磁性附着体中软磁合金引起小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究

于学垠

（沈阳市第七人民医院口腔科，辽宁 沈阳 110003）



磁性附着体中软磁合金引起小鼠成纤维细胞L929凋亡的研究

于学垠

（沈阳市第七人民医院口腔科，辽宁 沈阳 110003）

【摘要】目的 研究磁性附着体中软磁合金对小鼠成纤维细胞L929凋亡的影响，进而评价其生物相容性。方法 提取含钛合金、软磁合金、钴铬合金的浸提液，分别以25%、50%、100%浓度处理L929细胞24 h，并测量细胞凋亡率（AP）。结果 随着金属浸提液浓度的增加，L929细胞凋亡率亦增加，软磁合金与含钛合金及钴铬合金之间AP值的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 本实验为磁性附着体的临床应用提供一定的生物学依据。磁性附着体中软磁合金的生物相容性要求合临床应用材料的要求，可以在临床推广。

【关键词】生物相容性；磁性附着体；凋亡

磁性附着体是一种可以增加义齿的固位和稳定的装置，主要的作用原理是磁性材料之间的磁力作用，使义齿吸附到基牙或种植体上［1-3］。由于其磁性附着体的衔铁选用高级的软磁合金，具有优良的机械性能和耐腐蚀性。对于软磁合金的细胞毒性，已进行过相应的研究［4］。对于其引起的细胞凋亡，国内外研究较少。本实验通过软磁合金材料浸提液处理小鼠成纤维细胞L929，以确定软磁合金引起的细胞凋亡率（apoptotic rate，AP），从而为磁性附着体的临床应用安全性等问题提供生物学依据。

1 材料与方法

1.1材料：含钛合金（森田公司，日本）、软磁合金（中国科学院金属研究所）、钴铬合金（登士柏公司，美国），小鼠成纤维细胞L929（中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所）。

1.2方法

1.2.1浸提液的制备：将三种金属材料制成圆片形，浸在RPMI-1640培养液中，取得材料浸提液。试剂与金属材料之间的比例按照0.1 mL/cm2，在冰箱里保存，温度为-70 ℃，每48 h收集一次。

1.2.2材料浸提液与细胞接种培养：选取对数生长期的小鼠成纤维细胞L929，分别加入1 mL 25%、50%、100%浸提液，培养24 h。同时设立对照组。实验分组为：Ⅰ阴性对照组（RPMI-1640培养的L929细胞）；Ⅱ含钛合金组；Ⅲ软磁合金组；Ⅳ钴铬合金组；V阳性对照组（100 µg/mL丝裂霉素处理）。

1.2.3细胞凋亡的检测：培养板在浸泡24 h后取出，使用0.25%的胰蛋白酶消化l min后将液体制成细胞悬液，收集于流式管中，使用1000 r/mim的离心机离心5 min，在使用PBS冲洗2次，去上清，加入l mL碘化丙锭（propidium iodide，PI）混合染色液，混匀，避光30 min。与中国医科大学附属一院中心实验室合作，对样本进行流式细胞仪检测。使用通过cellguest软件分析凋亡率。

2 结 果

各实验组的凋亡率，见表1。

表1　L929细胞凋亡率（%）

3 讨 论

根据ISO相关标准［5］，对于目前应用于人体的材料，必须进行离体生物学实验，检测其生物相容性。评价生物相容性的一个关键性指标为维持进而促进细胞的生长［6］。研究发现磁性附着体中软磁合金具有极微弱的细胞毒性，对于其引起的细胞凋亡，国内外研究较少。

本实验的试验方法主要采取PI染色法结合流式细胞术。主要是检测小鼠成纤维细胞L929在磁性附着体中软磁合金的浸泡液中的凋亡情况。同时选取目前已知的生物相容性较高的含钛合金及钴铬合金作为对照组。实验结果显示：小鼠L929细胞在三种不同浓度的软磁合金浸提液中均可发现细胞凋亡现象。三种浸提液中的细胞凋亡率有差异，差异有统计学意义（P＜0.05）。并且凋亡率与浓度之间存在正相关。相同浓度的含钛合金、钴铬合金、软磁合金浸提液引起的L929细胞凋亡率之间无显著性差异（P＞0.05）。由于含钛合金、钴铬合在临床上引用较为广泛，因此，细胞凋亡率与其没有统计学差异的软磁合金也可安全的应用于临床。

综上所述，本试验为可以证实磁性附着体中软磁合金符合临床应用的生物相容性，可以广范应用于临床。

参考文献

［1］ Hideo Matsumura，Koji Kawasaki.Magnetically connected removable sectional denture for a maxillary defect with severe undercut:A clinical report［J］.J Prosthet Dent，2000，84（1）:22-26.

［2］ Ikuya Watanaba，Yasuhiro Tanaka，Chikahiro Ohkubo，et al.Application of cast magnetic attachments to sectional complete

中图分类号：R783

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）04-0030-02

Induction of Apoptosis by Magnetic Attachment in the Mouse Fibroblast L929 Cells

YU Xue-yin
（Department of Stomatology， the Seventh People′s Hospital of Shenyang， Shenyang 110003， China）

［Abstract］Objective To evaluate the biocompatibility of stainless steel which will be used in the new magnetic attachment by apoptosis assay for the mouse fbroblast L929 cells. Methods The cells are cultured in extracting liquids of different experimental materials which concentration is 25%， 50%， 100% for 24 hours， then determine the apoptotic rate of the cells. Results The apoptotic rate of the same material raise along with the improvement of the density. There is no difference among the materials （P＞0.05）. Conclusion The soft magnetic stainless steel meets the requirement for clinical application.

［Key words］Magnetic attachment； Biocompatibility； Apoptosis