80岁以上老年人外周血T细胞亚群CD28的表达及胸腺肽α1对其影响

罗杰　张兴虎　王坚



80岁以上老年人外周血T细胞亚群CD28的表达及胸腺肽α1对其影响

罗杰张兴虎王坚

目的探讨高龄老年人(≥80岁)较普通老年人(60～70岁)外周血T淋巴细胞亚群数量及T细胞CD28表达的差异,并观察胸腺肽α1对高龄老人的作用。方法选取高龄老年人及普通老年人各40例,分别检测2组的外周血T淋巴细胞亚群的百分比及T细胞CD28水平。给予高龄老人组胸腺肽α1注射剂1.6 mg,皮下注射,2次/周,疗程为4周,于治疗后4周检测外周血上述免疫指标。结果高龄老年人组较普通老年组外周血CD8+的百分比及CD4+CD28+的表达无差异,而CD4+的百分比及CD8+CD28+的表达明显降低(P<0.05)。高龄老人应用胸腺肽α1后CD4+的百分比及CD8+CD28+水平明显提高(P<0.05)。结论高龄老年人较普通老年人免疫功能出现了进一步下降,而胸腺肽α1能明显增强高龄老年人的部分免疫功能。

80岁以上老年人; T淋巴细胞亚群; CD28; 胸腺肽α1

目前,免疫衰老是免疫研究领域的一个重点。CD28分子是T淋巴细胞表面主要的共刺激分子受体,是属于免疫球蛋白超家属成员,它与抗原提呈细胞表面的B7分子结合,为T细胞的活化提供第二信号。而CD28分子的丢失致使老年机体对新抗原的细胞免疫功能降低。胸腺肽α1是一种具有多种效应的免疫增强剂,可以明显促进同种T细胞的增殖,增强辅助性T细胞(Th细胞)的免疫功能,从而使机体更有效地发挥其免疫防护作用[2]。本试验主要研究高龄老年人T细胞亚群及CD28的表达,以及应用胸腺肽α1后上述指标的变化,以阐明高龄老年人免疫功能的改变及胸腺肽α1对其的影响作用。

1　 材料与方法

1.1研究对象试验组为80岁以上老年人40例,男25例,女15例,年龄≥80岁,平均(88.8±9.5)岁。排除有肿瘤、糖尿病、慢性感染、自身免疫性疾病、服用免疫抑制剂,接受过免疫增强剂的治疗的患者;取普通老年人40例作为对照组,男23例,女17例,年龄60～70岁,平均(67.1±10.4)岁。也同样排除上述疾病。研究对象均为南京市部队干休所老干部,试验组和对照组体质量分别为(68.7±12.6) kg和(72.3±15.1) kg,2组收缩压分别为(133.3±21.5) mmHg和(126.4±24.4) mmHg,2组舒张压分别为(45.62±11.03) mmHg和(50.82±9.09) mmHg,2组三酰甘油分别为(1.74±2.04) mmol/L和(1.82±1.39) mmol/L, 胆固醇分别为(4.23±3.24) mmol/L和(4.89±2.59) mmol/L,糖化血红蛋白分别为(6.64±1.57) mmol/L和(6.16±1.01) mmol/L,2组体质量、血压、血脂及血糖比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。本试验经所有研究对象的同意(签知情同意书),并得到了医院伦理委员会的批准。

1.2主要试剂Anti-h CD4-FITC、Anti-h CD8-FITC购自晶美生物工程公司; Anti-h CD28-PE(单荧光标记抗体)购自晶美生物BioLegend公司;胸腺肽α1注射剂(成都地奥九泓制药,国药准字H20020545);流式细胞仪(Beckman Coulter公司的CYTOMICS FC500)。

1.3试验方法分别检测高龄老年人及普通老年人外周血CD4+及CD8+T细胞的百分比及其CD28表达的水平;前组给予胸腺肽α1注射剂1.6 mg,皮下注射,2次/周,疗程为4周,于治疗后4周检测外周血T细胞CD28的水平。

1.4荧光染色检测每个受试者均抽空腹晨血1 ml(肝素抗凝),每份样本取2个试管,1管分别加入Anti-h CD4-PE-FITC和Anti-h CD28-PE,另1管分别加入Anti-h CD8-FITC和Anti-h CD28-PE,各10 μl,然后分别加入抗凝血100 μl混匀,温室避光20 min,每管加入2 ml红细胞裂解液,振荡混匀,避光10 min后离心,弃上清,用PBS液洗涤2次,2 h内上流式细胞仪分析。

1.5统计学分析计量资料采用均数±标准差表示,组间比较采用SPSS 10.0统计软件包进行t检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。

2　结果

试验组较对照组外周血CD8+的百分比及CD4+CD28+的表达差异无统计学意义(P>0.05),而试验组CD4+的百分比及CD8+CD28+的表达较对照明显降低(P<0.05)(见表1),高龄老人应用胸腺肽α1后CD4+的百分比及CD8+CD28+水平明显提高(P<0.05)(见表2)。

表1　2组外周血T细胞CD28表达的差异,%,n=40)

注:与对照组比较,*P<0.05

表2　胸腺肽α1对试验组外周血T细胞CD28表达的影响,%,n=40)

注:与治疗前比较,*P<0.05

3　讨论

免疫功能衰退是老年人生命过程中最明显的衰退特征之一,其最突出的表现是T细胞数量的减少、增殖能力的下降,细胞介导的免疫功能应答反应迟缓,功能降低。T细胞是正常机体免疫功能的物质基础,老年人T细胞绝对数量均随年龄增长而降低[3]。

CD4+表示辅助性诱导性T细胞亚群,CD4+细胞属主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类限制性T细胞,CD4+不仅参与细胞免疫,还可以诱导B淋巴细胞增生和(或)分化,使之产生各种免疫球蛋白,从而启动体液免疫反应。CD4+从60岁后减低,70岁后进一步下降,CD4+水平下降致使细胞免疫及体液免疫应答效应减弱[4]。CD8+表示抑制性和细胞毒性T细胞亚群, CD8+初始型T细胞在应对外来抗原感染及肿瘤监视中起重要作用,其是MHC Ⅰ类限制性细胞前体细胞,具有MHC Ⅰ类限制细胞毒性,在CD4+T细胞分泌的细胞因子作用下,分化为杀伤性T细胞,CD8+数量的减少可用作判断机体对MHC Ⅰ类新型抗原免疫保护作用的缺失,机体对感染性疾病,尤其是病毒感染,以及恶性细胞的免疫防护和免疫监视作用的降低,并最终导致寿命的缩短。本研究结果表明,高龄老年人外周血CD4+的百分比较普通老年人明显降低,而2组 CD8+的百分比无明显差异。说明高龄老年的部分免疫功能较普通老年人又出现了进一步下降。

而T细胞表面的共刺激分子,通过提供活化或抑制信号,可以影响T细胞激活、增殖及细胞因子的分泌等。如何调控共刺激分子增强T细胞功能是目前免疫学研究领域的一个重点。 CD28为同源二聚体结构,属于免疫球蛋白超家属成员,表达在T细胞表面的一个共刺激分子,为T细胞活化提供重要的第二信号,另外还能分泌IL-2、TNF-α、TNF-β及IFN-γ等细胞因子,来自CD28第二信号的缺乏将导致免疫无能。CD8+CD28+T细胞有识别抗原的特异性,通过识别病毒和病毒感染的细胞发挥作用[5]。有文献报道老年人外周血T细胞表面CD28的表达明显低于年轻人,特别是在CD8+T细胞上的表达[6]。初始型T细胞数量的减少以及CD28分子的丢失使老年个体对新抗原的细胞免疫功能降低。本研究发现高龄老年人CD8+CD28+的表达较普通老年人又出现了进一步降低,而2组人群CD4+CD28+的表达无明显差别。说明高龄老年人免疫功能较普通老年人又出现了进一步的下降,进一步解释了为何高龄老年人较普通老年人更易患感染和肿瘤的原因[7]。

胸腺肽α1是小牛胸腺中提取的具有生物活性的多肽,具有强烈的免疫刺激和免疫调节作用,能诱导T细胞的分化、成熟,增加T淋巴细胞前体数量,促进T淋巴细胞亚群发育,并通过分泌细胞因子完成亚群间的免疫协调, 调控机体的免疫平衡。胸腺肽α1 激活PKC,进入核内激活细胞因子基因转录,如IL-1、IL-6 和IL-8,介导B7 家族成员表达活化,进而通过抗原提呈细胞(APC) 活化T 细胞, 激活获得性免疫系统[8]。也可通过Toll 样蛋白受体信号通道,激活树突状细胞(DCs)[9],分泌多种细胞因子参与免疫调节功能。胸腺肽α1 能负向调节荷瘤小鼠的重量,提高MHCⅠ类抗原在肿瘤细胞和APC 中的表达,部分恢复细胞的免疫性[10]。临床上主要用于免疫缺陷症和自身免疫性疾病的治疗[11]。有文献报道胸腺肽α1能促进T细胞的成熟,激活CD3+、CD4+和NK细胞产生,提高机体免疫功能[12]。本研究的部分结果与文献报道的结果基本一致,高龄老年人的免疫功能较普通老年人进一步下降。从本研究结果来看,应用胸腺肽α1后高龄老年人外周血CD4+的百分比明显提高,并能明显提高CD8+淋巴细胞CD28+表达。故胸腺肽α1能显著提升高龄老年人的特异性细胞免疫功能,为其作为一种免疫增强剂提供一个新的理论论据,但作用机制目前还不清楚,有待于以后的试验进一步探讨。

当今世界人口老龄化是一个发展趋势,高龄老年人的免疫功能低下致使感染性疾病的发病率明显增加,已严重影响了他们的生命质量,如何减少感染性疾病的发生率,提高他们的生活质量成为当今老年病学的一个重要的研究课题。本研究为进一步探究免疫衰老的发生机制及有效干预提供了可靠的实验依据。

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Expression of CD28 T lymphocytes in peripheral blood subsets and effect of Thymosin α1 in the elderly aged 80 years old and over

LUOJie.DepartmentofHealthCare;ZHANGXing-hu.DepartmentofGeriatrics;WANGJian.

DepartmentofEndocrinology,JinlingHospital,SchoolofMedicine,NanjingUniversity,Nanjing210002,China

ObjectiveTo investigate the difference of T lymphocyte subsets and CD28 expression in T cells in peripheral blood between the very elderly (≥80 years old,n=40)and the younger elderly(60-70 years old,n=40), and to investigate the effect of thymosin α1 in the very elderly.MethodsThe T lymphocyte subsets and CD28 levels in both groups in peripheral blood were detected, and the very elderly group was injected with thymosin α1 1.6 mg, twice a week,for 4 weeks. Then the above immune parameters of peripheral blood were detected again.ResultsThere were no differences in the percent of CD8+and CD4+CD28+expression between the very elderly and the younger elderly.The percent of CD4+and CD8+CD28+expression was significantly lower (P<0.05) in the very elderly group than those in the younger elderly.After injected with thymosin α1, the percent of CD4+and CD8+CD28+expression were significantly increased in the very elderly (P<0.05).ConclusionsThe immune function of the elderly is decreased more significantly than that of the younger elderly, and thymosin α1 can significantly enhance some immune function in very elderly.

aged 80 and over; T lymphocyte subsets; CD28; thymosin α1

南京军区医学卫生科研基金(11MA101)

210002江苏省南京市,南京大学医学院附属金陵医院干部保健科(罗杰);干部病房(张兴虎);内分泌科(王坚)

王坚, Email:wangjndcrn@yahoo.com.cn

R592

Adoi:10.3969/j.issn.1003-9198.2016.05.022

2015-09-15)