子宫内膜腺癌组织中RAD51、BRCA1蛋白的表达变化及其意义

张晓敏，张英姿，胡雪颖，胡宁宁，孙聪聪

(1滨州医学院，山东滨州256600；2滨州医学院附属医院)



子宫内膜腺癌组织中RAD51、BRCA1蛋白的表达变化及其意义

张晓敏1，张英姿2，胡雪颖1，胡宁宁1，孙聪聪2

(1滨州医学院，山东滨州256600；2滨州医学院附属医院)

目的观察子宫内膜腺癌组织中DNA双链修复蛋白(RAD51)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)蛋白的表达变化，分析二者与子宫内膜腺癌发生发展的关系。方法 收集子宫内膜腺癌组织52例、正常增生期子宫内膜组织45例，采用免疫组化法检测RAD51、BRCA1蛋白，分析RAD51、BRCA1蛋白表达与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系。结果子宫内膜腺癌组织、增生期子宫内膜组织中BRCA1蛋白阳性分别为21(40.4%)、42(93.3%)例，RAD51蛋白阳性分别为42(80.8%)、7(15.6%)例，子宫内膜腺癌组织与增生期子宫内膜组织中BRCA1、RAD51蛋白阳性表达率相比，P均<0.05。子宫内膜腺癌组织BRCA1阳性的21例中，RAD51阳性9例；RAD51阳性的33例中，BRCA1阳性9例；BRCA1、RAD51蛋白表达呈负相关关系(r=-0.325，P<0.05)。BRCA1、RAD51蛋白表达与子宫内膜腺癌患者年龄、分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移情况无关(P均>0.05)。结论 子宫内膜腺癌组织中BRCA1蛋白阳性表达率降低，而RAD51阳性表达率升高；RAD51、BRCA1蛋白表达异常可能与子宫内膜腺癌的发病有关。

子宫内膜腺癌；DNA双链修复蛋白；乳腺癌易感基因1

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的恶性上皮性肿瘤，以腺癌最多见，占生殖道恶性肿瘤的20%～30%[1]。已知子宫内膜腺癌与高雌激素水平、肥胖、高血压、糖尿病、不孕症及绝经延迟、遗传因素有关，但其具体发病机制仍未明确。目前尚无特异性肿瘤标志物用以预测子宫内膜腺癌[2]。DNA双链修复蛋白(RAD51)和乳腺癌易感基因1(BRCA1)在DNA损伤修复的同源重组中起关键作用，其表达异常与多种肿瘤的发生发展有关[3]。本研究观察了子宫内膜腺癌组织中RAD51、BRCA1蛋白的表达变化，分析二者与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系，现报告如下。

1　资料与方法

1.1临床资料滨州医学院附属医院病理科2013～2015年留存的子宫内膜腺癌组织蜡块52例份，正常增生期子宫内膜组织蜡块45例份。纳入标准：患者有不规则阴道流血，排除妊娠、节育器移位或下移或崁顿、宫颈息肉或宫颈赘生物或宫颈癌造成的出血；患者出现症状前一年未曾口服雌激素类药物或他莫西芬类药物；患者未合并乳腺疾病、外阴疾病、卵巢良恶性肿瘤、胃肠道良恶性肿瘤等疾病；所有受试对象民族、生活地域、基础疾病等一般情况均无明显差异。其中子宫内膜腺癌患者年龄36～70(55±8)岁，术前均未接受放化疗或其他治疗；肿瘤高分化32例，中低分化20例；FIGO分期Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期12例；浸润深度<1/2肌层39例，≥1/2肌层13例；发生淋巴结转移4例，无淋巴结转移48例。

1.2RAD51、BRCA1蛋白检测①免疫组化染色：将蜡块以3 μm厚切片，经二甲苯、无水乙醇、95%乙醇脱蜡至水，pH 6.0柠檬酸盐缓冲液高压抗原热修复，3%H2O2封闭内源性过氧化物酶，PBS缓冲液浸泡后加入一抗，4 ℃过夜，加入二抗，37 ℃孵育，DAB显色，苏木素复染，脱水封片；将RAD51、BRCA1抗体以1∶100稀释，染色步骤按说明书进行，以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知RAD51阳性乳腺癌组织切片及BRCA1阳性正常乳腺组织切片作为阳性对照。②结果判定：以细胞核和(或)细胞质出现棕黄色颗粒为RAD51阳性表达，以细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒为BRCA1阳性表达；每张切片选取10个视野，在高倍镜(400×)下观察，分别根据阳性细胞百分比和染色强度计分，阳性细胞百分比≤25%计1分、>25%～50%计2分、>50%～75%计3分、>75%计4分，染色程度为无着色计0分、淡黄色计1分、棕黄色计2分、棕褐色计3分，两项得分相乘，>3为阳性、≤3为阴性。

1.3统计学方法采用SPSS19.0软件进行统计处理。计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1子宫内膜腺癌组织与增生期子宫内膜组织中BRCA1、RAD51蛋白表达比较子宫内膜腺癌组织、增生期子宫内膜组织中BRCA1蛋白阳性分别为21(40.4%)、42(93.3%)例，RAD51蛋白阳性分别为42(80.8%)、7(15.6%)例，子宫内膜腺癌组织与增生期子宫内膜组织中BRCA1、RAD51蛋白阳性表达率相比，P均<0.05。

2.2子宫内膜腺癌组织中BRCA1、RAD51蛋白表达相关性子宫内膜腺癌组织BRCA1阳性的21例中，RAD51阳性9例；RAD51阳性的33例中，BRCA1阳性9例；BRCA1、RAD51蛋白表达呈负相关关系(r=-0.325，P<0.05)。

2.3BRCA1、RAD51蛋白表达与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系BRCA1、RAD51蛋白表达与子宫内膜腺癌患者年龄、分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移情况无关(P均>0.05)。详见表1。

表1　BRCA1、RAD51蛋白表达与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系(例)

3　讨论

近年来，子宫内膜癌发病率升高，且发病呈年轻化趋势[3]。子宫内膜癌的首选治疗方式是手术治疗，但对于希望保留子宫的年轻患者来说难以接受，所以早期筛查尤为必要。CA125作为常用的肿瘤标志物，能够反映肿瘤患者术后预后及复发情况，但用于早期子宫内膜癌筛查特异性及敏感性不高。Jiang等[4]报道只有25%的子宫内膜癌患者术前血清CA125表达阳性。因此，有必要寻找准确性更高的指标。

BRCA1是细胞核内重要的磷酸化蛋白，可抑制细胞生长，参与DNA损伤修复，其转录并编码出的磷酸化蛋白上有DNA损伤修复相关功能区，如重组酶RAD51因子结合区、抑癌基因p53结合区。RAD51是大肠杆菌RecA蛋白同系物，具有DNA依赖性ATP激酶活性，其蛋白有多个致密区，靠氨基末端磷酸化来调控。以上BRCA1蛋白上的DNA损伤修复相关功能区、RAD51蛋白的致密区内位点基因突变或磷酸化功能改变已被证实对DNA损伤修复产生明显影响，从而导致乳腺癌、卵巢癌发病[5]。

大量体内外因素如紫外线、放射线、烷化剂、化学致突变剂、DNA交联剂、DNA修复抑制剂、DNA复制过程破坏及细胞生成过程中蛋白重组等均可致细胞DNA损伤，其中DNA双链断裂(DSB)被认为是细胞凋亡的直接诱因。同源重组(HR)是指发生在同源DNA序列间的重组，其修复过程是DSB损伤修复的主要方式，对保持基因组完整性至关重要[6]。DSB修复过程中，BRCA1可引导识别DNA损伤，之后由RAD51作为HR的中心分子，合成新链进而完成损伤修复，维持细胞稳定性[7]。RAD51、BRCA1适当表达对修复自发性DNA损伤是必须的，但异常表达可导致基因组不稳定，受损细胞向肿瘤细胞发展，并使肿瘤细胞产生耐药性[8]。

临床放化疗的机制是刺激细胞核内DNA，使DNA链间或链内交联，导致双链断裂和损伤，从而抑制肿瘤细胞分裂、增殖，促进其凋亡。RAD51、BRCA1是DNA损伤修复途径中的重要基因，二者表达与肿瘤化放疗敏感性有关。Tassone等[9]研究发现，在对顺铂耐药的乳腺癌和卵巢癌细胞系中，BRCA1表达水平明显升高，而抑制BRCA1表达则可减弱DNA重组修复功能，促进细胞凋亡，增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性。Wang等[10]的体外细胞研究发现，BRCA1表达水平与肿瘤细胞对顺铂的敏感性呈负相关关系，但与肿瘤细胞对多西紫杉醇的敏感性呈正相关关系。张慧文等[11]也发现非小细胞肺癌的放疗敏感性与BRCA1表达水平呈负相关关系。易俊林、Kong等[12，13]也得出了类似的结论。

我们观察了子宫内膜腺癌组织与正常子宫内膜组织中BRCA1、RAD51蛋白的表达情况，发现子宫内膜腺癌组织中BRCA1蛋白阳性表达率较低，而RAD51阳性表达率较高，提示BRCA1、RAD51蛋白表达异常可能参与了子宫内膜腺癌的发病，可能是通过影响DNA损伤修复过程实现的。BRCA1、RAD51蛋白在子宫内膜腺癌组织中的表达呈负相关关系，而BRCA1是一种抑癌基因，我们可以推测RAD51是作为一种癌基因在组织中表达，两者的联合检测更有助于提高诊断子宫内膜腺癌的准确性。我们进一步分析了两种蛋白与子宫内膜腺癌临床病理参数的关系，但可能由于样本量较小，尚未发现BRCA1、RAD51蛋白表达与子宫内膜腺癌患者年龄、分化程度、FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移情况等存在关联，下一步将扩大样本深入研究。

总之，RAD51、BRCA1蛋白的表达异常可能与子宫内膜腺癌有关，但目前对RAD51、BRCA1的研究尚不全面，对于二者在DNA重组修复中的具体位置及相互作用、在不同肿瘤中的表达趋势是否存在差异、对放化疗敏感性的影响等方面仍有待于深入探讨。

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