雄激素受体在乳腺癌不同分子分型中的表达差异

屠世晔，王波，毛海波（.奉化市中医医院，浙江 奉化 35500；.浙江大学医学院附属第一医院，浙江 杭州30003）

雄激素受体在乳腺癌不同分子分型中的表达差异

屠世晔1，王波2，毛海波1
（1.奉化市中医医院，浙江 奉化 315500；2.浙江大学医学院附属第一医院，浙江 杭州310003）

目的探讨雄激素受体（AR）在不同乳腺癌分子分型中表达的差异。方法收集浸润性乳腺癌239例，免疫组化方法检测ER、PR、HER-2和AR的表达；对于HER-2（++）的病例，进一步应用FISH法检测HER-2基因的扩增。根据免疫组化及FISH法检测结果将乳腺癌分为4型，分析AR在不同乳腺癌分子分型中的表达。 结果AR的阳性率为89.1%；AR在Luminal A型、Luminal B型及HER-2过表达型乳腺癌中的阳性率分别为97.2%，100.0%和100.0%，而在Basal-like型乳腺癌中阳性率为26.9%，差异具有统计学意义 （P＜0.01）。结论AR在Luminal A、Luminal B和HER-2过表达型乳腺癌中具有很高的阳性率，而在Basal-like型乳腺癌中表达率则很低。

乳腺癌；雌激素受体；孕激素受体；HER-2；雄激素受体

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，居于女性恶性肿瘤的首位。分子生物学技术的进展使人们可以从基因水平进一步分析乳腺癌的异质性。2011年《St.Gallen共识》［1］中，将乳腺癌各分子分型的定义及治疗选择作了较明确的推荐（表1）。乳腺癌患者雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）水平的检测已成为病理科常规的检测项目，这些指标的评估可以为临床医生正确选择治疗方式提供依据。除以上两种激素受体外，研究发现，超过70%的乳腺癌组织中存在雄激素受体（AR）的表达［2］。本研究主要探讨AR在不同乳腺癌分子分型中的表达，为将来的分型和治疗提供借鉴。

表1　2011年St.Gallen共识中定义的乳腺癌亚型及其治疗

1　资料与方法

1.1一般资料收集2013年1月～2015年1月浙江大学医学院附属第一医院病理诊断为浸润性乳腺癌的病例239例，所有患者均接受手术治疗，未行新辅助化疗，有较为完整的临床资料。年龄30～89岁，平均（59.5±5.8）岁。239例浸润性乳腺癌中，227例为浸润性导管癌，5例为浸润性小叶癌，3例为粘液腺癌，分泌性癌、化生性癌、髓样癌和微乳头癌各1例。

1.2免疫组化以10%中性福尔马林溶液固定标本，切4μm厚石蜡切片，同时保留1张连续切片作HE染色观察。采用Envision二步法检测乳腺癌组织中ER、PR、HER-2、AR的表达。抗体基本信息见表2。用已知阳性染色切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，不加一抗作为空白对照。

表2　抗体基本信息

1.3荧光原位杂交（FISH）对于HER-2（++）的病例，进一步应用FISH法检测HER-2基因的扩增。4μm切片，65℃烤片过夜。脱蜡至水后，将切片置于水浴锅中，蒸馏水高温煮20分钟；滴加胃酶溶液，37℃消化30分钟；75%，95%，100%乙醇脱水，切片风干，滴加10μL探针（北京金普嘉公司）于切片上；设置杂交程序：83℃变性5分钟，42℃杂交16小时，将切片置于杂交仪上进行杂交。洗涤切片，梯度乙醇脱水并干燥，加DAPI复染封片，观察切片。

1.4结果判定

1.4.1ER、PR、AR判定均采用≥1%瘤细胞核阳性作为阳性标准。

1.4.2HER-2判定判读标准按照《乳腺癌HER2检测指南（2014版）》［3］。阴性：无染色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；（+）：＞10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色；（++）有两种情况，第一种为＞10%的浸润癌细胞呈现不完整和/或弱至中等强度的细胞膜染色，第二种为≤10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色；（+++）：＞10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色。

1.4.3FISH判定计数肿瘤细胞30个，统计Ratio值（Ratio值=30个细胞核中HER-2信号总数/30个细胞核中CEP17信号总数）。Ratio值在2.0及其以上或者Ratio值在2.0以下，但是平均HER-2拷贝数/细胞在6.0及其以上为阳性；Ratio值在2.0以下且平均HER-2拷贝数/细胞在4.0以下为阴性。

1.5统计学处理采用SPSS13.0软件进行数据处理，计数资料的比较采用χ2检验。

2　结果

2.1乳腺癌分型239例中，根据乳腺癌分子分型，Luminal A型144例 （60.3%），Luminal B型32 例 （13.4%），HER-2过表达型 29例 （12.1%），Basal-like型26例（10.9%），剩余8例未归类（ER、PR、HER-2均阴性）。AR、ER、PR和HER-2阳性分别为213例 （89.1%）、176例 （73.6%）、147例（61.5%）和61例（25.5%）。

2.2AR在不同乳腺癌分子分型中的表达AR 在Luminal A型、Luminal B型和HER-2过表达型乳腺癌中具有很高的表达，阳性率分别为97.2%、100.0%和100.0%；而在Basal-like型乳腺癌中阳性率低，仅为26.9%；另有8例未归类的乳腺癌AR阳性率为62.5%；统计学分析显示各组之间AR的表达差异具有统计学意义（P＜0.01），见表3。176例ER（+）的乳腺癌AR阳性率为97.7%；而63例ER（-）的乳腺癌AR阳性率为65.1%，两组差异具有统计学意义（χ2=82.903，P＜0.01）。147例PR （+）的乳腺癌AR阳性率为98.0%，而92例PR（-）的乳腺癌AR阳性率为75.0%，两组差异具有统计学意义（P＜0.01）。61例HER-2（+）的乳腺癌均表达AR，而HER-2（-）的乳腺癌AR阳性率为85.4%，两组差异具有统计学意义（P＜0.01），见表4。

表3　AR在不同乳腺癌分子分型中的表达（n，%）

3　讨论

近年来，基于基因表达谱不同提出的乳腺癌分子分型研究不断深入，为乳腺癌的个体化治疗提供了一个有力的依据。乳腺癌分子分型的研究已成为乳腺癌领域的热点，并成功地应用于临床实践中。此方法是根据ER、PR、HER-2和Ki-67的免疫组化结果进行分型，包括Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型和Basal-like型4种。不同的研究所报道的各分子亚型所占的比例不尽相同。Kim等［4］报道Luminal A型占44.5%，Luminal B型占7.8%，HER-2过表达型占17.1%，Basal-like型占14.7%。Carey等［5］报道美国乳腺癌Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型和Basal-like型分别占50.4%、16.1%、6.7%和20%。袁中玉等［6］统计了1280例乳腺癌患者，发现Basal-like型、HER-2过表达型和 Luminal型乳腺癌分别占 20.9%、23.2%和55.9%。本研究中，Luminal A型乳腺癌有144例，Luminal B型乳腺癌有32例，HER-2型占29例，Basal-like型占26例，比例分别为60.3%，13.4%，12.1%和10.9%。

表4　AR的表达与其他免疫组化抗体的关系（n，%）

大部分乳腺癌组织都表达AR［7］。目前AR的表达主要依靠免疫组织化学方法检测，不同文献报道的阳性率各不相同，大致在31%～90%之间，而多数在 60%～70%［8］。本实验中 AR的阳性率为89.1%。造成结果明显不一致的原因可能是各研究检测AR表达的形式、检测方法和计数条件不尽相同，以及阳性判定标准不一致等［8］。

已有研究报告AR多与ER、PR共表达于乳腺癌，AR的表达率甚至高于ER和PR［9］。Agoff等［10］发现AR阳性可见于49%的ER（-）乳腺癌和89%的ER（+）乳腺癌。高仁里等［11］证实AR的表达与ER的表达呈正相关，且AR的表达率略高于ER的表达率。杨季红等［12］也证明ER阳性组AR的表达率为85.3%，而ER阴性组AR的表达率为48.1%，两组间表达差异具有统计学意义（P＜0.01）。张文进［13］指出AR表达与ER、PR阳性表达率呈正相关，乳腺癌中AR大多与ER、PR同时表达，只有少于10%的癌组织单独表达。本研究结果与文献报道类似。ER（+）的乳腺癌AR阳性率为97.7%；ER（-）的乳腺癌AR阳性率为65.1%，两组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）。PR（+）的乳腺癌 AR阳性率为98.0%；PR（-）的乳腺癌AR阳性率为75.0%，两组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）。说明AR的表达与ER、PR的表达有关。

关于AR在乳腺癌各分子分型中的表达的研究甚少。在一项大样本数据研究中，Laura等［14］发现AR的表达最常见于Luminal A型和Luminal B型乳腺癌，阳性率分别为91%和68%。而在HER-2过表达型乳腺癌中，阳性率略低（59%）。只有32% 的Basal-like型乳腺癌表达AR。各组之间AR的表达差异具有统计学意义［14］。本实验中AR在Luminal A型、Luminal B型和HER-2过表达型乳腺癌中具有很高的表达，阳性率分别为97.2%、100.0%和100.0%；而在Basal-like型乳腺癌中阳性率低很多，仅为26.9%。由此表明AR在乳腺癌中的表达与ER、PR有关，从而提示AR可以作为乳腺癌治疗的一个新指标。

综上所述，AR在Luminal A型、Luminal B型和HER-2过表达型乳腺癌中具有很高的阳性率，而在Basal-like型乳腺癌中表达率则很低。

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