不同稀释液保存公猪精液的效果试验

王　龙

(衢州市畜牧兽医局，浙江衢州 324200)



不同稀释液保存公猪精液的效果试验

王龙

(衢州市畜牧兽医局，浙江衢州 324200)

摘要：养猪生产中推广应用人工授精技术，可明显提高种猪受胎率，加速猪种改良进程和降低疫病风险。本试验采用常用的Modena、BTS液及自配液Ⅰ、自配液Ⅱ等四种稀释液保存公猪精液的效果试验。结果表明：自配液Ⅰ保存精液，精子存活时间达147 h，其次为BTS液，精子保存时间达136 h，且自配液Ⅰ的配种受胎率显著优于Modena和自配液Ⅱ(P<0.05)。

关键词：稀释液；保存时间；公猪精液

猪人工授精技术目前已在养猪生产中得到广泛应用，是猪种改良的有效途径之一，不仅可明显提高种猪的受胎率，而且可明显降低疫病风险和提高养猪生产效益。但是，由于精液保存时间与稀释液的品质有着明显关系。为了实现液态精液的长期保存，达到跨县(市)统一供精的目的，扩大人工授精技术的推广应用，笔者对四种不同稀释液的保存效果进行试验，以便筛选出最佳的稀释液配方，延长精液保存时间，特进行本试验。

1材料与方法

1.1药品及试剂葡萄糖(分析纯)、二水柠檬酸三钠、碳酸氢钠、EDTA、氯化钠、氯化钾、青链霉素、双蒸水等。

1.2精液采集手握法采集5头繁殖历史清楚，已达体成熟，健康无病公猪的精液。4层纱布过滤除去胶体，检查活率，密度，在37℃环境下0.5 h内送至实验室备用。

1.3精液稀释

1.3.1稀释液稀释液为市场常用的Modena[1]和BTS[2]液及本局实验室自配液Ⅰ和自配液Ⅱ(详见表1)。

1.3.2稀释程序将稀释液置于水浴锅中加热至34℃。将采集的公猪精液经活力、密度检查后，分别以1∶1稀释，室温下放置2～3 h，用纱布包裹， 置冰箱中备用。

表1　四种不同稀释液的配方组成

1.4精液品质检查

1.4.1精子活率测定精液1滴置于载玻片，显微镜观察，采用10级评分法评定。

1.4.2精子畸形率测定采用凡那他氏镀银法染色。精液1滴抹片，自然风干，滴胡氏液固定1 min，水洗10 s后将染色液滴于载玻片上，缓慢加热气化，水洗30 s。加0.25%硝酸银2～3滴，滴氨水1滴，左右摇晃，产生浑浊黄褐色，酒精灯加热，产生白雾状为止。水洗，干后镜检。

1.4.3精子顶体完整率检测采用考马斯亮蓝染色液(R250)50 mg溶于100 mL蒸馏水，煮沸溶解，0.45 μm滤膜过滤。加入高氯酸3.5 mL，配成CBB高氯酸染色液染色。染色前，将染色液置于37℃水浴锅中预热10 min，将精液涂片置于CBB高氯酸染色液中浸染5～7 min；水洗，干后镜检。

1.4.4精子质膜完整性检查采用低渗肿胀法检查。取精液50 μL，置于37℃低渗果糖液1 mL中,混匀。30 min后,取1滴于血细胞计数板上,显微镜下观察5个视野，至少计数200个精子,计算弯尾精子百分率。

1.4.5精子存活时间检测取精液1 mL置于载玻片，显微镜下观察5个视野，每隔1 h检测一次活率，当活率下降一半时，每隔0.5 h检查一次，直至活率降为0.4为止。

1.5数据处理采用单因素方差分析，每组重复5次，比较解冻后精子存活率、畸形率、质膜完整率、顶体完整率。采用SPSS 13.0软件one-way ANOVA 进行方差分析。

2结果与分析

2.1不同稀释液对精子存活时间的影响试验结果详见表2。

表2　不同稀释液对精子存活时间的影响试验结果

注：同列数据肩标小写字母不同者表示差异显著(P<0.05)；大写字母不同者表示差异极显著(P<0.01)；数据无肩标或肩标字母相同者表示差异不显著(P≥0.05)，下同。

由表2可见，四种不同稀释液，精子存活时间以BTS液和自配液Ⅰ最长，存活时间分别为136 h和147 h，与Modena及自配液Ⅱ相比，差异显著(P<0.05)；自配液Ⅱ保存精子时间最短，效果最差。

2.2不同稀释液对精子形态的影响试验结果详见表3。

表3　不同稀释液对精子形态的影响试验结果

由表3可见，使用不同稀释液保存精液24 h后，自配液Ⅱ畸形率显著高于其他各组(P<0.05)，弯尾率则显著低于其他各组(P<0.05)。BTS液、Modena液和自配液Ⅰ各组间畸形率和弯尾率差异不显著(P>0.05)。自配液Ⅰ顶体完整率明显优于其他各组(P<0.05)。

2.3不同稀释液对母猪受胎率及产仔数的影响试验结果详见表4。

表4　不同稀释液对母猪受胎率及产仔数的影响试验结果

由表4可见，采用不同稀释液稀释精液，受胎率以自配液Ⅱ效果最差(P<0.05)，自配液Ⅰ效果优于BTS和Modena；比较活仔数和产仔数，各组差异不显著(P>0.05)。

3小结与讨论

3.1不同稀释液的精液稀释效果稀释液的主要作用在于扩大精液的利用率，增强精子的体外存活时间[3]。优质稀释液不在于稀释液所含营养成分的高低及配方的复杂性，主要在于稀释液是否能给精子提供体外存活的条件[4]。影响精子体外生存的条件主要与渗透压、pH及离子平衡等因素有关[5]。本次试验表明，虽然自配液Ⅰ配方简单，但效果优于其他稀释液，Modena液虽配方复杂，但稀释效果并不十分理想。自配液Ⅱ的稀释效果不够理想则可能与K、Ca离子失衡等因素有关，有待进一步研究讨论。

3.2安钠咖在稀释液中的作用本次试验比较了四种稀释液的稀释效果，结果自配液Ⅰ效果最好。自配液Ⅰ中主要含有安钠咖，安钠咖是安息香酸钠与咖啡因合成的一种药物,咖啡因能作用于细胞上的特异受体,抑制磷酸二酯酶活性,增强cAMP，加速细胞新陈代谢[6-8]。本试验表明,稀释液中添加安钠咖,当添加量为5 mL时，其稀释效果显著优于其他稀释液。

3.3从精子存活率及配种后受胎率、产仔数等指标看，采用自配液Ⅰ效果最好，且配方简单，适于实际生产中推广应用。

参考文献

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[3]谢成侠，刘铁铮编著.家畜繁殖原理及其应用[M].南京:江苏科学技术出版社，1994,42.

[4]W.M.C Maxwell and L.A. Johnson. Membrane status of boar spermatozoa after cooling or cryoppreservation[J].Theriogenology ，1997，46:209-219.

[5]桑润滋主编.动物繁殖生物技术[M].北京:中国农业出版社，2002.

[6]黄成全，杨军祥，等.咖啡因提高山羊精液冷冻效果试验[J].甘肃畜牧兽医.1997，27(1)：5-6.

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收稿日期：2014-12-01

中图分类号：S828.3+4

文献标识码：A

文章编号：1005-7307(2016)04-0003-003