Citrin缺陷导致新生儿肝内胆汁淤积症的尿筛查分析

2016-09-12周立蓉乐山职业技术学院护理系四川乐山614000

现代医药卫生 2016年16期

周立蓉（乐山职业技术学院护理系，四川乐山614000）

周立蓉
（乐山职业技术学院护理系，四川乐山614000）

目的探析Citrin缺陷导致新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）尿液成分筛查的诊断价值和临床意义。方法选取该院自2014年1月至2016年1月收治的27例citrin缺陷导致NICCD患儿，采用滤纸尿气相色谱/质谱法（GC/MS）对其尿液中的半乳糖、酪氨酸及其代谢物质进行分析，判断其在临床诊断中的价值。结果 27例患儿中，有14例（51.9%）存在半乳糖及酪氨酸代谢异常，7例（25.9%）仅表现出半乳糖代谢异常，1例（3.7%）表现出丝苏氨酸比例倒置，5例（18.5%）尿液成分无任何异常变化。结论对NICCD患儿进行尿液筛查，不仅有助于解患儿机体代谢状况，而且对患儿病症的确诊具有积极作用和意义。

胆汁淤积，肝内；婴儿，新生；基因，突变；尿分析；色谱法

Citrin缺陷导致新生儿肝内胆汁淤积症（NICCD）作为一种先天性遗传性代谢疾病，在临床上相对比较少见［1］。通常情况下，NICCD发生后，患儿不仅会存在较为明显的代谢异常，而且还合并黄疸、肝功能异常及高瓜氨酸血症、半乳糖血症、低蛋白血症等多种代谢疾病［2］，通过尿液成分筛查分析，能够有效掌握患儿机体代谢状况，为疾病的诊断提供有效的信息和帮助，具有积极作用和意义。本研究对本院收治的27例NICCD患儿进行了尿液成分变化的筛查分析，探讨其临床诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取本院2014年1月至2016年1月收治的27例NICCD患儿作为研究对象，其中男15例，女12例，年龄2～7个月，平均（3.6±2.3）个月。

1.2 方法

1.2.1 诊断标准入选患儿均符合Citrin缺陷导致的NICCD诊断标准［3］：病症发生于新生儿或婴儿时期，临床表现为持续黄疸不退、肝酶变化异常，总胆红素、直接胆红素及甲胎蛋白（AFP）含量增高，存在低蛋白血症，凝血功能障碍，确诊为SLC25A13基因突变。排除标准：存在其他代谢异常疾病，资料不全患儿。

1.2.2 检测试剂与仪器新华滤纸、尿激酶及6890N/ 5973GC/MS联用仪（日本HITACHI）、正十七烷酸等。

1.2.3 样本制作在5 cm×8 cm滤纸上滴加1 mL患儿原尿液，待完全浸透后放置于荫凉处晾干，并在室温下进行保存。然后进行滤纸尿制作，制作完成后，将滤纸进行卷曲放置在一次性使用注射器针套内，并在注射器中加入1 mL去离子水，在浸透滤纸后静置15min，进行离心去蛋白处理，获取洗脱尿样本。

1.2.4 气相色谱/质谱（GC/MS）分析使用6890N/5973 GC/MS联用仪进行患儿尿液代谢产物检测与分析。首先，选取100 μL保存尿液进行解冻、混匀处理，待检测分析。然后，取尿液样本100 μL，加入尿激酶，在37℃水温下放置40 min，再加入1 mL无水乙醇进行混匀后，经离心去蛋白处理，将上清液提取放置于玻璃瓶中在37℃干燥真空条件下保存，其余物质使用9∶1双甲基硅烷三氟乙酰胺与三羟甲基氯硅烷在80℃温度环境下持续硅烷化处理40min，对最终反应产物进行GC/MS分析。对尿液中的代谢产物通过随机质谱仪检索美国国家标准及技术研究所图谱库方式进行鉴定分析，并通过峰下面积计算对尿半乳糖结果进行分析。

GC/MS分析过程中，温度设置为260℃，传输温度设置为280℃，以高纯氦气作为样本分析载气，载气以恒流状态保持1 mL/min的流速进行分析应用。同时将离子源温度设置为250℃，整个分析过程通过程序升温方式，将起始温度设置为60℃，并以每分钟4℃方式进行逐渐提升，最高控制在280℃，每个温度变化之间保留1 min。最后，进样检测以分流方式，每次进样量为1 μL，进样分流比控制为1∶50，以确保检测分析结果的准确性。

1.2.5 检测方法对检测结果进行定量、定性分析。其中，对检测成分以该物质特征离子峰面积及肌酐特征离子峰面积比值进行半定量表示，半定量计算公式为lg（X+5）。该公式中，X即为检测物质特征离子峰面积与肌酐特征离子峰面积比值［4］。

2 结果

27例患儿中，14例存在半乳糖及酪氨酸代谢异常，约占51.9%；7例表现出半乳糖代谢异常，约占25.9%；1例表现出丝苏氨酸比例倒置，约占3.7%；5例尿液成分未表现出任何异常变化，约占18.5%。图1为7例半乳糖代谢异常患儿尿筛查结果变化示意图。

图1 半乳糖代谢异常患儿的尿筛查质谱图

3 讨论

临床上，NICCD作为一种遗传性代谢疾病，主要是由人体中Citrin蛋白的SLC25A13基因发生突变而引起的一种常染色体异常疾病［5］。其中，Citrin蛋白中SLC25A13基因正常是位于7q51.3内，全长在200 kb左右，包含18个外显子和17个内含子，并且该基因编码中还包含675个氨基酸Citrin蛋白［6］，而SLC25A13基因突变必然导致Citrin蛋白存在相应的缺失变化，从而引起NICCD发生。临床研究显示，NICCD作为一种全球性疾病，在世界范围内都有较为广泛的疾病情况，而我国NICCD患者从地域范围上划分，呈现“北低南高”的特征，其中以湖南、广东地区患者数量最为突出［7］。此外，在临床研究统计的遗传性代谢疾病中，NICCD属于发病率较高的一种病症类型，其患者发病数量仅低于甲基丙二酸血症，近年来临床研究数据显示，NICCD患者数量呈现不断增加的变化趋势［8］，对患者产生的危害越来越突出，因此在临床研究中也越来越受重视。

通常情况下，NICCD患儿不仅表现出较为明显的黄疸、肝功能异常等变化，而且多合并有高乳酸血症、半乳糖血症和低蛋白血症、酪氨酸血症等多种代谢异常病症［9］。在人体组织中，Citrin作为天门冬氨酸及谷氨酸载体，主要负责将天门冬氨酸向细胞质转运，同时将细胞质内谷氨酸及质子向线粒体转运，而Citrin蛋白在体内糖酵解、尿素合成及糖异生、脂类代谢等过程中具有重要作用，而且Citrin蛋白还是上述活动的重要参与者，因此，人体内一旦出现Citrin蛋白缺陷必然会导致人体代谢发生异常，进而产生相应的疾病。在人体代谢异常中，糖及氨基酸代谢异常是最为常见的2种类型，临床中可以通过串联质谱分析法或气相色谱质谱分析法进行分析显现［10］。本研究通过对本院收治的27例NICCD患儿尿液进行筛查分析显示，半乳糖代谢异常在患儿代谢异常中所占比率最高。由此可见，NICCD患儿临床中会发生以半乳糖代谢异常为主的标志性症状反应［11］，这对患者病症诊断及临床治疗具有一定的指导作用和意义。但在实际研究中，对临床检查存在有半乳糖代谢异常的患儿来讲，根据其气相色谱质谱分析结果，需要与典型的病理性半乳糖血症进行区分判断，以避免影响患儿的诊断和治疗。通常情况下，典型的病理性半乳糖血症多在围生期发病，并且在进食乳类后几天内即可出现呕吐、嗜睡、体质量不增加或拒食等症状，然后继发黄疸或肝脏肿大等病症，临床中如果不对患儿的病症进行及时诊断和治疗，继续进食乳类将会导致患儿病情进一步恶化，进而出现腹水或肝衰竭等终末期症状。通常情况下，对病理性半乳糖血症患儿早期症状的诊断，可通过裂隙灯检查发现患儿晶状体内白内障形成。而典型性半乳糖血症作为一种染色体隐性遗传疾病，是由于半乳糖代谢发生异常所导致的，并且临床根据代谢异常状况可以进行不同病症类型的划分，临床中对半乳糖血症的早期诊断主要依赖于新生儿筛查、尿液筛查等方式进行检测判断。本研究NICCD患儿发生的半乳糖血症属于一种继发性病症，与病理性半乳糖血症有着根本性区别。因此，临床上对NICCD患儿进行尿液筛查分析时，对存在半乳糖代谢异常患儿，在病症诊断分析中应注意与半乳糖血症进行区别，认识到NICCD患儿的半乳糖血症作为一种继发性疾病，与病理性半乳糖血症在基因突变上存在一定的区别，可以通过基因检测方式将二者进行区分，以准确判断患儿的疾病类型，采取有效的治疗和控制措施，避免疾病发生。

本研究结果显示，NICCD患儿尿液半乳糖代谢异常发生率最高，且患儿临床中可能发生具有标志性的半乳糖血症，这对患儿病症的诊断分析具有很大的帮助。此外，结合临床对NICCD研究情况，NICCD患儿以糖、氨基酸代谢异常最为常见，其中氨基酸代谢异常在NICCD患儿代谢异常中也具有较高的发生率，这就需要在NICCD患儿病情检测诊断中，结合患儿代谢异常检测结果进行综合分析判断，避免影响对患儿病症的治疗。但需要注意的是，在NICCD患儿氨基酸代谢异常的诊断中，对酪氨酸血症患儿的检测诊断应注意和酪氨酸血症Ⅰ型进行区别。酪氨酸血症Ⅰ型作为一种遗传性代谢异常疾病，其尿筛查结果以代谢物质增高为主要变化。而NICCD患儿的代谢异常，能够通过相应的检测方法分析得出，临床中应注意根据检测结果，通过进一步检测进行判断确认。

总之，对NICCD患儿进行尿筛查，有助于了解患儿机体代谢状况，对疾病的确诊具有积极作用和意义。

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