分段法在提取大体积接触类检材中的应用

林大钧赵　凯

（1.广东省湛江市公安局，广东 湛江524022；2.广东省公安厅刑事技术中心，广东 广州510050）

分段法在提取大体积接触类检材中的应用

林大钧1赵凯2

（1.广东省湛江市公安局，广东 湛江524022；2.广东省公安厅刑事技术中心，广东 广州510050）

在实际检案中，实验室常会受理体积较大的接触类检材，这类检材具有需要检验面积大、犯罪嫌疑人接触的位置无法准确判断、脱落细胞不易收集的特点。利用分段法提取，结合D盾超敏提取试剂盒提取DNA是检验大体积接触性检材的有效方法。

分段法大体积接触类检材DNA

接触类检材即与人体接触后有人体的生物样本（脱落细胞）残存的检材。其特点是：载体大、易污染、易降解、DNA含量少，很难将载体上的DNA有效地进行富集等。另外，接触性检材接触细胞量的多少与接触人皮肤的干湿程度、接触的力度、时间等多种因素有关，不同类型至同一类型的接触性检材提取的DNA量差别也很悬殊［1］。

在实际检案中，实验室常会受理木棍、锄头等体积较大的接触类检材，这类检材具有需要检验面积大、犯罪嫌疑人接触的位置无法准确判断、脱落细胞不易收集，用常规方法检出率低等特点。如果单凭经验，在检材上提取几个点，通常很难检出犯罪嫌疑人遗留的DNA。还需反复检验，所耗时间较长，不能及时为案件侦查提供线索。本文对案件检验进行总结，使用分段法提取，即把检材按10cm的长度分成若干小段，用脱落细胞粘取器分别粘取，结合超敏DNA提取试剂盒（上海惠文生物技术有限公司）检验，效果良好，检出率较高，破获多起重大案件。

1　案例资料

案例1：2015年7月1日，在廉江雅塘镇菠萝村的路上发现一具未知名男尸，经现场勘查，受害人被伤害致死，在现场提取一段怀疑是作案工具的断裂木棍（如图1所示），全长约为1m，直径为8cm，断裂的一端有可疑血迹。

图1　现场提取的木棍

案例2：2015年5月4日，湛江市遂溪县界炮镇的独居老人杨某群在自家旧屋被人杀死，经现场勘查判断，案发时受害人与犯罪嫌疑人曾发生打斗，在现场提取一根长约96cm的树枝送检。

2　DNA提取及检验

2.1脱落细胞的采集

案例1中的木棍与案例2中的树枝均无法准确判断犯罪嫌疑人的接触部位，用分段法按每段10cm的长度分为10段，使用脱落细胞粘取器（长春博坤生物科技有限公司）进行粘取，粘取后用镊子将粘取器上的胶片放入离心套管中。

2.2DNA提取

将裂解液A、裂解液B和PK（10mg/ml）按比例5∶1∶0.5混匀，取160μl缓慢滴在检材上，盖上管盖。56℃加热20分钟，再99℃10分钟。10000rpm离心2分钟，开盖加入吸附液200μl，10000rpm离心1分钟弃除离心套管，加入吸附液950μl和混匀后的吸附珠16μl，室温静置15分钟8000rpm离心1分钟，充分去除上清液，加入-20℃漂洗液750μl，充分混匀。8000rpm离心1分钟，充分去除上清液，开盖56℃烘干吸附珠1分钟。加入15μl洗脱液，振荡混匀，把液体用力甩到管底，56℃加热15分钟后备用。

2.3扩增及检测

使用Promega公司的PowerPlex18D复合扩增试剂盒对提取后的DNA悬液进行PCR扩增（使用9700扩增仪，扩增体系为10μl，DNA模板量为6μl，循环数为29）。扩增后使用AB-3100/3500基因分析仪对产物进行电泳检测，通过GeneMapper3.2分析软件分析结果。

3　结果

案例1：在送检的现场木棍b、c段成功检出男性基因型（如图2所示），平均峰高值在5000左右，成功比中村中可疑人员叶某，在DNA证据面前，叶某对其犯罪事实供认不讳。

图2　现场提取的木棍b段上提取的脱落细胞

案列2：在送检的树枝d段脱落细胞检出犯罪嫌疑人杨某基因分型，在送检现场提取的树枝a段脱落细胞检出死者杨某群的基因分型。犯罪嫌疑人杨某被抓获后，供认了其案发时曾拿树枝与死者打斗，最后把受害人打死的的犯罪事实。

4　讨论

在实际检案工作中，作案工具等遗留有犯罪嫌疑人脱落细胞的接触性检材越来越受到重视，如何在作案工具上收集到足够的细胞模板和使用合适的DNA检验方法都非常重要。特别是检验大体积的接触类检材时，如何能够做到不漏检，粘取的脱落细胞足够量，是成功检验的关键。本文中的两宗案例检验的对象均为大体积的接触类检材，无法准确判断犯罪嫌疑人接触的位置，在这种情况下，利用分段法提取，能做到全面细致，保证收集到足够的犯罪嫌疑人遗留的脱落细胞。另外，使用D盾超敏提取试剂盒提取DNA，能明显提高现场接触类检材的检出率，D盾超敏提取试剂盒是现场微量检材检验的理想方法，其提取原理是改良传统硅珠法，适用于各类复杂条件的接触类检材，甚至指纹等超微量检材的DNA检验。

综上所述，利用分段法提取，结合D盾超敏提取试剂盒提取DNA是检验大体积接触性检材的有效方法。

［1］杨电，刘超，徐曲毅，等.DNA IQ磁珠法结合Maxwell 16TM自动仪提取接触DNA［J］.刑事技术，2011（3）:4.