蝙蝠葛碱对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及海马区生长抑素表达的影响

张英博，潘思文，于春磊，费洪新，张晓杰，仲丽丽，周忠光

（1.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔161006；2.黑龙江中医药大学，哈尔滨150040）



蝙蝠葛碱对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及海马区生长抑素表达的影响

张英博1，潘思文1，于春磊1，费洪新1，张晓杰1，仲丽丽2，周忠光2

（1.齐齐哈尔医学院，黑龙江齐齐哈尔161006；2.黑龙江中医药大学，哈尔滨150040）

为了探讨蝙蝠葛碱(DAU)对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响。将84只SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组和DAU高、中、低剂量组，采用立体定位仪将凝聚状态Aβ1-42定向注射海马区制备AD动物模型。通过Morris水迷宫的定位航行试验，检测各组大鼠学习记忆的能力。结果显示，与假手术组比较，模型组平均逃避潜伏期明显延长(P＜0.05)，大鼠海马区SS蛋白表达也明显降低(P<0.05)。因此，DAU可能通过上调AD模型大鼠海马区SS蛋白的表达，进而改善AD大鼠的学习记忆能力，发挥防治AD的作用。

阿尔茨海默病；蝙蝠葛碱；生长抑素

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是中枢神经系统一种常见的退行性疾病，其病理学改变为神经元丧失、弥漫性大脑皮质萎缩、老年斑、神经原纤维缠结和颗粒空泡变性等。临床上AD患者主要表现为进行性记忆力减退、智力下降、定向障碍、人格改变等精神症状。

1　试验材料

1.1试验动物

健康SD雄性大鼠84只，体重(210±20)g，鼠龄12W，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证SCXK（京）2012-0001。

1.2药物与主要试剂

北豆根 (安国市燕兴中药饮片有限公司，批号100826，购买北豆根原材料后由王栋教授从北豆根中提取DAU，纯度是99.6%)；多奈哌齐(重庆植恩药业有限公司，批号20141201)；Aβ1-42(Sigma公司)；Rabbit Anti-SS(武汉博士德生物工程有限公司)；SP即用型试剂盒及DAB显色剂(福州生物技术公司)。

1.3主要仪器

Morris水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所)；江湾IC型立体定向器(第二军医大学)。

2　试验方法

2.1AD模型制备

试验大鼠用1%戊巴比妥钠(40 mg·kg-1)麻醉后，用立体定向仪固定头部，备皮消毒，沿颅顶中线作2cm切口，分离骨膜暴露出头骨，于前囟向后3.0mm，中线左右各旁开2.2mm，用牙科钻打开颅骨，微量进样器针头垂直入2.8mm，将1μL溶液缓慢注入，注射时间为5min，留针5min。同时对照组和假手术组向海马区域注射1μL生理盐水。

2.2分组

AD模型大鼠随机分成模型组、盐酸多奈哌齐组和DAU高、中、低3个剂量组，每组12只。另外设定对照组和假手术组。

2.3给药

造模后第3d开始给药，盐酸多奈哌齐组(0.33mg· kg-1)，DAU高、中、低各剂量组(80、40、20mg·kg-1)，其余3组给予等体积生理盐水，共4W。

2.4Morris水迷宫试验

给药结束后进行Morris水迷宫行为测试。水迷宫为一不锈钢圆形水池，直径150cm，高60cm，内置有机玻璃平台，平台高40cm，底面为6cm×10cm。在水池壁东、西、南、北部位分别标明入水点。液面高于安全平台1cm，水温(22±1)℃，加适量奶粉使水呈乳白色，训练期间环境安静，Morris水迷宫试验的前5d为定位航行试验，使其自由游泳，自动摄像系统记录大鼠寻找平台的逃避潜伏期，60 s后自动停止记录。

2.5多聚甲醛固定

大鼠乙醚麻醉，剪开腹腔、胸腔、右心耳，针头插入左心室，缓慢匀速灌注生理盐水100mL，直到肝变白后缓慢匀速灌注4%多聚甲醛，取大鼠的脑组织进行固定。

3　试验结果

3.1DAU对大鼠定位航行试验逃避潜伏期的影响

定位航行试验训练期间，各试验组大鼠逃避潜伏期总体呈下降趋势，模型组大鼠逃避潜伏期的下降速度相对较慢。统计分析第5d试验结果，与对照组比较，模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05)；与模型组比较，盐酸多奈哌齐组和DAU各剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。

表1　DAU对大鼠定位航行试验逃避潜伏期的影响Tab.1　The effect of DUA on navigation testing escape latency in rats

3.2DAU对大鼠海马区SS表达的影响

与对照组比较，模型组大鼠海马区SS蛋白表达明显减少(P<0.05)；与模型组比较，DAU高、中、低剂量组SS蛋白表达明显增多(P<0.05)。

表2　DAU对AD模型大鼠海马区SS表达的影响Tab.2　The effect of DAU on hippocampus SS expression in AD rat model

4　讨论

AD是逐渐进展的中枢神经系统退行性疾病，临床表现特征为严重的学习记忆功能下降、分析判断能力减退、情绪改变、行为失常等。试验制备AD模型方法包括海马区域注射Aβ1-42、海马区域注射Aβ1-42、腹腔注射D-半乳糖、转基因模型等，因此本试验选择海马区域注射Aβ1-42建立模型。

试验还运用免疫组化法检测DAU对大鼠海马区SS表达的影响，结果表明，与假手术组相比，模型组大鼠海马区SS蛋白表达明显减少，DAU各剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠SS蛋白表达有所增强。提示DAU可能是通过上调SS蛋白表达，增加海马SS免疫阳性神经元的数目和积分光密度，提示DAU对AD模型大鼠脑内SS能神经元有保护作用，进而能够改善AD大鼠学习记忆功能。因此可推断，DAU通过上调AD大鼠海马区SS蛋白表达来改善AD大鼠的学习记忆能力。

［1］ Lin TW，Shih YH，Chen SJ，et al.Running exercise delays neurodegeneration in amygdala and hippocampus of Alzheimer's disease(APP/PS1)transgenic mice［J］. Neurobiol Learn Mem.2015，2(118)：189-197.

［2］费洪新，高音，孙丽慧，等.黄芪多糖对阿尔茨海默病小鼠海马组织的影响［J］.中国老年学杂志，2015，35(16)：4426-4429.

［3］费洪新，高音，孙丽慧，等.蝙蝠葛酚性碱对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆和海马的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2015，21(7)：91-94.

［4］费洪新，周忠光，姜波，等.补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠学习记忆及海马APP蛋白的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2014，20(20)：101-104.

［5］费洪新，周忠光，韩玉生，等.补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障通透性的影响［J］.时珍国医国药，2015，26(5)：1028-1031.

The Effect of Dauricine on Learning and Memory Ability and Hippocampus Somatostatin Expression of Alzheimer's Disease in Rats

ZHANGYing-bo1,PANSi-wen1,YUChun-lei1,FEI Hong-xin1,ZHANGXiao-jie1,ZHONGLi-li2,ZHOUZhong-guang2
(1.Qiqihar Medical College,Qiqihar 161006,China;2.Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China)

To investigate dauricine(DAU)on learningand memory ability of Alzheimer's disease(AD)rats.The 84 SD rats were randomlydivided into control group,sham operation group,model group,donepezil hydrochloride group and DAU high,medium and low dose group,using three-dimensional positioning system to put Aβ1-42 into hippocampus with directional injection and prepared AD animal model.Through the navigation testing of Morris water maze to test the ability of rats'learning and memory.The results showed that compared with sham-operated group,the average escape latency of model group was significantly longer(P<0.05),hippocampus SS protein expression in rat was significantly reduced(P<0.05).Therefore,through upregulation in hippocampus SS protein expression of AD rats,DAU can possibly improve learning and memory ability ofADrats,and play a role in prevention ofAD.

Alzheimer's disease;Dauricine;Somatostatin

R285

A

1674-8646（2016）01-0014-02

2015-10-19

齐齐哈尔医学院院内科研基金；黑龙江中医药大学博士后基金(LBH-Z14196)；黑龙江省青年基金(QC2015101)

张英博(1973-)，男，博士，副教授，主要从事痴呆、肿瘤、肝纤维化研究。