搅拌棒萃取-液质联用法检测大蒜中啶虫脒

倪永付，王志宏，朱莉萍，高洁，闫秋成（.济宁出入境检验检疫局，山东济宁7000；.龙口出入境检验检疫局，山东龙口65700）



搅拌棒萃取-液质联用法检测大蒜中啶虫脒

倪永付1，王志宏2，朱莉萍1，高洁1，闫秋成1
（1.济宁出入境检验检疫局，山东济宁272000；2.龙口出入境检验检疫局，山东龙口265700）

建立搅拌棒吸附萃取结合液相色谱-串联质谱法检测大蒜中啶虫脒残留。样品经搅拌棒萃取，解吸液解吸后，上机检测。采用Hypersil GOLD-1.9 μm，50 mm×2.1 mm（i.d）色谱柱分离，在选择反应监测模式下检测，外标法定量。啶虫脒在浓度0.005mg/L～0.2mg/L范围内线性关系良好，相关系数r=0.9998，方法检测限为0.005mg/kg。在不同添加水平下，其平均回收率为82.3%～92.2%，变异系数为7.73%～9.01%。该方法简便、快速，适用于大蒜中啶虫脒残留的批量检测。

搅拌棒萃取；液相色谱-串联质谱；大蒜；啶虫脒

搅拌棒吸附萃取技术（Stir Bar Sorptive Extraction，SBSE）是Erik Baltussen和Pat Sandra等人于1999年提出的一种新型样品前处理技术［1］，它利用搅拌棒表面的吸附材料，在搅拌棒自身搅拌的同时完成吸附萃取，近年来得到广泛的研究和应用［2-4］。啶虫脒（Acetamiprid）是继吡虫啉和烯啶虫胺后的又一个烟碱类杀虫剂。其机理是作用于害虫神经结合部后膜，通过与胆碱受体结合使昆虫异常兴奋，全身痉挛、麻痹而死［5］，对有机磷、氨基甲酸酯，以及拟除虫菊酯类等农药品种产生抗药性的害虫具有较好效果。关于啶虫脒的检测已有相关文献报道［6-14］，但搅拌棒吸附萃取技术用于啶虫脒检测的方法鲜见报道，本文应用搅拌棒吸附萃取技术结合液相色谱-串联质谱法检测大蒜中啶虫脒残留，取得了较好的效果。

1　材料与方法

1.1仪器和试剂

TSQ Quantum Access高效液相色谱-串联质谱仪：美国Thermo公司；HS260B型电动摇床、IKA MS3基本型旋涡混匀器：德国IKA公司；CR22GⅢ型高速冷冻离心机：日本Hitachi公司；R215型旋转蒸发仪：瑞士BUCHI公司；搅拌棒：PDMS涂层、PPESK涂层。

甲醇、乙腈：均为色谱纯；试验用水：超纯水；无水硫酸钠：分析纯（用前在500℃马弗炉内烘5 h，冷却取出装瓶备用）；啶虫脒标准品：购于德国Dr.公司。

1.2标准溶液制备

准确称取啶虫脒标准品10 mg，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解、定容，配制浓度为100 mg/L的标准贮备液。然后移取上述标准贮备液1.0 mL，置于100 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制浓度为1 mg/L的中间液，使用时再稀释为系列浓度的混合标准工作液。

1.3仪器条件

1.3.1色谱条件

色谱柱：Hypersil GOLD-1.9 μm，50 mm×2.1 mm（i. d）；柱温：30℃；进样体积：5 μL；流动相：A为甲醇，B为0.1%甲酸水；流动相梯度洗脱程序：0～3 min，5% A；3 min～4 min，5%～60%A；4 min～5 min，60%～90% A；5 min～6 min，90%A；6 min～9.1 min，90%～5%A；9.1 min～10 min，5%A；流速：0.2 mL/min。

1.3.2质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子模式；检测方式：选择反应监测；电喷雾电压：4 500 V；鞘气压力：2.07×105Pa；清扫气压力：0；辅助气压力：6.89× 104Pa；离子源温度：350℃。

1.4样品处理

称取样品10g（精确到0.01g），置于100mL塑料离心管中，加40mL乙腈，加入5g氯化钠，用玻璃棒充分搅拌均匀，于均质机上高速均质1min，9000r/min高速离心6 min，将上清液转移至150 mL梨形瓶中，40℃旋转蒸发至约1mL，用超纯水稀释至10mL用于SBSE萃取。

样品萃取条件：PPESK搅拌棒；样品溶液体积：10 mL；萃取时间：30 min；盐浓度：5%；振荡速度：180 r/min。样品解吸条件：解吸液为甲醇+水（8+2）；解吸时间6 min。

2　结果与讨论

2.1萃取条件的优化

2.1.1萃取涂层的选择

本试验考察了聚醚砜酮（PPESK）和聚二甲基硅氧烷（PDMS）两种萃取涂层对啶虫脒的萃取效率。其他条件不变，分别用这两种涂层的搅拌棒对浓度为10 μg/L的标准溶液进行萃取20 min，然后用解吸液解吸6 min，上机测定，结果见图1。

图1　不同涂层对啶虫眯的萃取效率影响Fig.1　Effect of different coating on the extraction efficiency of acetamiprid

从图中可以看出，PPESK涂层对于啶虫脒有较好的萃取效果，而PDMS涂层的搅拌棒萃取效果不理想。因此，本试验选取PPESK涂层的搅拌棒进行研究。

2.1.2萃取时间的确定

配制5 μg/L的标准溶液，设置萃取时间分别为5、10、20、30、40、50 min，萃取后用解吸液解吸6 min，上机测定。以峰高对萃取时间作图，如图2所示。

图2　萃取时间对啶虫脒萃取效率影响Fig.2　Effect of extraction time on the extraction efficiency of acetamiprid

结果表明，从5 min到30 min，随着萃取时间的增加，搅拌棒对啶虫脒的萃取效率逐渐增加，在30 min时达到峰值。随后，搅拌棒对啶虫脒的萃取效率随时间的增加而下降。因此，本试验选择30 min作为啶虫脒的萃取时间。

2.1.3离子强度的确定

试验研究了在溶液中加入NaCl来调节离子强度，考察其对萃取效率的影响，分别加入浓度为0%、5%、10%、15%、20%、25%的NaCl，对浓度为5 μg/L的标准溶液进行萃取，结果如图3所示。

图3　离子强度对啶虫脒的萃取效率影响Fig.3　Effect of ionic strength on the extraction efficiency of acetamiprid

在0%～5%NaCl浓度范围内，随着离子强度的增加，搅拌棒对啶虫脒的萃取效率呈上升趋势；5%～15%浓度范围内，萃取效率呈下降趋势；15%～25%浓度范围内，对啶虫脒的萃取接近为0。为获得最佳萃取条件，本试验选择加入5%NaCl来调节离子强度。

2.2质谱条件的优化

首先对两种化合物进行质谱条件的优化，选择ESI+作为电离模式，对标准物质先进行一级质谱分析（Q1扫描），得到分子离子峰，选取相应的母离子峰，对其子离子进行二级质谱分析（Q2扫描），得到碎片离子信息。然后，再对得到的质谱参数在选择反应监测（SRM）模式下优化，得到相应的碰撞能量。最后确定啶虫脒的定性离子对为223.2/90.4、223.2/126.3，对应的碰撞能量分别为31、19 eV；定量离子对为223.2/126.3。

2.3色谱条件的优化

取两种化合物的混合标准使用液，进样5 μL，分别测试甲醇-水、乙腈-水，以及加入不同浓度的甲酸，调节各组分的比例和流速对色谱条件进行优化。结果表明，在甲醇-0.1%甲酸水为流动相，流速为0.2 mL/min，梯度洗脱的条件下，啶虫脒有较好的峰形和响应值。啶虫脒的SRM图见图4。

图4　啶虫脒的SRM图Fig.4　The SRM chromatogram chart of acetamiprid

2.4方法的线性范围及检测限

分别配制浓度为0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2 mg/L的啶虫脒标准水溶液，按优化后的试验条件进行萃取、解吸，然后上机测定。结果表明：在0.005 mg/L～0.2 mg/L浓度范围内呈现较好的线性关系，线性方程为Y=-3.66×104+4.89×105X，相关系数r=0.999 8。以3倍信噪比确定方法的检测限，为0.005 mg/kg。

2.5基质样品试验

为了验证方法的准确性，进行了基质样品试验。取阴性大蒜样品，准确称取10 g（精确至0.01 g），添加0.005、0.01、0.05 mg/kg 3个水平的啶虫脒标准溶液，每个水平平行测定6次。在优化的试验条件下进行前处理并上机测定，计算基质样品加标回收率和精密度，采用相同试验条件下的空白基质标准品进行定量。回收率和精密度见表1。

表1　方法的回收率和精密度（n=6）Table 1　Recoveries and precision of the method（n=6）

3　结论

本研究采用搅拌棒萃取-液相色谱-串联质谱法检测大蒜中的啶虫脒残留量。通过对萃取条件及仪器条件进行优化，确定了萃取涂层、萃取时间、离子强度以及最佳的液相色谱、质谱条件。本文所建立的方法能够减少了杂质干扰，色谱峰分离效果好，具有良好的精密度、较低的方法检出限和较高的回收率，适用于大蒜中啶虫脒残留的批量检测。

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Determination of Acetamiprid in Garlic by SBSE Combining with LC-MS/MS

NI Yong-fu1，WANG Zhi-hong2，ZHU Li-ping1，GAO Jie1，YAN Qiu-cheng1
（1.Jining Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Jining 272000，Shandong，China；2.Longkou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Longkou 265700，Shandong，China）

A method was established to determine the acetamiprid residues in garlic by stir bar sorptive extraction combining with liquid chromatography-mass spectrometry method.The sample was extracted by SBSE.After being desorbed，the sample was performed on Hypersil GOLD-1.9 μm，50 mm×2.1 mm（i.d）column.The analysis was carried out in the selected reaction monitoring and external standard method was used for quantification.The calibration curve of the acetamiprid was good linear from 0.005 mg/L to 0.2 mg/L with the correlation coefficient r=0.999 8，the detection limit of this method was 0.005 mg/kg.In different concentrations，the average recoveries of this method were 82.3%-92.2%and the variability coefficient were 7.73%-9.01%.The method is easy，rapid，and can be applied to the determination of acetamiprid in garlic.

stir bar sorptive extraction；liquid chromatography-mass spectrometer；garlic；acetamiprid

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.13.032

山东检验检疫局科研项目（SK201232；SK201426）

倪永付（1983—），男（汉），工程师，硕士，研究方向：食品检验。

2015-06-09