不同卵巢肿瘤组织中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表达变化及其意义

张珏，蔡鸿宁，高晗，邹苗，吴绪峰

(湖北省妇幼保健院，武汉430070)



不同卵巢肿瘤组织中KI-67、P53、C23、EGFR蛋白的表达变化及其意义

张珏，蔡鸿宁，高晗，邹苗，吴绪峰

(湖北省妇幼保健院，武汉430070)

目的观察不同卵巢肿瘤组织中Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管内皮生长因子受体(EGFR)蛋白的表达变化，并探讨其意义。方法 行手术治疗的卵巢肿瘤患者139例，其中卵巢良性肿瘤46例、卵巢交界性肿瘤35例、卵巢癌58例，术中留取肿瘤组织及正常卵巢组织，采用免疫组化法检测Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白。结果正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、卵巢交界性肿瘤组织、卵巢癌组织中Ki-67蛋白阳性表达率分别为0、11.1%、74.5%、88.5%，P53蛋白阳性表达率分别为0、2.2%、28.6%、72.4%，C23蛋白阳性表达率分别为6.7%、19.6%、71.4%、91.4%，EGFR蛋白阳性表达率分别为43.3%、60.9%、88.6%、94.8%，不同卵巢肿瘤组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白阳性表达率高于正常卵巢组织(P均<0.05)；卵巢癌组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白阳性表达率高于卵巢良性肿瘤组织和卵巢交界性肿瘤组织(P均<0.05)；卵巢交界性肿瘤组织中P53蛋白阳性表达率高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05)。卵巢癌组织中P53与C23、P53与EGFR、Ki-67与C23、Ki-67与EGFR表达均呈正相关关系(r分别为0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。结论 Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、卵巢交界性肿瘤组织、卵巢癌组织中表达逐渐增高，Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的异常表达可能参与了卵巢癌的发病。

卵巢肿瘤；卵巢癌；核仁蛋白；野生型P53抑癌基因；血管内皮生长因子受体；Ki-67核抗原

卵巢癌起病隐匿，70%的患者确诊时已属晚期，5年生存率仅为10%[1]。尽管经过多年研究，卵巢癌基因靶向治疗呈现出较好前景，但卵巢癌的高度异质性给治疗造成困难，影响效果[2,3]。目前关于Ki-67核抗原(Ki-67)、野生型P53抑癌基因(P53)、核仁蛋白(C23)、血管内皮生长因子受体(EGFR)与卵巢癌关系的研究较多[4～6]，但结论不尽相同，对于四项指标联合检测也少有报道。为此，本研究观察了不同卵巢肿瘤组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白的表达变化，探讨四种蛋白在卵巢癌发生发展中的作用及其机制，现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料2012年1月～2014年12月在湖北省妇幼保健院行手术治疗的卵巢肿瘤患者139例，年龄17～72岁、中位年龄46岁，其中卵巢良性肿瘤46例、卵巢交界性瘤35例、卵巢癌58例。所有病例均经术后病理检查证实。另取同期行卵巢切除且经病理检查证实无卵巢恶性肿瘤患者的正常卵巢组织30例份作为对照，患者一般情况良好，无术后并发症。

1.2Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白检测采用免疫组化Elivision二步法。浓缩型Ki-67、P53、C23、EGFR兔抗人单克隆抗体购自Sigma公司，Elivision super试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术公司。染色操作步骤按试剂盒说明书进行。Ki-67抗体稀释度为1∶200，P53抗体稀释度为1∶200，C23抗体稀释度为1∶100，EGFR抗体稀释度为1∶200。用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。EGFR定位于细胞膜或细胞质，Ki-67、P53、C23定位于细胞核，以细胞出现黄色或棕黄色颗粒为蛋白表达阳性，计算阳性细胞百分比，阳性细胞百分比≤10%为阴性、>10%为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。计数资料比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman等级相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1不同卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表达变化不同卵巢肿瘤组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白阳性表达率高于正常卵巢组织(P均<0.05)；卵巢癌组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白阳性表达率高于卵巢良性肿瘤组织和卵巢交界性肿瘤组织(P均<0.05)；卵巢交界性肿瘤组织中P53蛋白阳性表达率高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.05)。详见表1。

表1　不同卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表达比较

注：与正常卵巢组织相比，*P<0.05；与卵巢癌组织相比，#P<0.05；与卵巢良性肿瘤组织相比，ΔP<0.05。

2.2卵巢癌组织中Ki-67、P53、C23、EGFR蛋白表达的相关性卵巢癌组织中，P53、C23蛋白同时阳性表达率为72.4%，P53、EGFR蛋白同时阳性表达率为74.1%，Ki-67、C23蛋白同时阳性表达率为92.2%，Ki-67、EGFR蛋白同时阳性表达率为94.0%。卵巢癌组织中P53与C23、P53与EGFR、Ki-67与C23、Ki-67与EGFR表达均呈正相关关系(r分别为0.220、0.195、0.231、0.217，P均<0.05)。

3　讨论

肿瘤发病是细胞发生恶性转化的结果，在这一过程中有多种基因出现异常表达，包括多个癌基因激活和(或)抑癌基因失活。卵巢癌的发生发展过程中也有多个癌基因和抑癌基因异常表达，但其具体发生机制尚未完全阐明。

P53基因是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，因基因产物定位于细胞核，是一种细胞周期相关蛋白[7,8]。P53蛋白分为野生型和突变型两种，野生型在正常细胞中呈低水平表达，突变型在肿瘤细胞中常高表达。P53蛋白异常表达与肿瘤细胞转化、增殖及肿瘤细胞恶性表型有关[9,10]。本研究中，卵巢肿瘤恶性程度越高，P53蛋白阳性表达率越高，提示P53异常表达可能参与了卵巢癌的发病。

Ki-67是一种与细胞周期相关的核增殖标志基因，Ki-67表达水平对评价细胞增殖状态、研究肿瘤生物学行为有重要意义，Ki-67是判断肿瘤预后的可靠指标之一[11]。本研究结果显示，卵巢癌组织中Ki-67蛋白阳性表达率高于卵巢良性肿瘤组织和卵巢交界性肿瘤组织，提示在卵巢肿瘤发生及进展过程中，Ki-67表达增高，细胞增殖活性逐渐增强。

已有研究证实，C23在恶性肿瘤的发生发展中起重要作用，其在肿瘤细胞及其他快速分裂的细胞中表达增高，而在非分裂细胞或分裂慢的细胞中低表达，因此，C23常被用来评估肿瘤细胞增殖程度，与肿瘤的生物学行为密切相关[12～14]。本研究中，C23蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率高于正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织和卵巢交界性肿瘤组织，与相关研究结果一致；且我们还发现C23、EGFR蛋白的表达呈现协同上升趋势，推测C23参与了肿瘤新生血管的形成及其调控[14]。

EGFR是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，参与信号转导、细胞周期调控。正常情况下EGFR表达水平较低，但在病理状态尤其是恶性肿瘤组织中过表达[15]。本研究结果显示，EGFR阳性表达率随着卵巢肿瘤级别的升高而增高，提示EGFR异常表达与卵巢肿瘤的发生发展有密切联系。文献[16]报道EGFR与配体结合可诱导G0/G1期细胞进入DNA合成期，促使受体激活，可导致细胞无自主性增殖。EGFR高表达对卵巢癌的增殖及浸润有促进作用，可作为评估卵巢癌细胞增殖活性及患者预后的参考指标。

本研究分析了卵巢癌组织中P53、Ki-67、C23、EGFR蛋白表达的相关性，结果发现四项指标中两两表达均呈正相关关系。EGFR为细胞信号转导通路的上游因子，推测EGFR与C23具有协同作用[17]；EGFR的过表达可能先于Ki-67，并对Ki-67的表达有正向调节作用[18,19]，且EGFR信号转导途径所激活的下游转录因子可能诱导Ki-67的过表达；Ki-67可激活细胞有丝分裂，使当P53基因发生突变时可改变其他DNA结合能力，从而削弱Ki-67等细胞增殖相关基因表达抑制，使细胞过度增殖。我们推测，卵巢癌的发生发展可能需要两种甚至更多癌基因和相关蛋白的协同作用，这些协同作用的机制及对卵巢癌生物学行为的影响尚有待深入研究。

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2013年武汉市中青年医学骨干人才培养项目(2014-47)。

吴绪峰(E-mail: zwuxufeng@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.21.024

R737.31

B

1002-266X(2016)21-0067-03

2015-12-28)