针刺结合补阳还五汤对缺血性中风大鼠脑能量代谢的影响

陈秋帆，陈 穗（广东省佛山市南海区罗村医院康复科、急诊科，广东 佛山 528226）

论 著

针刺结合补阳还五汤对缺血性中风大鼠脑能量代谢的影响

陈秋帆，陈 穗
（广东省佛山市南海区罗村医院康复科、急诊科，广东 佛山 528226）

目的：研究针刺结合补阳还五汤对缺血性中风大鼠的脑能量代谢的影响。方法：120只健康的SD大鼠作为研究对象，随机选择8只为正常组，30天后8只为假手术组，其余按照四血管闭塞法造模分成模型组、汤剂组、针药组及阳性药组各26只。正常组、假手术组及模型组均给予生理盐水，汤剂组用补阳还五汤，针药组用针刺联合补阳五汤剂，阳性药组用脑心通，均干预4周。结果：针药组、汤剂组及阳性药组脑组织ATP、ADP含量，及TAN、EC值均高，AMP降低，和模型组、假手术组比较差异有统计学意义（P＜0.05），前3组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：针刺结合补阳还五汤对缺血性中风大鼠的脑能量代谢有良好的改善效用，能起到抗脑缺血损伤作用。

针刺；补阳还五汤；大鼠模型；缺血性中风；脑能量代谢

脑中风是基于脑内动脉血管硬化、狭窄、血栓脱落等导致脑组织血氧不足而坏死，并使相应区域神经功能出现障碍的病症［1］。我们对大鼠进行模拟研究针刺结合补阳还五汤治疗脑中风的效果，报道如下。

1 材 料

120只健康SD大鼠，均为雄性，SPF级别。大鼠平均体质量为（250±15）g。在实验室进行适应性饲养1周，再随机选定8只为正常组，过30天后选定8只为假手术组。其余104只大鼠均通Pulsinelli四血管闭塞法制作全脑缺血-再灌注模型，成功造模之后基于随机分组分成模型组、汤剂组、针药组及阳性药组各26只。

2 方 法

2.1 仪器及试剂

研究仪器：洗板机（南京德铁HBS-4009），酶标仪（北京普天光PT-3502A），分析天平（梅特勒-巧利多仪器公司ME104E型），超低温冰箱（赛默飞世尔仪器公司702型），高速冷冻离心机智能生化培养箱（赛默飞世尔仪器公司Multifuge 11R型），匀浆机（德国IKA仪器公司D79219型），移液枪（上海佳安200µL、1000µL），手术器具包（上海通派生物科技）。

实验试剂：大鼠三磷酸腺苷酶（ATP）ELISA试剂盒，大鼠二磷酸腺苷酶（ADP）ELISA试剂盒，大鼠磷酸腺苷酶（AMP）ELISA试剂盒（均为武汉新启迪生物科技生产），乙醇（天津大茂化学药剂生产厂），水合氯醛（天津科密欧试剂公司），磷酸二氢钠（天津大茂化学药剂生产厂），磷酸氢二钠（天津科密欧试剂公司），头抱拉定注射液（汕头金石粉针剂有限公司），脑心通胶囊（陕西步长制药有限公司），华佗牌30号0.5寸毫针1盒。

2.2 动物模型制备

用Pulsinelli四血管闭塞法制作全脑缺血-再灌注模型。①所有大鼠进入实验室进行为期一周的适应性喂养，在造模前1天禁食；②造模进行时，应用调配好的10%水合氯醛安装0.35mL/kg用量予以腹腔注射，在大鼠麻醉后，将施术部位毛发予以剃除；③使大鼠俯卧并固定在手术台，将高头部提高约2cm，应用2%碘酒、75%酒精进行有效消毒；④在枕骨后，第1颈椎水平正中线行一个长为1.5cm纵切口，使背阔肌、斜方肌得以充分暴露，应用无菌摄子把其往两侧予以纯性分离，使第1颈椎横突翼得以暴露，再找到左、右双侧横突孔；⑤把已预热好的电凝器缓缓置入双侧横突孔内2次，首次停留5s，第2次停留3s，对双侧椎动脉有效烫凝，以构造永久性闭塞，在手术口滴1～2滴头抱拉定注射液进行感染预防，再缝合后再应用酒精消毒；⑥把大鼠仰卧并固定于手术台，进行消毒、备皮，在颈前正中部行一长度约为1cm纵切口，把气管两侧肌肉予以钝性分离，探查到颈总动脉，应用无菌镊子把迷走神经予以有效分离，并置线标记，在手术口处滴1～2滴头孢拉定注射液，缝合1针，予以消毒；第2天，把清醒大鼠置入干燥器内，应用适量乙醚予以麻醉待四肢雍软之后迅速取出，并让其仰卧固定在手术台，进行消毒，把颈部切口开启，找到之前置入的颈总动脉标记线，将颈总动脉提起，待清醒予以夹闭，以构成全脑缺血，15min后松开，恢复血液灌注，术后滴1～2滴头孢拉定注射液，缝合，消毒；⑦造模结束后，对各组大鼠神经功能缺损进行评分，1～3分为成功、0分为失败。

2.3 针刺穴位

选择百会、水沟两穴位，其中水沟穴在唇裂正中、鼻尖下端1mm部位、百会则在顶骨正中。

2.4 中药汤剂

用补阳还五汤（黄芪120g，地龙、红花、川芎、桃仁各3g，当归尾、赤芍各5g），置入5000mL烧瓶内，注入2000mL清水后和回流冷凝装置相连，加热沸腾之后进行计时30min，趁热将要药液倒出，再往烧瓶注入2000mL清水，加热到沸腾后计时30min，趁热取液。最后将前后两次药液合并调整至所用浓度，冷却密封保存。

2.5 干预方法

正常组、假手术组、模型组均按10mL/kg予0.9%生理盐水。汤剂组按10mL/kg药量给予浓度为1.496g/mL补阳还五汤汤剂。针药组予和汤剂组相同用量的补阳还五汤并辅以针刺，百会穴30号0.5寸华佗牌毫针向前沿皮刺0.5～1.0cm，水沟穴用相同型号毫针自穴位处向鼻中隔方向斜刺0.2～0.3cm。左手持水沟、右手持百会针柄，以120次/min左右捻转1min，留针30min，次期间每5min捻转1次、每次捻转lmin。阳性药组给与浓度为0.050g/ mL脑心通胶囊水溶液10mL/kg。

2.6 取样及样本处理

每日1次，干预3周后禁食，第2天用水合氯醛予以麻醉，麻醉起效后快速断头取脑，并妥善置于低温冰盒内，将脑膜、血管快速去除，应用手术刀片切取双侧大脑缺血皮质，应用锡纸包好，并快速置入干冰内速冻15min，再取出予以标记，置入-80℃冰箱内妥善保存，等待检测。把保存的样本取出，进行称重，在0.01MPBS中洗1次同时按照1∶9比例注入生理盐水，放置到冰水内予以匀浆。匀浆后，置入高速冷冻离心机内，5000rmp离心10min，选取上清液检测。应用各自酶联免疫试剂盒，采取酶联免疫吸附法化测定各组样本脑组织的ATP、ADP、AMP等含量。

2.7 统计处理

用SPSS20.0软件进行统计学处理，计量数据用均数和标准差（±s）表示，用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

各组脑组织液ATP、ADP含量比较见表1。

表1 各组脑组织液中ATP、ADP含量比较 （µmol/g，±s）

表1 各组脑组织液中ATP、ADP含量比较 （µmol/g，±s）

注：与正常组及假手术组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

组别　n　ATP　ADP正常组　8　8.02±0.34　4.72±0.54假手术组　8　7.97±0.31　4.65±0.32模型组　26　2.64±0.29*　1.32±0.31*汤剂组　26　4.88±0.52△　2.47±0.26△针药组　26　5.87±0.37△　2.92±0.35△阳性药组　26　5.22±0.43△　2.45±0.26△

各组脑组织液AMP、TAN及EC值比较见表2。

表1 各组脑组织液AMP、TAN及EC值比较 （µmol/g，±s）

表1 各组脑组织液AMP、TAN及EC值比较 （µmol/g，±s）

注：与正常组及假手术组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05。

组别　n　AMP　TAN　EC正常组　8　1.32±0.24　13.94±0.52　0.71±0.02假手术组　8　1.35±0.26　13.85±0.47　0.68±0.04模型组　26　4.67±0.41*　8.16±0.28*　0.35±0.04*汤剂组　26　3.38±0.52△　9.35±0.52△　0.47±0.01△针药组　26　2.84±0.38△　9.97±0.37△　0.55±0.03△阳性药组　26　3.52±0.44△　9.41±0.44△　0.48±0.02△

4 讨 论

脑中风又分成缺血性中风和出血性中风［2］。研究发现，能量代谢障碍通常和脑缺血损伤存在密切关系。脑缺血导致能量代谢异常主要因脑缺血、能量被耗竭所致［3，4］。其中一些因素会导致神经细胞能量耗竭，另一些因素则能让细胞存活，在一定积极干预下可完全恢复。实践表明，针刺、中药等均是有效干预手段，可减轻脑缺血损伤，改善能量代谢异常。

通过造模成功大鼠实施不同干预方法，干预后和模型组相比，针药组、汤剂组、阳性药组脑组织中的ATP、ADP、TAN及EC含量均得到显著提升，并可使AMP的含量降低。而汤剂组、针药组、阳性药间无明显差异，针药组略高于两者。可知各干预方法均在一定程度上可改善大鼠脑组织中腺苷酸系统代谢水平，主要表现为ATP、ADP、AMP含量上变化，以及TAN、EC值的调节效用。

［1］ 武削，黄伟青，文锐玲，等.改良二血管阻断加低血巧法制作大鼠全脑缺血再灌注模型［J］.中国现代药物应用，2012，6（17）：4-5.

［2］ 刘亚明，郭继龙，刘必巧，等.中药地龙的活性成分及药理作用研究进展［J］.山西中医，2011，27 （3）：44-45.

［3］ 邱勇波，刘锦，武飞.黄芪化学成分及药理作用研究进展［J］.中国疗养医学，2011，20（5）：435-436.

［4］ 张义，任玉兰，王兴丽，等.现代针灸治疗中风偏疲选穴处方规律研究［J］.辽宁中医药大学学报，2012，14（9）；61-64.

［Abstract］Objective：To study the effect of acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction on brain energy metabolism of ischemic stroke rats. Method： 120 healthy SD rats were taken as the study object. 8 rats were selected as the normal group and 8 rats were selected as the sham operation group randomly. The rest rats were divided into the model group，decoction group， combination of acupuncture and Chinese herbs group and positive medicine group after models established by the four vessel occlusion method， with 26 rats in each group. The normal group， the sham operation group and the model group were given normal saline. The decoction group were given Buyang Huanwu Decoction. Combination of acupuncture and Chinese herbs group were treated with acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction. The positive medicine group were treated with Naoxintong. All the group were treated for 4 weeks. Result： The content of ATP and ADP， the value of TAN and EC increased and AMP decreased in combination of acupuncture and Chinese herbs group， decoction group and positive medicine group. There was statistical significance compared with that of the model group and the sham operation group （P＜0.05）. There was no statistical significance among the former three groups（P＞0.05）. Conclusion： Acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction has good improvement effect on brain energy metabolism of ischemic stroke rats，with anti cerebral ischemic injury effect.

Acupuncture；Buyang Huanwu Decoction；Rat model；Ischemic stroke；Brain energy metabolism

R246.633 ［文献标识码］B

1004-2814（2016）07-0639-02

2014年佛山市医学类科技公关项目（2014AB000562）

2016-04-13