液相色谱法检测食品中的脱氢乙酸含量

熊齐荣

目前各国对脱氢乙酸应用有着严格的限制，如我国规定果汁、酱汁、糕点等食品中的最高用量不得超过0.5g/kg。对于脱氢乙酸含量的测定主要采用气相色谱法和液相色谱法，其中，气相色谱法的操作繁琐且色谱峰易出现拖尾，因此现阶段普遍采用操作更简单、灵敏度更高的高效液相色譜法。

材料与方法

仪器。戴安3000；旋涡混合器；离心机。

试剂。甲基氰（色谱纯）；乙酸铵（分析纯）；NaCl（分析纯）；脱氢乙酸（99.9%）。

测定方法。①色谱条件：流动相为15：85的甲基氰（0.02mol/ml）、乙酸铵溶液；流速为1.0 mL/min；进样量为10μL；柱温为35℃。②实验方法：实验样品为市售不同品牌的果汁、酱菜、糕点，分别做如下处理。果汁：准确称量5.00g于50mL离心管中；酱菜、糕点：预先均匀，称取2～3g于50mL离心管中，加入饱和NaCl溶液5mL，1：1的盐酸溶液1mL，在旋涡混合器中混合处理1min，精确添加甲基氰10 mL，再次混合处理3min，然后以3000转/min的速度离心处理15min，取上清液，用0.45μm规格的过滤器进行过滤，待用。③色谱分析：根据上述色谱条件，利用外标法分析样液，保留时间定性，根据峰面积定量，计算脱氢乙酸含量（mg/mL）。

结果与讨论

检测波长的确定。由扫描结果得知，脱氢乙酸在230nm处出现强吸收，但基体干扰较多；在297nm处出现次强吸收，基体干扰较少，因此，选择297nm作为检测波长。

流动相的选择。以甲基氰+水作为流动相时，色谱峰出现拖尾，以0.02mol/L的乙酸铵替代水时，峰形明显改善。甲基氰的比例对出峰时间和响应有一定影响，比例较低时，保留时间长，响应也比较低，反之则出峰时间短，响应较高。经多次试验得出，当甲基氰与乙酸铵（0.02mol/L）的比例为15：85时，可以取得较好的效果。

提取液的选择。脱氢乙酸对水难溶，但脱氢乙酸钠易溶，通常利用水、NaOH溶液、NaCO3溶液等作为提取液，但提取后需要先净化后才能使用。本文研究中，以甲基氰作为提取液，原因是脱氢乙酸可以溶于甲基氰，且甲基氰的水溶性有助于将酸性样液中的脱氢乙酸彻底溶解，而且甲基氰能够沉淀蛋白质，与脂肪不溶，通过离心即可获得纯度较高的提取液。

色谱分离。在上述色谱条件下，脱氢乙酸的保留时间为5.775min，峰形和组分的分离情况比较好，色谱图如下：

标准曲线。将70%的甲基氰水溶液作为溶剂，制作不同浓度的脱氢乙酸标准液，得到若干测定结果（见表1）。利用峰面积对脱氢乙酸的浓度做回归方程分析，得Y=2.39X×108-1.33×105，R=0.9997，线性结果良好。然后，对各浓度标准液连续进样5次，所得峰面积及保留时间的相对标准偏差依次为0.35%和0.24，表明此测定方法具有较高的定性及定量准确度。

回收率及精密度试验。取未添加脱氢乙酸的腐乳样品3份，每份3g，分别加入0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、1.0mg脱氢乙酸标准液，利用1.3所述方法及步骤进行处理，最终测定结果显示，加标回收率为96.1～99.5%，平均回收率为98.5%。

取含有脱氢计算的腐乳样品1份，以同样的方法和步骤测定6次，得到下列测定值：0.192、0.195、0.194、0.198、0.195、0.193g/kg，相对标准偏差为1.08%。

样品测定。利用该法对市售不同品牌的果汁、酱菜、糕点等食品中的脱氢乙酸含量进行测定，共检测10份，其中7份为未检出，3份检测出脱氢乙酸，浓度依次为0.052g/kg，0.131g/kg，0.088g/kg，与国际标准气相色谱法的测定结果相一致，表明该法测定结果良好，值得推广使用。

（作者单位：毕节市质量技术监督检测所）