山东省部分地区蛋种鸡鸡白痢和滑液囊支原体病的流行病学调查

牛玉娟，王　亮，2，王鹏飞，张桂华，刘思当（. 山东农业大学，山东泰安　27000；2. 新泰市畜牧兽医局，山东新泰　27200）

山东省部分地区蛋种鸡鸡白痢和滑液囊支原体病的流行病学调查

牛玉娟1，王亮1，2，王鹏飞1，张桂华1，刘思当1
（1. 山东农业大学，山东泰安271000；2. 新泰市畜牧兽医局，山东新泰271200）

［目的］了解鸡白痢和滑液囊支原体病在山东省部分地区种鸡场的流行情况。［方法］采用血清平板凝集试验，对济宁、泰安、聊城和菏泽4个市13个种鸡场16 312只鸡进行了鸡白痢沙门氏菌感染调查，对泰安和聊城2个市6个种鸡场2 849只鸡进行了鸡滑液囊支原体感染调查，并对其中的6个种公鸡场进行了鸡白痢沙门氏菌和滑液囊支原体共感染调查。对鸡白痢和滑液囊支原体血清阳性的鸡只进行了临床病理组织学检查。［结果］鸡白痢的平均感染率为8.39%（1 368/16 312），其中公鸡的感染率为9.32%（398/4 270），母鸡的感染率为8.06% （970/12 042），90日龄以下鸡的感染率为11%（206/1 872），90日龄以上鸡的感染率为8%（1 160/14 440）。滑液囊支原体的平均感染率为16.71%（476/2 849），其中公鸡感染率为27.11%（398/1 409），母鸡感染率为6.53% （94/1 440），90日龄以下鸡的感染率为7.26%（119/1 640），90日龄以上鸡的感染率为29.53%（357/1 209）。鸡白痢和滑液囊支原体的共感率为0.91%（11/1 209）。疑似病鸡病理学检查，观察到以白痢结节为特征的鸡白痢和跗关节、趾关节及胸部滑膜囊炎性肿胀为特征的滑液囊支原体病。［结论］山东省部分种鸡场普遍存在鸡白痢和滑液囊支原体病；青年鸡、产蛋鸡都不同程度地受到鸡白痢和鸡滑液囊支原体病的威胁；对这两种垂直传染性疾病的净化，势在必行。

鸡白痢；鸡滑液囊支原体病；血清学调查；病理变化

鸡白痢（Pullorum Disease，PD）由鸡白痢沙门氏菌引起的，各种品种及各年龄段的鸡均易感的，最为重要的“蛋传性”、细菌性禽类疾病之一［1］。感染鸡不但可通过空气、饲料等进行群间传播，还能通过种鸡垂直传播给雏鸡。耐过的种鸡长期带菌，产的蛋也带菌，可周而复始地代代相传［2］，严重威胁养鸡业的健康发展。沙门氏菌病属于人兽共患病，可造成巨大的直接及间接损失［3-4］。鸡滑液囊支原体病是由鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviane，MS）引起的，各日龄段的鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子等均可感染的，以关节渗出性滑液囊膜炎及腱鞘滑膜炎为特征的慢性传染性疾病，可造成雏鸡、青年鸡生长发育迟缓及胴体降级，产蛋鸡生产性能下降，鸡群残次率增加，严重的易继发感染其他疾病而死亡。鸡白痢和鸡滑液囊支原体病是当前我国鸡群中常见的两种垂直传播性疫病。这两种病的疫苗免疫效果和药物治疗效果均不佳，不能彻底治愈［5-6］。目前最有效的控制方法是检测净化。为了解山东省部分地区父母代种鸡、商品代蛋鸡鸡白痢和滑液囊支原体的感染情况，采用血清平板凝集实验对部分鸡场进行检测，为两病的净化提供一定的流行病学依据。

1　材料与方法

1.1 材料

1.1 .1 诊断试剂。鸡白痢、鸡伤寒多价染色平板凝集试验抗原，标准阳性血清、阴性血清，鸡滑液囊支原体平板凝集抗原，均由北京中海动物保健科技公司生产，生产批号为201401。

1.1.2 样品采集。在菏泽、济宁、泰安、聊城4个市13个父母代种鸡场，共采集16 312份样品，鸡场规模从1万到4万不等。现场翅静脉采血，对所有调查的鸡，记录其所在棚舍、鸡只编号、鸡只精神状态等。所有采样鸡群均未接种过鸡白痢和滑液囊支原体病疫苗。在所有鸡场的血清调查结束后，从13个种鸡场的鸡白痢和滑液囊支原体血清阳性的鸡只中，每个场选择5只消瘦、精神萎靡的病鸡进行剖杀，观察剖检病变及病理组织学病变，并进行沙门氏菌的分离鉴定。

2.2 方法

2.2.1 血清平板凝集试验。实验温度在20～25 ℃，用移液器吸取30 µL被检血清与抗原充分混匀，计时2 min，判断结果。同时设阳性和阴性血清对照。

2.2.2 病理学检查。取鸡白痢或鸡滑液囊支原体血清抗体阳性病鸡，剖检观察心、肝、脾、肺、肾、胃肠等器官组织病变，并取组织病料于10%福尔马林溶液固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜观察组织病理学病变。

2.2.3 沙门氏菌分离鉴定。将剖检的65只病鸡的肝脏取出，剪碎，置于5 mL的LB增菌液中，37 ℃摇菌18～24 h。将扩菌液接种于SS琼脂培养基，37 ℃培养24 h。挑取可疑菌落继续在SS培养基上纯化。

2.2.4 PCR鉴定。针对鸡白痢沙门氏菌，设计了D血清型的特异性基因RFBS的引物，上游引物F：5'-ACTGGCGTTATCCCTTTCTCTGCTG-3'，下游引物R：5'-ATGTTGTCCTGCCCCTGGTAAGAGA-3'，预期条带为300 bp，反应体系为25 µL，模板为纯化后的沙门氏菌单菌落DNA。扩增程序为94 ℃预变性5 min，94 ℃变性1 min，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，共30循环；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存，扩增的产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

表1　引物的设计与合成

2　结果

2.1 鸡白痢沙门氏菌和滑液囊支原体感染情况

2.1.1 鸡白痢沙门氏菌感染情况。先后调查了菏泽、济宁、泰安、聊城4个市13个父母代种鸡场。13个养殖规模不同（1万～4万）、管理水平不同的蛋种鸡场中，均有鸡白痢沙门氏菌感染，总阳性率为8.4%（1 368/16 312），其中公鸡感染率为9.3% （398/4 270），母鸡感染率为8.1%（970/12 042），详见表2。90日龄以下鸡的平均感染率为11%（206/1 872）；养殖规模不同，感染率也不等（0.5%～38.3%），差异较大，详见表3；90日龄以上的鸡平均感染率为8%（1 160/14 440），平均阳性率为1.96%～15.7%，其中公鸡为1.6%（190/2 398），母鸡为8.1%（970/12 042），详见表4和表5。

表2　山东省部分地区鸡白痢感染情况

表3　90日龄以下的海兰褐父母代种鸡群鸡白痢阳性情况

2.1.2 鸡滑液囊支原体感染情况。本次共调查了2个市的6个种鸡场，共计2 849只鸡，平均感染率为16.7%（476/2 849），感染率从6.5%～39.7%不等，详见表6；不同日龄的鸡群感染率也显著不同，90日龄以下的鸡感染率为7.3%（119/1 640），90日龄以上的鸡感染率为29.5%（357/1 209），详见表7；公鸡的平均感染率为27.1%（398/1 409），母鸡的平均感染率为6.5%（94/1 440），详见表8。

表4　90日龄以上的海兰褐父母代种鸡群鸡白痢阳性情况

表5　90日龄以上鸡的感染情况

表6　MS感染的调查情况

表7　90日龄以下与以上的鸡MS感染情况

表8　性别不同的鸡MS感染情况

2.1.3 混合感染情况。共调查了2个市6个鸡场1 209只种公鸡的鸡白痢和滑液囊支原体共感染情况，发现有11只鸡共同感染了这2种病原体，共感染率为0.9%；不同鸡场的共感染率相差不大，在0～2%之间，详见表9。

表9　鸡白痢和滑液囊支原体病混合感染情况

2.2 病理变化

2.2.1 鸡白痢的剖检病理变化。取鸡白痢血清学阳性，且鸡只消瘦、精神萎靡的病鸡65只，剖检观察器官组织病变。典型病鸡的心冠脂肪呈胶冻样萎缩，心肌表面有大小不一的黄白色结节（图1-A、1-B）。肺脏淤血，呈暗红色，被膜下及切面分布着大小不一、质地硬实的黄色结节（图1-C）。脾脏显著肿大，呈暗红色，被膜下可见均匀散在灰白色坏死灶，切面质脆，散在白色坏死灶（图1-D）。胰腺和肾脏表面也可见米粒至豆粒大小的黄白色结节（图1-E、1-F）。肝脏肿大淤血，呈青铜色，表面布满灰白色坏死点，胆囊充盈（图1-G）。肌胃表面及切面肌肉内存在黄豆粒大小或更大的黄白色结节（图1-H、1-I）。十二指肠和直肠处黏膜肿胀，散在黄白色隆起的结节（图1-J、1-K、1-L）。

图1　鸡白痢的剖检病理变化

2.2.2 鸡白痢的病理组织学变化。心肌纤维间呈大量巨噬细胞、淋巴细胞、异嗜性粒细胞灶状浸润，结缔组织增生，局部心肌细胞坏死消失（图2-A、2-B）。肺脏的肺房、二级和三级支气管等正常结构遭到破坏，出现大小不同的灰白色肉芽肿结节（图2-C）。脾脏白髓坏死，结构模糊，散在大量坏死崩解的淋巴细胞；坏死灶呈丝网状、条索状或片状均质红染的结构，正常脾脏组织几乎完全消失（图2-D、2-E）。胰腺和肾脏实质细胞坏死崩解，呈现大量巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生（图2-F、2-G）。肝细胞出现灶状坏死，坏死区内呈网状内皮细胞（巨噬细胞）、淋巴细胞和异嗜性粒细胞浸润（图2-H、2-I）。肌胃肌层有巨噬细胞、淋巴细胞浸润，局部平滑肌细胞坏死消失（图2-J）。肠黏膜上皮细胞坏死脱落，肠腺坏死，固有层、黏膜下层及肌层呈大量巨噬细胞、淋巴细胞浸润增生（图2-K、2-L）。

图2　鸡白痢的病理组织学变化（HE染色）

2.2.3 MS剖检病变病理变化。病鸡跗关节肿胀，剪开皮肤可见滑液囊肿胀及靠近末端处有水泡样的肿胀，关节腔内有大量渗出液，呈黏稠黄色胶冻样或有黄色干酪样物质（图3-A），翅关节、龙骨突处也有囊肿（图3-B、3-C）；气囊增厚，有气囊炎。

图3　MS剖检病变病理变化

2.2.4 MS病理组织学变化。在患滑膜炎的关节腔和腱鞘中，可见异嗜性白细胞和纤维素性浸润（图4-A、4-B）；滑液囊膜因绒毛形成，其下层淋巴细胞和巨噬细胞浸润而增生，滑膜增厚（图4-C、4-D）。

图4　MS病理组织学变化

2.3 沙门氏菌的分离鉴定结果

疑似菌在SS培养基上形成了无色或是中心带黑色、边缘整齐、光滑湿润的圆形小菌落（图5-A）。65个平板中，通过初步培养，共有55个平板出现了疑似菌落。PCR扩增约扩出300 bp的片段。50株菌的扩增结果如图5-B。在泗水A场和菏泽A场的被剖杀鸡中没有分离到沙门氏菌。细菌分离结果与鸡白痢平板试验结果符合率为84.6%，病理组织学检查与鸡白痢平板凝集试验的符合率达90%。

3　讨论

本次血清学调查采用了血清平板凝集反应试验。该方法操作简单、方便，适用于规模化养殖场开展鸡白痢和滑液囊支原体病的调查。在此基础上，随机剖检血清阳性、稍显消瘦的病鸡，发现病鸡的剖检变化与鸡白痢和滑液囊支原体病基本吻合，最终通过细菌分离鉴定进一步确诊。总体来看，平板凝集试验血清阳性结果与病鸡的剖检结果吻合率达90%，与细菌分离鉴定结果的吻合率为84.6%，与其他实验结果相一致［6］。13个场都存在鸡白痢血清阳性，但是在2个场没有分离到沙门氏菌。这2个场是多年经营的种鸡场，长期以来形成了自己的用药程序，所以导致鸡体内的沙门氏菌不易被分离到；也可能是该场的鸡群处于前期感染，因有抗体存在，导致病原被清除。

图5　沙门氏菌的分离鉴定结果

从调查的13个鸡场的鸡白痢沙门氏菌感染情况来看，青年鸡和产蛋鸡都存在一定比例的感染，90日龄以下的鸡群比90日龄以上的感染率高，即育成鸡、青年鸡感染较重。这与个别产蛋鸡群在产蛋前进行过沙门氏菌的净化及病残鸡的严格淘汰有关。此外，阳性鸡在开产后的上升期死亡率较高也是一个重要原因。8个场90日龄以下的种公鸡鸡白痢阳性率差异较大，可能与个别场之前进行过种公鸡的鸡白痢净化有关。随着养殖水平的不断提高，养殖场疫病防控观念也在逐步改善，有的场已着手进行鸡白痢净化。90日龄以上的鸡感染率相差不大，公鸡和母鸡的检出率大致相同。在检测过程中发现，如果一个舍的一只鸡呈鸡白痢阳性，那么周围其他笼的鸡大多也呈阳性。这是因为鸡白痢会排菌，污染周围的环境，经水平途径传播，鸡群日龄越大，水平感染的机会就越多［7］。

通过对山东省部分地区鸡群鸡滑液囊支原体血清学调查，发现鸡群血清阳性率最高的可达39.7%，最低的也为6.5%，整体平均阳性率为16.7%，说明这些种鸡场均存在不同程度的鸡滑液囊支原体感染。本次调查发现各鸡场场主均希望对公鸡进行MS净化，这是现阶段无法做到全群净化前提下的明智之举。从检测数据可以看出，公鸡的感染率远高于母鸡，所以MS对公鸡的危害性更大。分析其原因可能与公母鸡的饲养管理方式不同，或与公母鸡的易感性不同有关。比较不同日龄鸡群鸡滑液囊支原体的调查结果，发现随着日龄的增长，阳性率也随之增高。这说明阳性鸡在饲养过程中不断排毒，通过水平传播的方式感染同群易感鸡只（抵抗力弱者），使鸡群阳性率不断上升。

［1］ 谈建明，刘福安. 禽白血病检测方法的建立和比较［J］.上海农学院学报，1990，8（2）：101-107.

［2］ 姚远，张帆，郗正林，等. 我国鸡白痢沙门氏菌的流行情况及净化现状［J］. 当代畜牧，2012（10）：11-13.

［3］李永明，程振涛，陈锡龙. 蛋鸡群主要传染病的免疫监测与结果分析［J］. 山地农业生物学报，2004（6）：479-482.

［4］ 张丹俊，沈学怀，赵瑞宏，等. 禽白血病和鸡白痢净化与非净化鸡群生产性能差异性研究［J］. 安徽农业大学学报，2013，40（5）：695-700.

［5］王真，成杰，沈思，等. 禽沙门氏菌病防控策略及其疫苗研究概述［J］. 北京农学院学报，2015（2）：133-136.

［6］邵国青. 家禽支原体的防控现状及研究新进展［J］. 中国家禽，2009（11）：5-10.

［6］ 瞿慧，戴连群，王恒安，等. 某山鸡场鸡白痢感染抗体的血清学调查［J］. 上海畜牧兽医通讯，2015（3）：34-35.

［7］ 孙和梅. 延庆县柴鸡鸡白痢沙门氏菌病的调查及综合防治［D］.北京：中国农业科学院，2009.

（责任编辑：朱迪国）

Epidemiological Investigation on Pullorosis and Mycoplasma Synovial of Laying Breeder Hens in Part Area of Shandong Province

Niu Yujuan1，Wang Liang1，2，Wang Pengfei1，Zhang Guihua1，Liu Sidang1
（1. Shandong Agricultural University，Tai'an，Shandong 271000；2. Xintai Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Xintai，Shandong 271200）

［Objective］To understand the prevalence of pullorosis and mycoplasma synoviae on breeding chicken farms in some areas of Shandong province. ［Methods］By the method of serum plate agglutination，16 312 serums collected from 13 farms of Jining，Taian，Liaocheng and Heze were tested for pullorosis infection，and 2 849 serums collected from 6 farmsof Taian and Liaocheng were tested for mycoplasma synoviae infection. Meanwhile，the co-infection status of pullorosis and mycoplasma synoviae on 6 breeder rooster farms among the above mentions farms were also investigated. ［Results］The survey found that the average infection rate of pullorosis was 8.39%（1 368/16 312）with the rate of cocks being 9.32%（398/4 270），hens 8.06%（970/12 042），chicken below 90-day-old 11%（206/1 872），and chicken more than 90-day-old 8%（1 160/14 440）. The average infection rate of mycoplasma synoviae was 16.71% （476/2 849）with the rate of cocks being 27.11%（398/1 409），hens 6.53%（94/1 440），chicken below 90-day-old 7.26% （119/1 640），and chicken more than 90-day-old 29.53%（357/1 209）. The co-infection rate of the two disease was0.91% （11/1 209）. By clinical pathological examination，the pullorosis was characterized by nodes and mycoplasma synoviae was characterized by joint swelling. ［Conclusion］The research shows that pullorosis and mycoplasma diseases are popular on some breeding chicken farms of Shandong province，and the young roosters and laying hens are still at the risk of infection with these two diseases，so it is imperative to clean up these two vertica linfectious diseases from chicken farms.

pullorum disease；mycoplasma synoviae disease；serological investigation；pathological changes

S852.65

A

1005-944X（2016）08-0021-06

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.08.006

刘思当

注：牛玉娟、王 亮同为第一作者