真空-超声提取联用高效液相色谱分析黄连中的金胺*

刘育坚，许志刚

(昆明理工大学理学院，云南　昆明　650500)



真空-超声提取联用高效液相色谱分析黄连中的金胺*

刘育坚，许志刚

(昆明理工大学理学院，云南昆明650500)

采用真空-超声技术提取黄连中草药中的金胺。流动相为乙腈-0.05 mol/L醋酸铵水溶液(加冰醋酸调节pH=4.5)，两者体积比为40:60，流速为1.0 mL/min，检测波长432 nm，柱温为30 ℃。该方法能够有效检测样品中的金胺，线性方程为Y=-0.00084+0.00103X，相关系数R=0.9995，回收率在99.03%～104.02%之间。与常压超声提取对比，真空-超声法的提取效率优于常压超声提取的效率。

金胺；真空-超声提取；黄连；高效液相色谱

黄连为毛茛科植物黄连、三角叶黄连、峨嵋野连或云南黄连的根茎，其味极苦，俗语云“哑巴吃黄连，有苦说不出”。黄连具有泻火、燥湿、解毒、杀虫之功效，属寒性药材[1]。目前，市场对中药材需求上涨。某些生产厂家在利益的驱使下，对中药材掺假造假，较为常见的是染色掺假。而使用工业染剂对药材进行染色加工，以次充好的现象屡见不鲜[2]。常见的工业染剂金胺，可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，人接触有致癌的风险[3]。因此，为了规范食品药品市场的监督管理，2008年，我国在《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一批)》的通知中，明确规定工业染剂金胺等物质禁止作为食品添加剂使用[4]。

因为染色中药对人体具有较大的危害，对中药中的染色剂进行相关检测是非常必要的，近年来所报道的文献大多以色谱法为主，目前其样品前处理方法为超声提取[5-7]。本课题组采用真空-超声法提取中草药中的有效成分具有较好的效果，其提取率优于常压超声提取法[8]。本文在前期工作的基础上，采用真空-超声法提取黄连样品中的金胺，然后联用高效液相色谱进行测定，并与常压超声提取的结果进行对比。结果表明，采用真空-超声提取法有利于提高提取效率。

1　实验部分

1.1实验主要仪器、试剂与材料

Dionex Ultimate 3000高效液相色谱仪,美国戴安公司;C18色谱柱(J&K Scientific LTD，5 μm，4.6 mm ×250.0 mm)，FA2004电子天平,上海舜宇恒平科学仪器有限公司;SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵, 巩义市予华仪器有限公司;PS-20超声波清洗机,东莞市洁康超声波设备有限公司。

金胺(90%),购于西亚试剂有限公司;乙腈(色谱级);其它试剂为分析纯，水为娃哈哈纯净水。黄连样品分别购于昆明市三家中药店。

1.2分析方法

1.2.1样品处理方法

准确称取1.00 g 黄连样品，放置于50 mL 的圆底烧瓶中，加入20 mL 的乙醇溶液，圆底烧瓶上端连接玻璃三通，其中一端连接真空泵，通过真空泵控制提取体系的真空度，并且使用三通旋钮作为体系的开关控制。在真空超声提取20 min 后，关闭玻璃三通活塞，取下圆底烧瓶，提取溶液进样前用0.45 μm 滤膜过滤。

1.2.2标准溶液的配制

准确称取金胺适量，加入乙醇配制标准溶液，并逐级稀释成浓度分别为10、50、100、200、500 μg/L的标准溶液，置于冰箱冷藏室保存，1个月内使用。

2　实验结果与讨论

2.1色谱分析方法的建立

参考了文献[9]的色谱分析方法，以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，两者的体积比为10:90。但在实际操作中，金胺在实际样品中的色谱分离效果并不明显，1.0 mg/L标样的色谱分析图如图1(a)所示，金胺的色谱峰虽然尖锐，但色谱峰受到溶剂峰的干扰，带来定量分析的不准确。参考文献[10]的色谱分析方法，以乙腈-0.05 mol/L醋酸铵水溶液(加冰醋酸调节pH=4.5)为流动相，两者的体积比为40:60，1.0 mg/L标样的色谱分析图如图1(b)所示，金胺的色谱峰分离效果较好，基本无干扰。因此，确定色谱分析方法为：乙腈-0.05 mol/L醋酸铵水溶液(pH=4.5)为流动相，两者的体积比为40:60，流速为1.0 mL/min，检测波长为432 nm，柱温为30 ℃，进样体积为20 μL。金胺的线性方程为Y=-0.00084+0.00103X，相关系数为R=0.9995。

图1　不同色谱条件下金胺的色谱分析图

2.2样品分析

对从市面上随机购买的三种黄连样品进行分析，按照上述1.2.1中的方法进行样品处理，再按照2.1的色谱方法进行检测，结果未从三种市售药材中检出金胺。为进一步验证所建立方法的可靠性，分别对三种市售黄连加入不同浓度的金胺对照品进行不同水平的加标回收试验。

2.3加标回收试验

分别用电子天平准确称量三种黄连样品1.00 g，置于50 mL 圆底烧瓶中，分别加入100 μL 5 mg/L、20 mg/L、200 mg/L金胺溶液，其加标水平分别为0.5、2.0和20.0 mg/kg。放置一段时间后，加入20 mL 乙醇溶液浸泡过夜。采用真空-超声提取20 min，进样前提取液用0.45 μm 滤头过滤，直接进行色谱分析。加标20.0 mg/kg的色谱分析图如图2所示。分析结果如表1所示：真空-超声提取法的回收率在99.03%～104.02%之间，相对标准偏差在0.42%～0.98%(n=5)之间，而常压超声提取法的回收率仅在67.03%～84.85%(n=5)之间，因此真空-超声提取法的回收率的效果明显优于常压超声提取的结果。分析结果表明：真空-超声提取法有利于黄连药材中金胺的快速溶出，可以提高提取效率，真空环境还可以避免分析物的分解、氧化等。因此，真空-超声提取法能很好的应用于中草药的提取分析。

图2　黄连中金胺的色谱分析图

黄连加入量/(mg/kg)真空-超声提取法回收率/%RSD(n=5)/%常压超声提取法回收率/%RSD(n=5)/%1号0.599.030.8471.530.742.0102.560.4984.500.6220.099.030.5082.110.932号0.5100.660.9574.170.832.0102.720.4272.120.9920.0103.780.7581.950.873号0.599.500.7867.030.792.0102.560.8084.850.8920.0104.020.9883.490.85

3　结　论

建立了真空-超声提取黄连样品中金胺的前处理方法，并联用高效液相色谱进行测定，同时将结果与常压超声法提取法进行对比。结果表明，真空-超声法提取比常压超声法提取效率高，真空-超声提取法有利于黄连中的金胺的溶出。所建立的真空-超声提取法可用于中药材的提取和分析，不仅可以获得更好的提取效率，还能避免分析物的氧化、分解。

[1]孙振,彭淑红,嵇琴,等.黄连药性研究[J].中国实验方剂学杂志,2015(11):221-223.

[2]蒋玲,饶伟文.中药染色掺假的研究进展[J].首都医药,2011(16):16-18.

[3]楼飞群,张谦.高效液相色谱法检测黄芩饮片及其制剂百咳静糖浆中金胺O的含量[J].中国中医药咨讯,2010,2(16):119-120.

[4]肖凌,侯俊杰,聂晶,等.元胡止痛系列制剂中金胺O的检测[J].药物分析杂志,2012(11):2008-2011.

[5]翟海云,刘振平,余晓,等.高效液相色谱法测定中药中的五种禁用黄色工业染料[J].化学研究与应用,2014(1):135-139.

[6]莫连峰,饶伟文,赵纯玉.高效液相色谱法测定染色黄芩中金胺的含量[J].中国药业,2007,16(15):29-30.

[7]余新启,何轶,鲁静,等.金胺O染色物在中成药中的检测方法研究[J].药物分析杂志,2014,34(1):130-135.

[8]许志刚,陈云丽,张仙丽,等.超声波提取-高效液相色谱法测定茶叶中的槲皮素[J].昆明学院学报,2013,35(3):66-68.

[9]Wang Zhibing,Zhang Liyuan,Li Na. Ionic liquid-based matrix solid-phase dispersion coupled with homogeneous liquid-liquid microextraction of synthetic dyes in condiments[J]. Journal of Chromatography A, 2014(1348):52-62.

[10]吴萌,饶伟文.黄连上清丸中金胺O的检测方法研究[J].中国药业,2014,23(2):33-35.

Analysis of Auramines in Rhizoma Coptidis by Vacuum Ultrasonic Extraction Coupled with High Performance Liquid Chromatography*

LIUYu-jian,XUZhi-gang

(Faculty of Science, Kunming University of Science and Technology, Yunnan Kunming 650500, China)

Auramines in rhizome coptidis was extracted by vacuum ultrasonic extraction method. The mixture of Acetonitrile and 0.05 mol/L ammonium acetate (adjusted to pH 4.5 with glacial acetic acid) was used as the mobile phase and their volume ratio was 40:60. The flow rate was 1.0 mL/min. The UV detection wavelength was set at 432 nm. The column temperature was 30 ℃. This method can effectively detect auramines in rhizome coptidis. The linear equation was Y=-0.00084+0.00103X and the correlation coefficient was 0.9995. The recovery was between 99.03% and 104.02%. Compared with conventional ultrasonic extraction method, the extraction efficiency by vacuum ultrasonic extraction method was better than that by conventional ultrasonic extraction method.

auramines; vacuum ultrasonic extraction; rhizome coptidis; high performance liquid chromatography

国家自然科学基金项目(21565018)；昆明理工大学学科方向团队项目(14078356)；昆明理工大学校级大学生创新项目(201510674061)。

刘育坚(1995-)，男，本科，主要研究方向为色谱分析。

许志刚(1979-)，博士，副教授，研究方向为现分离分析。

O657.7

A

1001-9677(2016)02-0096-03