器的精密度良好。

2.7重现性考察：取同一白术样品粉末，精密称取5份，每份为1.245g，按照“2.3”项下的供试品溶液的制备方式进行配制，按照“2.1”项下的色谱条件进样后得到白术内酯I、白术内酯II的RSD分别为1.84%、1.76%，表明该色谱条件下测定结果的重现性良好。

2.8加样回收率试验：精密称取已知白术内酯I、白术内酯II含量的白术粉末，精密称定5份，精密加入白术内酯I、II对照品适量，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方式进行供试品溶液的配制，按照“2.1”项下的色谱条件进行色谱图的分析，计算平均加样回收率，结果见表1、表2。