幽门螺杆菌相关性萎缩性胃炎和胃腺癌的NF-B活性变化的相关性分析

孟曼 夏云红 黄震琪 王为民 高明珠★

论著

幽门螺杆菌相关性萎缩性胃炎和胃腺癌的NF-B活性变化的相关性分析

孟曼 夏云红 黄震琪 王为民 高明珠★

目的 探讨核因子-B（NF-B）在幽门螺杆菌（Hp）相关性萎缩性胃炎和胃腺癌中的活性变化以及相关性。方法 选取2014年6月至2015年1月幽门螺旋杆菌（Hp）相关性萎缩性胃炎患者67例，胃腺癌患者（Hp阳性）36例，同时选取浅表性胃炎（Hp阴性）患者42例为对照组，检测各组胃黏膜组织NF-B表达及活性。结果 所有患者胃黏膜组织标本免疫组化染色结果显示，NF-B在胃腺癌组织标本中表达最强，其次为Hp相关性萎缩性胃炎，而浅表性胃炎组织标本中NF-B表达最弱；胃腺癌组NF-B活性值为（11087.26±974.20），明显高于萎缩性胃炎组和浅表性胃炎组，差异有统计学意义（P＜0.05）；萎缩性胃炎组NF-B活性值为（8734.65±783.19），明显高于浅表性胃炎组的（56.13±24.09），差异有统计学意义（P＜0.05）；浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃腺癌NF-B表达强度比较差异有统计学意义（P＜0.05），其中胃腺癌NF-B表达强度明显高于其他浅表性胃炎和萎缩性胃炎。结论 幽门螺杆菌相关性萎缩性胃炎和胃腺癌的NF-B活性明显增强，NF-B信号通路可能参与幽门螺杆菌相关性胃黏膜癌变过程。

幽门螺旋杆菌 NF-B 萎缩性胃炎 胃腺癌

慢性萎缩性胃炎是以胃黏膜变薄、上皮萎缩、腺体数目减少及伴有肠化生或幽门化生等为特征的慢性消化系统疾病。胃腺癌是由胃腺体细胞发生肿瘤恶变所导致，其发病率占胃恶性肿瘤的95%［1］。幽门螺杆菌（Hp）已被证实是慢性萎缩性胃炎和胃腺癌的主要病因。核因子-B（NF-B）是一种作用于细胞生长、分化以及凋亡等过程的核蛋白因子。NF-B的活化可受到Hp的影响［2］。本文探讨NF-B的活性变化与Hp相关性萎缩性胃炎及胃腺癌的相关性，现报道如下。

1　 临床资料

1.1 一般资料 选取2014年6月至2015年1月本院治疗的幽门螺旋杆菌（Hp）相关性萎缩性胃炎患者67例，其中男47例，女20例，平均年龄（50.47±8.39）岁。胃腺癌患者（Hp阳性）36例，其中男21例，女14例；平均年龄（63.17±5.89）岁。根据TNM分期标准，T1+T3浸润11例、T3+T4浸润25例；淋巴结转移27例、未发生淋巴结转移9例；高中分化12例、低分化24例。同时选取胃镜活检为浅表性胃炎（Hp阴性）患者42例为对照组，其中男31例，女11例；平均年龄（25.49±4.68）岁。纳入标准：（1）患者临床病理资料保存完好。（2）患者入院前＜1个月未服用过抗生素。（3）未接受过抗Hp治疗。（4）患者及家属知情同意，并签署同意书。排除标准：临床病理资料不完整；入院前1个月曾服用抗生素或接受抗Hp治疗。

1.2 Hp检测 Hp检测前＜4周要求受检者未服用铋剂、抑酸剂及抗生素。采用14C呼气实验半定量分析Hp感染情况，14C呼气卡购自安徽养和医疗器械设备有限公司。同时检测血清Hp抗体，Hp检测试剂卡购自深圳惠安生物科技有限公司。两项检测均为阳性为Hp阳性。

1.3 免疫组化染色 免疫组化采用S-P法染色。NF-B抗原进行微波修复，石蜡切片脱蜡至水，PBS漂洗，室温孵育10min，消除内源性过氧化物酶活性。蒸馏水漂洗，PBS浸泡5min，抗原微波修复冷却后取出切片，PBS浸泡5min。滴加稀释后一抗，稀释度为1∶150。PBS漂洗，37℃温箱中孵育20min，PBS漂洗后应用DAB显色2min，蒸馏水冲洗，苏木素复染、盐酸酒精分化、碳酸锂反蓝，蒸馏水冲洗，酒精脱水，二甲苯透明，树脂封片。以已知肺癌（NF-B）阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 NF-B活性检测 采用EMSA法检测NF-B活性，EMSA试剂盒购自Promega公司。先提取并定量NF-B，并用探针标记纯化，配制4%非变性聚丙烯酰胺凝胶与NF-B发生结合反应，于0.5X TBE电泳液中180V恒压电泳60min，将胶片剥离，并用电灯烘干，采用同位素成像分析灰度值。

1.5 结果判断 NF-B表达于细胞核以及胞浆，呈现黄色或棕黄色着色或颗粒，采用半定量积分法判断结果：（1）0分：阳性细胞＜5%，1分：6%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分：＞75%。（2）无着色：0分；浅黄色：1分；黄色：2分；棕黄色：3分。评分得分为（1）×（2），阴性：0分；弱阳性：1～4分；阳性：5～8分；强阳性：9～12分。

1.6 统计学方法 采用SPSS19.0软件。计量资料以（±s）表示，组间比较用单因素方差分析，两两比较用LSD检验，等级资料采用Kruskal-Wallis检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　 结果

2.1 免疫组化染色情况 从各患者胃黏膜标本免疫组化染色情况可看出，NF-B在胃腺癌组织标本中表达最强，其次为Hp相关性萎缩性胃炎，而浅表性胃炎标本中NF-B表达最弱，见图1。

图1 免疫组化染色情况

2.2 各组胃黏膜标本组织NF-B活性比较 胃腺癌组NF-B活性值为（11087.26±974.20），明显高于萎缩性胃炎组和浅表性胃炎组，差异有统计学意义（P＜0.05）；萎缩性胃炎组NF-B活性值为（8734.65±783.19），明显高于浅表性胃炎组的（56.13±24.09），差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各组胃黏膜标本组织NF-B活性比较（±s）

表1 各组胃黏膜标本组织NF-B活性比较（±s）

注：与浅表性胃炎组比较，*P＜0.05；与萎缩性胃炎组比较，#P＜0.05

组别　n　　活性值　F值　P值萎缩性胃炎组　67　8734.65±783.19*胃腺癌组　36　11087.26±974.20*#浅表性胃炎组　42　356.13±24.09　108.463　0.000

2.3 各组胃黏膜组织NF-B表达强度分析 浅表性胃炎、萎缩性胃炎和胃腺癌NF-B表达强度比较差异有统计学意义（P＜0.05），其中胃腺癌NF-B表达强度明显高于其他浅表性胃炎和萎缩性胃炎，而浅表性胃炎NF-B表达强度最弱。见表2。

表2 各组胃黏膜组织NF-B表达强度分析（n）

3　 讨论

Hp属于革兰阴性弯曲杆菌，可分为两型［3］。Ⅰ型菌株可分泌空泡细胞毒素VacA、细胞毒素相关基因CgaA蛋白等毒素，可导致胃黏膜广泛炎症及损伤，具有较强的致病性。Ⅱ型菌株由于不产生CgaA蛋白，致病力较弱［4］。Hp可引起胃黏膜组织癌变，被认为是I类致癌因素［5］。

由于Hp分泌的CgaA蛋白可使细胞从Gl/S期转化，使Hp对胃黏膜上皮细胞具有双向调节作用，即一方面促进胃黏膜细胞凋亡，另一方面通过活化转录因子促进胃黏膜细胞增殖。当细胞发生基因突变且无法修复时，通过细胞凋亡程序可使突变细胞死亡，从而降低肿瘤发生的风险。由于Hp可导致胃黏膜细胞过度凋亡，异常凋亡又可导致局部细胞代偿性过度增殖，过度增殖又增加基因突变的风险，从而增加胃黏膜细胞不典型增生及癌变的机会。

NF-B是肿瘤发生的关键调节蛋白，NF-B活化是炎性反应的中心环节［6］。NF-B信号通路在Hp相关性萎缩性胃炎以及胃腺癌的发病中起着重要作用［7］。研究显示，Hp可通过释放炎性因子以及依赖磷脂酰肌醇-3激酶/Akt途径（PI3K/Akt）和ERK1/2MAPK等多种途径激活体内NF-B信息传导通路，促进胃黏膜上皮细胞恶变［8］。NF-B是在肿瘤发生之前活化的，可认为NF-B活化是肿瘤发生的原因之一，且在肿瘤形成早期即起着关键作用［9］。活化的NF-B一方面可调节IL-8、单核细胞趋化蛋白（MCP-1）、肿瘤坏死因子等慢性炎性介质的释放，另一方面可调节cyclinD1、bcl-xl、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP-9）等多种参与胃腺癌发生的途径。而大量的炎性介质又可进一步促进NF-B活化，形成正反馈调节，导致炎症反应持续发生［10］。而根除Hp则可有效抑制NF-B的活性［11］。本资料结果显示，从各患者胃黏膜标本免疫组化染色情况可看出，NF-B在胃腺癌组织标本中表达最强，其次为Hp相关性萎缩性胃炎，而浅表性胃炎标本中NF-B表达最弱。表明NF-B对胃腺癌以及Hp相关性萎缩性胃炎的发生具有重要作用。

有研究显示，NF-B在正常细胞中活化时间短，活化量及活性值小［12］。但在肿瘤细胞中，NF-B活化可持续存在。本资料结果显示，比较各胃黏膜标本组织NF-B活性得出，胃腺癌组NF-B活性值（11087.26±974.20）明显高于萎缩性胃炎组和浅表性胃炎组，萎缩性胃炎组NF-B活性值（8734.65±783.19）明显高于浅表性胃炎组（56.13±24.09），差异有统计学意义（P＜0.05）。该结果发现胃腺癌NF-B表达强度明显高于浅表性胃炎和萎缩性胃炎，而浅表性胃炎NF-B表达强度最弱，虽然无法确定NF-B活化是否是Hp致病机制之一，但其可能存在一定的关联性，其需以后临床进一步观察已经进一个实验研究。

综上所述，NF-B信号通路可能参与Hp相关性胃黏膜癌变过程，根除Hp可能有效预防Hp相关性萎缩性胃炎和胃腺癌的发生发展，降低癌变的风险。

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Objective To investigate the activity changes of nuclear factor-B （NF-B） in Helicobacter pylori associated atrophic gastritis and stomach adenocarcinoma and the correlation analysis. Methods From 2014 June to 2015 January 67 cases of helicobacter pylori （Hp）associated atrophic gastritis in our hospital who underwent treatment ，36 cases of them were with stomach adenocarcinoma（Hp positive），and selected the superfi cial gastritis （Hp negative） in 42 patients as the control，the expression of NF-B and activity were detected in gastric mucosa of each group . Results Immunohistochemical staining in each patients gastric mucosa tissue showed that the strongest expression of NF-B in gastric adenocarcinoma tissue，followed by Hp associated atrophic gastritis，while NF- B expression was weak in tissue of superfi cial gastritis； gastric adenocarcinoma group NF- B activity value was（11087.26±974.20），was signifi cantly higher than that in atrophic gastritis group and superfi cial gastritis group，the difference was statistically signifi cant（P＜0.05）； atrophic gastritis group NF-B activity atrophy was （8734.65±783.19），was signifi cantly higher than that in superfi cial gastritis group（56.13±24.09），the difference was statistically signifi cant （P＜0.05）；Superfi cial gastritis，atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma NF-B expression intensity difference were statistically signifi cant（P＜0.05）. gastric adenocarcinoma NF-B expression intensity was signifi cantly higher than that in superfi cial gastritis and atrophic gastritis. Conclusions Helicobacter pylori associated atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma increase the activity of NF-B，NF-B signaling pathway may be involved in Helicobacter pylori associated gastric mucosal carcinogenesis process.

Helicobacter pylori NF-B Atrophic gastritis Stomach adenocarcinoma

国家自然科学基金资助项目（81472331）

23000 安徽医科大学附属合肥医院肿瘤内科（孟曼夏云红 王为民）230000安徽医科大学第一附属医院血液科 （黄震琪）230000 安徽医科大学第二附属医院肿瘤科 （高明珠）
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