消癌平注射液联合吉非替尼对肺癌患者Ki67及p53蛋白表达的影响

王雪华，陈　哲

(1.天津中医药大学第二附属医院，天津 300151；2.首都医科大学附属北京朝阳医院，北京 100020)



消癌平注射液联合吉非替尼对肺癌患者Ki67及p53蛋白表达的影响

王雪华1，陈哲2

(1.天津中医药大学第二附属医院，天津 300151；2.首都医科大学附属北京朝阳医院，北京 100020)

目的探讨消癌平注射液联合吉非替尼治疗肺癌的近期疗效及其对肺癌组织中Ki67与p53蛋白表达的影响。方法116例肺癌患者按照随机数字表法分为2组，观察组59例给予消癌平注射液联合吉非替尼进行治疗；对照组57例单纯给予吉非替尼治疗。治疗28 d后评定疗效，于治疗前后采用免疫组织化学法测定2组肺癌组织中Ki67、p53蛋白表达水平。结果观察组治疗有效率、疾病控制率均明显高于对照组(P均<0.05)；治疗后，观察组组织中Ki67阳性表达率低于对照组，p53阳性表达率高于对照组，差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论消癌平注射液联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌临床效果显著，能够调控肺癌患者Ki67及p53蛋白表达，有效抑制癌细胞浸润及转移。

肺癌；消癌平注射液；吉非替尼；Ki67；p53

肺癌是世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一，近些年来该病的发病率与病死率呈不断上升的趋势，对人类健康造成了严重危害。在我国，因肺癌死亡人数约占常见恶性肿瘤致死人数的22.7%[1]，据世界卫生组织预测，至2025年，我国肺癌患者将达到100万[2]。临床上非小细胞肺癌最为常见，占肺癌总数的85%[3]。目前，靶向药物是晚期肺癌治疗的发展方向，吉非替尼是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，研究显示吉非替尼化疗能够明显延长晚期非小细胞肺癌患者的生存期[4]。但是，该药物毒副反应较大，部分患者耐受性较差。中医药在肿瘤治疗方面具有减毒增效的优势，有研究表明中西医结合治疗中晚期肺癌效果显著[5]。消癌平注射液是中药通关藤的提取液，临床上主要用于肺癌、胃癌、白血病等恶性肿瘤的治疗。研究表明消癌平注射液联合化疗治疗可有效降低不良反应[6]。核增殖抗原Ki67能准确反映肿瘤细胞的增殖活性，与肿瘤的发展、转移及预后有关[7]；p53基因参与调控肿瘤发生、发展的周期过程[8]，p53表达使肿瘤细胞发生不可逆凋亡，与肿瘤的发生高度相关。目前，关于消癌平注射液与吉非替尼联用治疗肺癌的近期疗效及其对肺癌患者组织中Ki67与p53蛋白表达影响的研究较少，本研究对此进行了探讨，现将结果报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料随机选取2014年5月—2016年2月天津中医药大学第二附属医院及北京朝阳医院收治的肺癌患者116例，均符合非小细胞肺癌治疗指南(第1版)中关于肺癌的诊断标准[9]。其中男70例，女46例，年龄36～81(59.5±10.6)岁。均无化疗禁忌证，年龄>18岁；痰液细胞学检查发现癌细胞，并经组织病理学检查确诊；MRI以及CT证实为肺癌；支气管镜检查证实肿瘤病灶以及位置。排除有药物过敏史者，接受免疫抑制剂治疗者；风湿免疫性疾病严重高血压糖尿病以及严重心肝肾等多脏器功能障碍或衰竭者；合并其他恶性肿瘤、癫痫等神经系统疾病者；治疗后无法获取病理样本者。按照随机数字表法将肺癌患者分为观察组59例和对照组57例，2组性别、年龄、病理类型、临床分期、病灶部位比较差异均无统计学意义(P均>0.05)，具有可比性。见表1。

表1　2组一般资料比较

1.2治疗方法观察组给予消癌平注射液联合吉非替尼治疗：消癌平注射液(南京圣和药业股份有限公司)80 mL静脉滴注，每天1次；吉非替尼(江苏恒瑞医药股份有限公司)250 mg口服，每天1次，28 d为1个治疗周期。对照组单纯给予吉非替尼(江苏恒瑞医药股份有限公司)口服，250 mg/d，每天1次，28 d为1个治疗周期。

1.3观察指标

1.3.1临床疗效根据CT、MRI扫描观察治疗前后病灶大小变化及强化程度，按照RECIST实体瘤疗效评价标准[10]评定疗效，治疗效果分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)，总有效=CR+PR，疾病控制=CR+PR+SD。

1.3.2Ki67、p53蛋白阳性表达率Ki67、p53单克隆抗体购自福州迈新生物技术开发公司，超敏SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。取所有肺癌病例肺癌组织石蜡切片，10%甲醛溶液固定，4 μm切片，二甲苯浸泡15 min，95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇中各浸泡5 min，流水冲洗5 min，微波高温修复抗原10 min，自然冷却至室温，蒸馏水洗涤，3%过氧化氢溶液封闭，滴加一抗，4 ℃下过夜，升至室温，滴加二抗，室温下孵育20 min，PBS液冲洗，滴加DAB显色，37 ℃下孵育30 min，PBS液冲洗，苏木素复染，脱水透明树脂胶封片，观察并记录染色情况。Ki67及p53蛋白以细胞核呈棕黄色颗粒染色为阳性表达，阳性细胞数<10%为阴性(-)，10%～25%为弱阳性(+)，26%～50%为阳性()，>50%为强阳性()。

2　结　　果

2.12组治疗效果比较观察组治疗有效率、疾病控制率均显著高于对照组(P均<0.05)。见表2。

表2　2组治疗效果比较　例(%)

注：①与对照组比较，P<0.05。

2.22组治疗前后组织中Ki67蛋白表达情况比较治疗前，2组Ki67蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，观察组Ki67蛋白阳性表达率明显低于对照组(P<0.05)。见表3。

表3　2组治疗前后组织中Ki67蛋白表达情况比较

注：①与对照组比较，P<0.05。

2.32组治疗前后组织中p53蛋白表达情况比较2组治疗前组织中p53蛋白阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后，观察组p53蛋白阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。见表4。

表4　2组治疗前后组织中p53蛋白表达情况比较

注：①与对照组比较，P<0.05。

3　讨　　论

肺癌是一种发病率与病死率均很高的恶性肿瘤，统计数据表明，世界范围内新发生癌症中有12%为肺癌患者，每年新增肺癌人数已经超过130万[11]。近年来，随着社会生活方式的转变及吸烟人数的增长，我国肺癌的发病率亦有明显增高的趋势。临床上多数肺癌患者在确诊时已经进展为晚期，传统的放疗和化疗治疗方案特异性差，药物毒副作用严重，对肺癌患者的正常细胞组织造成明显损害，有数据表明铂类药物化疗5年内生存率低于15%[12]。伴随着现代医学科学的发展，放化疗技术不断进步，然而，中晚期肺癌患者的长期生存率依然无法得到明显提高。因此，临床上迫切需要寻找新的有效治疗措施。

肺癌具有许多突变的基因亚型，因此临床上靶向治疗相关的基因逐渐成为学界研究的热点。特异性较高的分子靶点药物能够有效延长肺癌患者生存时间，提高患者生活质量，降低对正常组织细胞的毒副作用。目前一些小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂已应用于晚期非小细胞肺癌的治疗，并取得了巨大的进展，该酶常见于表达上皮来源的实体瘤，通过抑制该受体酪氨酸激酶活性作用，达到阻碍肿瘤的生长，预防癌细胞转移以及血管生成，加速肿瘤细胞凋亡进程的目的[13]。吉非替尼是其中具有代表性的药物，具有抑制多种肿瘤细胞株生长的作用，能够加速肿瘤细胞凋亡，抑制血管生成及肿瘤细胞浸润与转移，增强放化疗效果。医学临床研究表明，吉非替尼能够快速改善浆膜腔积液非小细胞肺癌患者的临床症状，显著提升患者的生活质量[14]。

肿瘤防治方面，中医药的减毒增效作用具有巨大的优势。消癌平注射液来源于中药通关藤的提取液，具有清热解毒、化痰软坚的功效，可以发挥抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡，诱导肿瘤细胞分化以及抗肿瘤血管生成等诸多作用。方欢等[15]应用消癌平注射液联合化疗治疗非小细胞肺癌，结果表明消癌平具有化疗减毒作用，明显减少了重度白细胞、红细胞及血小板降低的发生，同时也显著降低了重度恶心呕吐的发生；杨宏等[16]应用消癌平注射液联合NP方案治疗非小细胞肺癌，结果显示治疗组缓解率明显优于对照组，且在改善生活质量、减轻消化道反应及骨髓抑制等方面均取得了良好效果。本研究结果表明，观察组治疗有效率及疾病控制率均显著高于对照组，显示中西医结合治疗中晚期肺癌的巨大优势。

Ki67是一种核增殖蛋白，在病理免疫组化中用于提示细胞增殖的活跃程度。Ki67蛋白参与mRNA的转录，其活性降低时，mRNA合成受限，在细胞增殖各期均可见表达。Ki67能够客观反映肿瘤细胞的增殖情况，可以作为影响预后的因素[17]。Ki67的过度表达诱发细胞无限增殖，从而引发肿瘤，Ki67表达水平高提示肿瘤分化程度高，浸润增加，转移部位增多，预后差；反之，则提示肿瘤分化程度低，浸润以及转移较少，预后良好。

p53是一种肿瘤抑制基因，参与调控细胞的增殖与分化。p53蛋白具有调节细胞周期以及预防细胞癌变的双重作用，在一定程度上，p53蛋白维持基因组的稳定性，防止肿瘤细胞突变转移。研究表明，p53蛋白具有抑制癌细胞生长的作用，与癌症的发生发展以及预后关系密切，p53阳性表达化疗疗效明显低于阴性表达者[18]。

本研究结果显示，观察组治疗后Ki67阳性表达率显著低于对照组，p53阳性表达率则显著高于对照组，说明消癌平注射液联合吉非替尼治疗可以显著降低肺癌患者组织中Ki67蛋白的表达水平，同时提高p53蛋白的表达水平，二者合用，对肺癌的发生及发展有重要影响。该方案能够有效抑制肺癌细胞的浸润与转移，有利于改善临床疗效与预后。但是，由于时间受限，本研究亦存在不足之处，例如该方案的远期疗效，以及该方法以何种机制参与调控肺癌组织中Ki67、p53蛋白的表达过程尚未在本研究中进行阐述，还有待于进一步研究。

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