香元消痔巴布贴的质量标准研究

李文兵，王洛临，李智勇，张诚光，范宋玲

·炮制制剂·

香元消痔巴布贴的质量标准研究

李文兵，王洛临，李智勇，张诚光，范宋玲

目的：研究香元消痔巴布贴的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对制剂中地榆、黄柏进行定性鉴别，并用高效液相色谱法对制剂中的主药地榆进行含量测定。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；没食子酸在8.34～83.40 ng之间成良好的线性关系，平均回收率为99.14％， RSD为1.06％（n=6）。结论：该法灵敏、简便、准确和重复性好，可作为该制剂的质量控制标准。

香元消痔巴布贴；质量标准；高效液相色谱法；没食子酸

香元消痔膏是我院肛肠科内病外治的中医特色疗法，多年临床用于治疗痔疮的经验处方，具有疗效确切，毒副作用小等特点。课题组在前期临床应用研究基础上，针对其存在制备工艺粗糙、质量控制方法落后等不足，对该制剂的工艺、质量、剂型等进一步研究，以期将其研制成治疗痔疮的新药——香元消痔巴布贴。香元消痔巴布贴由地榆、黄柏、槐花、鱼腥草、元胡、乳香、没药、冰片等八味中药材组成，笔者对香元消痔巴布贴进行质量标准研究时，采用薄层色谱法对制剂中地榆、黄柏进行定性鉴别，并用高效液相色谱法对制剂中的主药地榆进行定量研究。现将研究结果报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器

1100型高效液相色谱仪、DAD检测器、四元梯度泵、G2170AA型数据处理软件系统（美国Agilent公司）； Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平（瑞士）； KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； CAMAG Reprostar薄层成像系统（瑞士CAMAG公司）； CAMAG Automatic TLC Sampler4全自动薄层点样仪（瑞士）；硅胶G薄层板（浙江省路桥四甲生化塑料厂）。

1.2试药

地榆对照药材（批号：121286-200402）、黄柏对照药材（批号：121510-200703） 、没食子酸对照品（批号：110831-200302）均购自中国药品生物制品检定所； 地榆、黄柏等中药均购于广州市药材公司（广东省第二中医院李庆勇副主任中药师鉴定，均为《中华人民共和国药典》2010年版收载的正品），香元消痔巴布贴（20140912、20141015、20141112广东省第二中医院自制）； 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 薄层鉴别

2.1地榆的TLC鉴别［1］

取本品1贴，除去盖衬，剪碎，加10％盐酸溶液100 mL，超声处理30 min，滤过，滤液用盐酸饱和的乙醚萃取2次，每次20 mL，合并乙醚溶液，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取地榆对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方比例，称取缺地榆的其它各药材，按制备工艺制成不含地榆的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成缺地榆阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，分别吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各3 μL，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯（用水饱和）-乙酸乙酯-甲酸（6：3：1）［2］为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图1。

图1　1～3.供试品 4.地榆对照药材 5.地榆阴性对照

图2　1～3.供试品 4.黄柏对照药材 5.黄柏阴性对照

2.2黄柏的TLC鉴别［3］

取本品1贴，除去盖衬，剪碎，加氯仿50 mL，水浴加热搅拌，滤过，残渣以少量氯仿分2次洗涤，挥干氯仿液，残渣连同滤纸置锥形瓶中，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。按处方比例，称取缺黄柏的其它各药材，按制备工艺制成不含黄柏的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成缺黄柏阴性对照溶液。照薄层色谱法［2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录VIB］试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，结果见图2。

3 没食子酸的含量测定

3.1色谱条件

色谱柱：Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：流动相为甲醇-0.05％磷酸缓冲液（6：94）；流速为1 mL·min-1；检测波长为272 nm；柱温25 ℃。

3.2对照品溶液的制备

精密称取没食子酸对照品置量瓶中，加甲醇制成每1 mL含没食子酸16.68 μg的溶液，作为对照品溶液。

3.3供试品溶液的制备

取本品半贴，除去盖衬，剪碎，加10％盐酸溶液60 mL，超声处理30 min，滤过，滤液用盐酸饱和的乙醚萃取2次，每次10 mL，合并乙醚溶液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

3.4阴性对照溶液的制备

将处方中除去地榆，按制剂工艺制备供试品阴性对照品，按“3.3”项下方法制得阴性对照溶液。

3.5线性关系考察

精密量取没食子酸对照品储备液（16.68 μg·mL-1）各0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别置5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含没食子酸1.668 μg、3.336 μg、6.672 μg、10.008 μg、13.344 μg、16.680 μg的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各5 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积对数为纵坐标，进样量（μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程为Y=10.2098X-0.0104（r=0.9998），结果表明，没食子酸在进样量为8.34～83.40 ng范围内线性关系良好。

3.6精密度试验

精密吸取上述对照品溶液5 μL，重复进样6次，按“3.1”项下色谱条件测定。结果，没食子酸峰面积的RSD为0.38％，表明仪器精密度良好。

3.7稳定性试验

取同一供试品溶液（批号： 20140912），分别于0 h、3 h、6 h 、12 h、18 h 、24 h，进样5 μL，按“3.1”项下色谱条件测定。结果，没食子酸峰面积的RSD为0.32％，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

3.8重复性试验

按拟定的含量测定方法，取同一批样品（批号：20141015）6份，分别按“3.3”项下方法制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定峰面积并计算含量。结果，没食子酸平均含量的RSD分别为0.88％，表明该方法重现性良好。

3.9回收率试验

取已知含量的样品（批号： 20141112）6份，分别精密加入一定量的没食子酸对照品，按“3.3”项下方法制备样品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1　没食子酸加样回收率试验结果（n=6）

3.10样品含量测定

取3批样品，分别按“3.3”项下方法制备样品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定，进样量为5 μL，测定峰面积，计算样品含量。结果见表2。

表2　样品中含量测定结果（n=3）

4 讨论

在薄层定性研究时，鉴别黄柏曾以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（12：6：5：3：1）为展开剂［4］，结果分离效果欠佳，色谱斑点不清晰，经过不断摸索试验，改用正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂，结果分离效果较好，色谱斑点清晰，可作为黄柏的TLC鉴别方法。

在研究没食子酸的含量测定过程中，笔者进行流动相的选择时，曾以乙腈-0.01 mol/L磷酸溶液（5：100）［5］作为流动相进行试验，处方中的其他成分与没食子酸分离效果欠佳，采用甲醇-0.05％磷酸缓冲液为流动相，分离效果较好，然后经过不断调整两者的比例，最后确定甲醇-0.05％磷酸缓冲液（6：94），使没食子酸与其他成分完全分离，达到较佳的效果。

综上所述，本文所建标准可用于香元消痔巴布贴的质量控制。

［1］ 陈淑映，黄健，庄学潮，等. 新型热熔压敏胶制备的伤科贴膏的薄层鉴别［J］. 云南中医中药杂志， 2013，34（2）：44-46.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：231.

［3］ 乔 莉，焦正花，张小华，等. 铁箍膏巴布剂质量标准研究［J］. 中国中医药信息杂志， 2012，19（5）：56-58.

［4］ 孔繁晟，杨正奇，严春艳，等. 复方金黄痔疮软膏的薄层鉴别［J］.中国实用医药，2009，4（33）：18-19.

［5］ 孙立立，江波，袁振海， 等. HPLC测定地榆饮片中没食子酸的含量［J］.中成药，2006，28（8）：1144-1147.

（责任编辑：傅舒）

Studies on quality control standard of Xiangyuan Xiaozhi cataplasm/

LI Wen-bing， WANG Luo-lin， LI Zhi-yong， ZHANG Cheng-guang ，FAN Song-lin//（GuangDong Second Traditional Chinese Medicine Hospital， Guangzhou 510095， Guangdong）

Objective: To study quality control standard of Xiangyuan Xiaozhi cataplasm. Method: Diyu and Huangbo in preparation were identified by TLC. The content of Diyu， the main active medicine in cataplasm was determined by HPLC. Result: The TLC spots were clear and negative control showed no interference. Linearity was found in the range of 8.34～83.40 ng for gallic acid with average recovery of 99.14％ （RSD=1.06％， n=6）. Conclusion: The method is sensitive， simple with good precise and reproducible， and can be used for the quality control of the cataplasm.

Xiangyuan Xiaozhi cataplasm； quality control standard； HPLC； gallic acid

R 284.1

A

1674-926X（2016）03-012-03

广东省中医药局立项资助科研课题（编号：20131117）

广东省第二中医院，广东 广州 510095

李文兵（1972-），男，硕士，主要研究方向：医院药学Tel：13660305488 Email：liwenbing312@163.com

2015-06-10