杜仲总黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用*

蒋真真，袁带秀，胡　倩，刘雯雯

(吉首大学医学院，湖南　吉首　416000)



杜仲总黄酮对小鼠急性肝损伤的保护作用*

蒋真真，袁带秀，胡倩，刘雯雯

(吉首大学医学院，湖南吉首416000)

研究了杜仲总黄酮对四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤的保护作用。通过腹腔注射CCl4诱导小鼠急性肝损伤，检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的含量、肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量，考察杜仲总黄酮的保肝作用。结果表明：杜仲总黄酮能显著降低急性肝损伤小鼠血清中的ALT、AST活性与肝脏中的MDA含量，并能提高肝脏中的SOD与GSH活性。杜仲总黄酮对CCl4引起的急性肝损伤小鼠具有保护作用，其作用机制可能与抗氧化作用有关。

杜仲总黄酮；四氯化碳(CCl4)；保肝；急性肝损伤

杜仲属杜仲科植物，为我国特有的单科目、单属科、单种属植物，在秦岭以南山地、四川、贵州、湖南、湖北、江西等省、自治区均有分布。杜仲作为中药已有两千多年的历史，可补肝肾、益筋骨、安胎，治疗腰膝酸痛、小便沥下等。现代药理学研究表明，杜仲中含有环烯醚萜苷类、黄酮类等成分，而且黄酮类成分含量较高[1]。本课题组成员前期研究了杜仲总黄酮的提取工艺及药理活性，发现杜仲总黄酮具有良好的抗肿瘤作用[2]。在此基础上，我们研究了杜仲总黄酮对CCl4造成的急性肝损伤的小鼠的保护作用，并探讨其可能作用机制。

1　材　料

1.1药物

杜仲总黄酮(含黄酮83.61%)，自制，临用时用生理盐水溶解；联苯双酯滴丸，浙江万邦药业股份有限公司，临用时碾成粉末制成混悬液。

1.2试剂

四氯化碳(CCl4， 分析纯， 湖南汇虹试剂有限公司)，以花生油稀释成0.1%溶液；谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)测定试剂盒， 南京建成生物技术研究所。

1.3动物

雄性昆明小鼠，体质量18～22 g，清洁级，合格证号：SCXK(湘)2011-0003，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。

2　方　法

2.1动物分组和造模方法

昆明小鼠50只，随机分成5组，每组10只，分别为正常对照组，CCl4损伤模型组，联苯双酯组(150 mg/kg)，杜仲总黄酮高、低剂量组(200 mg/kg、50 mg/kg)。小鼠适应性饲养7 d后，杜仲总黄酮高、低剂量组分别按200、50 mg/kg灌胃给药；联苯双酯组按150 mg/kg灌胃给药；正常对照组及CCl4损伤模型组以等体积生理盐水灌胃，每天1次，连续7天，于末次给药1 h后，正常组腹腔注射0.1 mL/10 g生理盐水，其余各组均腹腔注射10 mL/kg 的0.1% CCl4花生油溶液，16 h后眼眶取血，分离血清，测定血清中ALT、AST的活性。取适量的肝组织用预冷的生理盐水制备成10%的匀浆液，离心，取上清液，按试剂盒上的说明测定SOD、GSH活性和MDA含量。

2.2统计学处理

3　结　果

3.1杜仲总黄酮对CCl4诱导肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响

结果如图1所示，与正常对照组比较，小鼠经CCl4诱导16 h后，模型组血清中ALT、AST的活性显著升高(P<0.01)，说明造模成功。与模型组比较，杜仲总黄酮各剂量组和联苯双酯组对CCl4诱导的肝损伤小鼠的ALT和AST活性升高均有显著的降低作用(P<0.05或P<0.01)，杜仲总黄酮呈现良好的剂量依赖性。表明杜仲总黄酮对CCl4诱导的肝损伤有保护作用。

图1　杜仲总黄酮对CCl4诱导肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响

3.2杜仲总黄酮对CCl4诱导急性肝损伤小鼠肝脏中SOD、GSH活性和MDA含量的影响

表1杜仲总黄酮对CCl4诱导急性肝损伤小鼠肝脏中SOD、

Table 1Effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides on SOD、GSH activity and MDA content of liver in acute liver

组别剂量/(mg·kg-1)SOD/(U/mgprot)GSH/(U/mgprot)MDA/(nmol/mgprot)正常对照组212.8±31.33d34.07±2.39d8.44±1.13d模型组89.81±29.24b17.25±3.79b24.05±2.62b联苯双酯组150169.5±21.51c29.75±4.16d12.15±1.73d杜仲总黄酮200148.1±26.9625.81±2.78ac14.90±1.89ad5094.70±24.14b21.42±2.90b19.45±2.93b

注：与正常组比较，aP<0.05，bP<0.01；与模型组比较，cP<0.05，dP<0.01。

由表1可知，小鼠经CCl4诱导16 h后，模型组肝组织中SOD、GSH活性较正常对照组显著降低，MDA含量显著升高(P<0.01)；联苯双酯和杜仲总黄酮高、低剂量则能显著提高CCl4诱导的肝损伤小鼠肝组织中SOD、GSH活性和降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)。

4　讨　论

CCl4是一种常用的诱导化学性肝损伤模型的有毒类化学药物之一，因其接触后发病率高，在动物实验中易复制，能够准确反映肝细胞的形态学变化，因而常常用来诱导急性肝损伤模型，筛选保肝药物。CCl4引起肝损伤的主要作用机制是其在肝内经微粒体细胞色素P450分解活化，生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基，导致肝微粒体的脂质过氧化[3]。由于脂质过氧化反应增强而抗氧化能力下降，导致自由基生成增加，通过氧化细胞膜脂质，使肝细胞结构和功能受到损害[4]。文献报道[5]，化合物中的酚羟基是抗脂质过氧化作用的功能基团，杜仲所含黄酮类化合物如山奈酚、槲皮素、紫云英甙等，均含有酚羟基结构，因而发现黄酮类化合物具有保肝护肝作用。

SOD是体内清除自由基、抑制自由基反应的物质之一，它能抑制黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，减少自由基的产生，减轻肝细胞的损伤，其活性降低则会导致体内氧自由基的积累，引发质膜的过氧化作用，使膜结构与功能受到损伤，最终导致细胞的死亡[6]。GSH是体内一种重要的抗氧化剂，它能与体内自由基结合生成氧化型谷胱甘肽，促进自由基的清除。MDA是由于自由基攻击生物膜中的多价不饱和脂肪酸引发脂质过氧化，而形成的一种醛基物质。MDA含量可反映体内脂质过氧化的程度，从而间接反映细胞损伤程度[7]。本实验中CCl4诱导急性肝损伤小鼠后，模型组SOD活性和GSH含量降低(P<0.01)，MDA含量升高(P<0.01)，说明小鼠肝脏受自由基攻击后发生脂质过氧化，并且在此过程中大量的抗氧化酶被消耗，使其抗氧化能力下降。给小鼠灌胃杜仲总黄酮后，各药物组体内SOD活性和GSH含量升高(P<0.01)，MDA含量降低(P<0.01)。本实验结果证实，杜仲总黄酮具有一定的抗氧化作用，而杜仲总黄酮的保肝作用可能与这种抗氧化作用有关。

5　结　论

杜仲总黄酮可降低急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性和肝组织中MDA含量，并提高肝组织中的SOD、GSH活性，进而增强机体的抗氧化能力达到保肝作用。

[1]刘静，濮智颖，李爱玲，等.杜仲叶黄酮降血脂及抗氧化作用的研究[J].安徽农业科学，2010，38(11)：5631-5632.

[2]袁带秀，舒丽霞，黄荣.杜仲总黄酮对荷瘤小鼠的抗肿瘤作用[J].中国临床药理学与治疗学，2014,19(12)：1332-1335.

[3]闫冰，蔡秀江，姚卫峰，等.二至丸保肝活性成分群对CCl4致小鼠急性肝损伤保护作用研究[J].中国中药杂志，2012,37(9)：1303-1305.

[4]Rouach H, Fataccioli V, Gentil M, et al. Effect of chronic ethanol feeding on lipid peroxidation and protein oxidation in relation to liverpathology[J]. Hepato-logy,1997,25(2):351-355.

[5]Husain S R，Cillard J，Cillard P.Hydroxy radical scavenging activity of flavonoids[J].Phytochemistry，1987，26(9)：2489-2491.

[6]孙晓晶，王允，王毅刚，等.苏肝清对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中药材，2010,33(1)：105-108.

[7]李鹏，魏晓霞，南婷婷，等.灵芝三萜酸对小鼠急性肝损伤的保护作用[J].中国医药药学杂志，2013,33(23):1914-1917.

Study on the Protective Effect of Total Flavonoids of Eucommia Elmoides on Acute Liver Injury in Mice*

JIANGZhen-zhen，YUANDai-xiu，HUQian，LIUWen-wen

(College of Medicine, Jishou University, Hunan Jishou 416000, China)

To study the protective effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides on acute liver injury in mice by CCl4, the experimental models of acute liver injury were induced by CCl4ip. The levels of ALT, AST in serum, the activities of SOD, GSH and MDA in liver homogenates were examined to observe the protective effects of total flavonoids of Eucommia ulmoides. Results showed that The total flavonoids of Eucommia ulmoides could reduce the activities of ALT, AST in serum and the contents of MDA in liver homogenate of acute liver injury mice models. It could increase the activity of SOD and GSH in liver homogenate. The total flavonoids of Eucommia ulmoides have protective effects on acute hepatic injury induced by CCl4in mice. The effects may be due to its antioxidant activity.

total flavonoids of Eucommia ulmoides; carbon tetrachloride; liver protective; acute hepatic injury

2015年生物与食品类专业大学生创新训练中心创新训练项目(JDCX201523)资助。

蒋真真(1994-)，女，12级临床本科生。

袁带秀(1975-)，女，高级实验师，主要从事民族药物药理活性研究。

R285

A

1001-9677(2016)02-0069-02