江香薷挥发油的化学成分分析及其对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

李知敏，王 妹，彭 亮，*（江西科技师范大学药学院，江西 南昌 33003）

江香薷挥发油的化学成分分析及其对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用

李知敏1，王 妹2，彭 亮1，*
（江西科技师范大学药学院，江西 南昌 330013）

目的：研究江香薷挥发油的化学成分及其对金黄色葡萄球菌生物被膜的影响。方法：运用气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）技术鉴定江香薷挥发油的化学成分，并对其中相对含量较大的8 种化学成分的金黄色葡萄球菌生物被膜抑制作用进行研究。结果：GC-MS分析鉴定出29 种成分，其中相对含量比较大的成分为百里香酚、香荆芥酚、对聚伞花素、γ-松油烯、百里香酚乙酸酯、α-石竹烯、3-蒈烯和香荆芥酚乙酸酯。江香薷挥发油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的抑制率可达91.3%，对成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜清除率为78.5%，香荆芥酚、3-蒈烯、香荆芥酚乙酸酯和α-石竹烯对金黄色葡萄球菌生物被膜的形成抑制作用显著，其中3-蒈烯的抑制率最高，为93.9%，而对聚伞花素和百里香酚乙酸酯对成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜清除作用比较明显。结论：江香薷挥发油对金黄色葡萄球菌生物被膜形成有较强的抑制作用，也具有一定的成熟金黄色葡萄球菌生物被膜清除作用，这可能是江香薷挥发油中多种化学成分共同作用的结果。

江香薷；挥发油；气相色谱-质谱分析；金黄色葡萄球菌生物被膜；抑制作用

细菌生物被膜（bacterial biofilm，BBF）是指细菌附着于惰性的接触表面生长，分泌多糖、蛋白质等多聚物构成胞外基质将其自身包裹其中而形成的大量细菌聚集物［1］。研究［2］表明，BBF的形成是细菌产生耐药性的重要原因之一，由于当前的抗菌药物几乎不能穿透BBF杀死膜内的细菌，从而导致体内的慢性持续性感染。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种重要的食源性病原菌，也是引起医源性感染的常见病原体［3-4］。近年来，金黄色葡萄球菌引起的医院内感染越来越多，临床分离到的多种金黄色葡萄球菌突变株显示，该菌对大部分抗菌药（大环内酯类、喹诺酮类和β-内酰胺类）均有耐药性［5-10］，并呈逐年上升趋势。因此，寻求抗BBF的药物成为现下药物研发领域的热点之一。

江香薷（Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru）是唇形科年生草本植物，是中国药典收载的正品香薷之一［11］，其主产地为江西省分宜县和新余市，味辛，微温，是药食同源的药材，具有良好的食疗作用［12］。具有化湿和中，发汗解表的功效，用于治疗消暑湿，恶寒发热，无汗胸闷，腹痛吐泻等症状［13］。挥发油是江香薷中的主要成分之一，具有抗菌、抗衰老、提高免疫力、抗氧化和杀虫等作用［14-15］。目前，对江香薷挥发油及其中主要化学成分是否具有金黄色葡萄球菌BF的抑制作用还鲜见报道。本实验旨在研究江香薷挥发油的化学成分及其对金黄色葡萄球菌BF的影响，为研究挥发油对金黄色葡萄球菌BF的形成的抑制作用还是对成熟的金黄色葡萄球菌BF的清除作用提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

江香薷中药饮片由江西樟树天齐堂中药饮片有限公司提供，江西科技师范大学药学院生药教研室鉴定为唇形科植物江香薷（Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru）的干燥茎叶。金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC 25923）、百里香酚对照品（含量为99.9%） 中国食品药品检定研究院；香荆芥酚、3-蒈烯、γ-松油烯、对聚伞花素对照品（含量＞95%）美国Dr.Ehrenstorfer公司；百里香酚乙酸酯对照品（含量≥98%） 美国Scientific Researh Special公司；香荆芥酚乙酸酯对照品（含量≥99%） 美国ChromaDex.Inc公司；α-石竹烯对照品（含量≥93.0%） 东京化成工业株式会社；胰蛋白胨大豆肉汤（tryptic soy broth，TSB）、琼脂粉、胰蛋白胨、牛脑心浸粉、牛肉膏、酸水解酪蛋白、酵母浸粉 北京博奥星生物技术有限责任公司；葡萄糖、可溶性淀粉 天津市福星化学试剂厂；刚果红、结晶紫 天津市化学试剂厂；精密pH试纸 上海三爱思试剂有限公司；氢氧化钠、氯化钠、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠、氯化钾、蔗糖、无水乙醇、二甲基亚砜、盐酸均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

MH-1000调温型电热套 北京科伟永兴仪器有限公司；6890N+5975i型气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）联用仪（配有GC-MS工作站及MSD数据处理系统） 美国安捷伦公司；Vortex-Genie2涡旋振荡器 美国Scientific Industries公司；FA2004N电子天平 上海精密科学仪器有限公司；XS203S电子精密天平 瑞士梅特勒-托利多（上海）仪器有限公司；BSC-1000IIA2生物安全柜 苏净集团苏州安泰空气技术有限公司；SPX-100BZ生化培养箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂；LDZM-40KCS立式压力蒸汽灭菌器上海申安医疗器械厂；MK3型酶标仪 赛默飞世东（上海）仪器有限公司；UV-2550紫外-可见分光光度仪日本岛津公司。

1.3 方法

1.3.1 江香薷挥发油的提取

称取100 g江香薷中药饮片置于挥发油提取器中，按照《中国药典》2015版附录：XD挥发油测定法中甲法，用电热套加热，水蒸气蒸馏提取5 h，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5 mm处为止。放置1 h以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度0线平齐，读取挥发油量，收集淡黄色油状液体，用无水硫酸钠干燥，装于棕色瓶中低温保存备用。江香薷中挥发油提取量为1.5 mL/g。

1.3.2 江香薷挥发油的GC-MS分析

GC条件：HP-5MS弹性石英毛细管柱（30 m× 0.25 mm，0.25 μm）；载气为99.999%的高纯氦气（He）；进样口温度250 ℃；载气流量1.0 mL/min；柱前压7.69 psi；进样量1.0 μL；分流进样，分流比为50∶1；升温程序：色谱柱初始温度为50 ℃，保持2 min，以3 ℃/min升至100 ℃，保持10 min；再以1 ℃/min升至120 ℃，保持5 min；接着以2 ℃/min升至150 ℃，保持3 min；最后以4 ℃/min升至250 ℃后，保持5 min。

MS条件：电子电离源；离子源温度230 ℃；四极杆温度150 ℃；倍增电压1.230 kV；电离能量69.9 eV；接口温度280 ℃；溶剂延迟3 min；质量扫描范围35～550 u。

按照上述GC和MS条件检测江香薷挥发油，得总离子流图，经MS扫描总离子流图中的各峰后得到质谱图，检索NIST 11质谱数据库，根据各峰的保留指数和各峰质谱图和NIST 11质谱数据库中的质谱图对比，同时结合人工谱图解析，各色谱峰的质谱图与文献［16-19］核对，从而确定江香薷挥发油中的化学成分，并采用峰面积归一化法测定各成分相对含量。

1.3.3 江香薷挥发油对金黄色葡萄球菌BF的影响

1.3.3.1 培养基及供试药溶液的配制

水解酪蛋白（Mueller-Hinton，MH）肉汤的配制：称取牛肉膏1.2 g、可溶性淀粉0.3 g、酸性水解酪蛋白3.5 g置于500 mL烧杯中，加200 mL蒸馏水，加热溶解后，冷却至50 ℃左右，用0.1 mol/mL NaOH溶液调节pH值至7.4±0.1，装于250 mL的锥形瓶中高压灭菌备用。

鲁利亚-贝尔塔尼（Luria-Bertani，LB）琼脂培养基的配制：称取胰蛋白胨2.0 g、酵母提取物1.0 g、NaCl 2.0 g、琼脂3.0 g，置于500 mL烧杯中，加200 mL蒸馏水，加热溶解后，冷却至50 ℃左右，用0.1 mol/mL NaOH溶液调节pH值至7.4±0.1，装于250 mL的锥形瓶中高压灭菌备用。

刚果红琼脂培养基的配制：先称取刚果红0.04 g溶于装有10 mL蒸馏水的试管中，再称取牛脑心浸粉3.7 g、蔗糖5.0 g、琼脂1.0 g，置于500 mL烧杯中，加100 mL蒸馏水，加热溶解后，冷却至50 ℃左右，用0.1 mol/mL NaOH溶液调节pH值至7.4±0.1，装于250 mL锥形瓶中高压灭菌备用。

含质量分数2.5%葡萄糖的TSB培养基配制：称取6.0 g TSB、5.0 g葡萄糖，置于500 mL烧杯中，加200 mL蒸馏水，加热溶解，装于250 mL锥形瓶中高压灭菌备用。

最低抑菌浓度（minimun inhibitory concentration，MIC）测定的供试药溶液配制：分别精密称取10.00、10.00、19.52、207.80、204.00、233.28、7.80、205.68、20.28 mg江香薷挥发油、百里香酚、香荆芥酚、3-蒈烯、γ-松油烯、香荆芥酚乙酸酯、百里香酚乙酸酯、对聚伞花素、α-石竹烯，先用适量的二甲基亚砜（最终含量不大于体积分数2%）充分溶解称好的供试药，再用MH肉汤培养基稀释至0.5 mL，混合均匀，用0.22 μm无菌水相针式过滤器过滤，备用。

1.3.3.2 菌株的预处理

精密称取0.2 mg金黄色葡萄球菌ATCC 25923冻干粉，置于5 mL含质量分数2.5%葡萄糖的TSB培养基中，37 ℃培养24 h后，涂布100 μL菌液于倒有20 mL LB培养基的平板上，37 ℃条件下培养24 h，选择LB平板上培养出来的单个菌落接种于刚果红培养基，经37 ℃培养48 h后，筛选出菌落变为黑色带晶体且生长状况良好的阳性菌株进行挥发油及其各对照品对金黄色葡萄球菌BF的实验。

1.3.3.3 MIC的测定

采用肉汤常量稀释法［20-22］测定江香薷提取物对金黄色葡萄球菌的MIC。

菌液的配制：用无菌接种环挑取10 株金黄色葡萄球菌接种于LB琼脂平板，置于37 ℃培养箱中培养24 h。挑取菌落分散于MH肉汤中，稀释至在UV-2550紫外-可见分光光度仪测得的A600 nm为0.10（该菌液的含菌量约为1×107CFU/mL）。

抑菌实验：每个药物各取12 支高压灭菌后的试管，排列于试管架上编号，第1管中加入1.8 mL MH肉汤，其他每支试管加入1.0 mL MH肉汤，第1管中加入0.2 mL 1.3.3.1节中配制好的药液，混匀后，取出1.0 mL加入第2管。依次将药液成倍稀释至第10管，取出1.0 mL，弃去。第11管不加药液作为阳性对照，第12管为不加药液的无菌肉汤作为空白对照。在1～11 管中加入0.l mL上述配制好的菌液，最终的接种菌量约5×105CFU/mL。37 ℃培养24 h后，观察细菌生长情况，无肉眼可见生长的最低的药物浓度为该药物对金黄色葡萄球菌的MIC。该实验所测得的MIC用于确定金黄色葡萄球菌BF实验的药液浓度。

1.3.3.4 挥发油及其各对照品对金黄色葡萄球菌BF的影响

1）供试药物对金黄色葡萄球菌BF形成的抑制作用实验

根据文献［23］，用含有质量分数2.5%葡萄糖的TSB培养基配制浓度为A600 nm=0.05的金黄色葡萄球菌菌液，再用该菌液配制浓度分别2、1、1/2、1/4、1/8 MIC和1/16 MIC的药液，各取200 μL接种入96 孔板中，每个药物浓度设6 个复孔，空白对照孔6 个复孔（只加培养基）、另设阴性对照孔6 个复孔（未加药的BF生长对照），37 ℃培养48 h后，弃去上清液并用磷酸钾缓冲盐（PBS pH 7.4）清洗3 次。用0.1%结晶紫染色30 min，弃去结晶紫染液，用蒸馏水洗至澄清；加入无水乙醇溶液200 μL溶解，酶标仪测定各孔于波长570 nm处的吸光度。

2）供试药物对成熟金黄色葡萄球菌BF的清除作用

向96 孔板中加入200 μL用含有质量分数2.5%葡萄糖的TSB培养基配制浓度为A600 nm=0.05的金黄色葡萄球菌菌液，37 ℃培养24 h，弃去培养基及悬浮菌，再用PBS清洗3 次，用含有质量分数2.5%葡萄糖的TSB培养基配制浓度分别为2、1、1/2、1/4、1/8 MIC和1/16 MIC的药液，依次每孔加入200 μL，相同浓度的药物做6 个复孔，空白对照孔6 个复孔（只加培养基）、另设阴性对照孔6 个复孔（未加药的BF生长对照），37 ℃培养48 h后，弃去上清液并用PBS清洗3 次。用0.1%结晶紫染色30 min，弃去结晶紫染液，用蒸馏水洗至澄清；加入无水乙醇溶液200 μL溶解，酶标仪测定各孔于波长570 nm处的吸光度。

药物对金黄色葡萄球菌BF（A570 nm）的抑制率或清除率按下式计算：

式中：A0空白对照组A570 nm的平均值；A1为药物作用组A570 nm的平均值；A2为阴性对照组A570 nm的平均值。

2 结果与分析

2.1 江香薷挥发油的GC-MS分析

按1.3.2节对从江香薷中提取的挥发油进行GC-MS分析。江香薷挥发油总离子流图见图1；化学成分GC-MS分析结果见表1。

图1 江香薷挥发油的总离子流图Fig.1 Total ion current chromatogram of the essential oil from Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru

实验结果显示，从江香薷挥发油中检出59 个色谱峰。通过NIST 11质谱库检索，按照1.3.2节中的结构确定原则，确定了29 个化合物。再根据质谱离子峰面积归一化法测得这些成分的相对含量占挥发油总量的99.316%，检索结果见表1。江香薷挥发油中主要含有酚类、酯类、烯烃、萜类、芳香化合物、醇等化合物，其中相对含量最高的是百里香酚占58.476%，其次为香荆芥酚占22.239%，相对含量在0.5%以上的还有3-蒈烯占0.937%、对聚伞花素占5.601%、γ-松油烯占3.545%、百里香酚乙酸酯占2.235%、香荆芥酚乙酸酯占0.611%、α-石竹烯占1.848%，上述8 种成分占挥发油总量的95.492%。

表1 江香薷挥发油化学成分GC-MS分析结果Table1 Results of GC-MS analysisf orc hemical compositi on of t he essen tial oilfro m Mosla ch in e ns is Ma xim.cv.Jian gx ian gr u

2.2 江香薷挥发油及主要化学成分对金黄色葡萄球菌BF的抑制

2.2.1 各对照品对金黄色葡萄球菌的MIC

表2 各对 照品 对金 黄色 葡萄 球菌 的M ICTable 2 MIC of r eferencesubstancesaga in st Staphylococcusaureus

由表2可知，8 个对照品中仅有百里香酚、香荆芥酚和百里香酚乙酸酯的MIC比江香薷挥发油的小，其他对照品都比挥发油的大，尤其是3-蒈烯、γ-松油烯和对聚伞花素都大于10 mg/mL。由此说明，百里香酚、香荆芥酚和百里香酚乙酸酯是挥发油具有良好抗菌效果的主要成分。

2.2.2 供试药物对金黄色葡萄球菌BF形成的抑制作用

按照1.3.3.4节中1）的操作步骤进行实验，根据文献［24］可知结晶紫检测适用于测定全部细胞膜，结晶紫可以染色活菌、死菌及胞外基质，形成的BF越多结合结晶紫的量就越多，吸光度就越大，BF的量与吸光度呈正比，由此可计算出各供试药对金黄色葡萄球菌BF形成的抑制率。由图2所示，江香薷挥发油及其8 种对照品对金黄色葡萄球菌BF的形成具有良好抑制作用，随着浓度的增大，药物对金黄色葡萄球菌BF形成的抑制作用能力越强。其中江香薷挥发油、香荆芥酚、香荆芥酚乙酸酯、α-石竹烯和3-蒈烯的抑制效果较好，其浓度为4 MIC时，抑制率分别是91.3%、92.5%、93.1%、91.4%和93.9%；浓度为1/4 MIC时，抑制率大于80%；而百里香酚、γ-松油烯、百里香酚乙酸酯和对聚伞花素的抑制效果较差，浓度为MIC时，抑制率都小于50%。说明江香薷挥发油中抑制金黄色葡萄球菌BF形成的主要成分是香荆芥酚、香荆芥酚乙酸酯、α-石竹烯和3-蒈烯。

图2 挥发油和8 种化合物对 B B F 形成的抑制作用Fig.2 Inhibition of Staphylococcus aureus biofilm formation by the essential oil and its eight major components

2.2.3 供试药物对成熟金黄色葡萄球菌BF的清除作用

图3 供试药物对成熟BBF的清除作用Fig.3 Scavenging effect of the essential oil and its eight major components on mature Staphylococcus aureus biofilm

按照1.3.4.4节中2）的操作步骤进行实验，由2.2.2节可知，BF的量与吸光度的大小呈正比，从而计算得各供试药物对成熟金黄色葡萄球菌BF的清除率。如图3所示，江香薷挥发油和8 个对照品对成熟金黄色葡萄球菌BF都有一定的清除作用，而且江香薷挥发油、百里香酚乙酸酯和对聚伞花素对成熟金黄色葡萄球菌BF的清除作用效果较好，其浓度为1/2 MIC时，清除率大于30%；其中挥发油的浓度为4 MIC时，其对金黄色葡萄球菌BF的清除率为78.5%；而香荆芥酚、香荆芥酚乙酸酯、α-石竹烯、3-蒈烯、百里香酚和γ-松油烯的清除效果则较差，浓度为MIC时，清除率仍然低于30%。

3 讨 论

本实验首先利用GC-MS的方法对江香薷挥发油的化学成分进行分析，检出59 个峰，鉴定了其中的29 个峰，占挥发油总量的99.316%。与已有文献［18，24］对比发现，相对含量较高的百里香酚、香荆芥酚、对聚伞花素、香荆芥酚乙酸酯、百里香酚乙酸酯和α-石竹烯与文献一致，本实验新鉴定出了9 个挥发油成分，它们分别是3-蒈烯、枞油烯、桉油精、反-4-侧伯醇、（Z）-β-法尼烯、顺-β-法尼烯、（Z，E）-α-法尼烯、γ-依兰油烯和3，7-桉叶二烯。另有30 种化合物未检出，其原因是参考文献中的江香薷为鲜药，而本实验使用的是江香薷饮片，在药材炮制和贮存过程中，江香薷的挥发油成分发生了变化。

GC-MS分析结果显示，江香薷挥发油中的主要成分是百里香酚、香荆芥酚、3-蒈烯、对聚伞花素、γ-松油烯、百里香酚乙酸酯、香荆芥酚乙酸酯和α-石竹烯，上述8 种化学成分占挥发油总量的95.492%。因此，本实验后续考察江香薷挥发油和这8 种化合物在2、1、1/2、1/4、1/8 MIC和1/16 MIC条件下对金黄色葡萄球菌BF的影响。

供试药物与金黄色葡萄球菌共同培养24 h后，浓度为2 MIC时，江香薷挥发油、香荆芥酚、3-蒈烯、香荆芥酚乙酸酯、百里香酚乙酸酯和α-石竹烯对金黄色葡萄球菌BF的形成有明显的抑制作用，抑制率都大于90%，这说明以上几种供试药物在此浓度条件下，可大量杀死浮游状态的金黄色葡萄球菌，从而使BF无法形成。但当浓度降低到1/4 MIC时，仅有香荆芥酚、香荆芥酚乙酸酯、α-石竹烯和3-蒈烯的抑制率能达到80%以上，这几种成分可能不是通过杀死浮游状态的细菌，而是其他途径（例如调控与BF形成相关的基因）抑制BF的形成。而百里香酚、γ-松油烯、百里香酚乙酸酯和对聚伞花素在所有浓度条件下，对金黄色葡萄球菌BF的形成抑制作用均较弱。

当金黄色葡萄球菌已经形成成熟的BF，再用药物处理后发现，在所有实验浓度条件下，百里香酚、3-蒈烯和香荆芥酚乙酸酯的清除率都小于50%，香荆芥酚、γ-松油烯和α-石竹烯的清除率都小于10%。而挥发油、对聚伞花素和百里香酚乙酸酯，仅在浓度为2 MIC时的清除率大于50%，其他浓度条件下的清除率也都低于50%。这些数据反映出，BF的形成，显著增强了金黄色葡萄球菌对抗菌药物的耐受力，使得原本在低剂量时即可抑制BF形成的药物，需要增加用量方可较为有效的清除已形成的BF。

综上所述，江香薷挥发油是一种潜在的抗金黄色葡萄球菌BF药物，其既可以在低剂量时显著抑制金黄色葡萄球菌BF的形成，又可以在增加用量后清除已经形成的成熟的金黄色葡萄球菌BF。

4 结 论

金黄色葡萄球菌是自然界中重要的致病菌之一，易引起食物中毒、肺炎、心包炎、局部化脓感染，甚至全身感染，而且金黄色葡萄球菌容易形成BF，从而使其致病性和耐药性得以增强，进而加大金黄色葡萄球菌感染的治疗难度［25］。因此，目前亟需寻求到良好抗菌效果，特别是能够抑制BBF形成的天然药物，从而减少该菌的感染及传播。

江香薷含有大量具有抗菌能力较强的挥发油，特别是对金黄色葡萄球菌的抑菌效果尤为明显。本实验结果可知，江香薷挥发油不管是对金黄色葡萄球菌BF的形成的抑制作用还是对成熟的金黄色葡萄球菌BF的清除作用都比挥发油中单独化学成分作用效果好。由此可知，多种挥发油化学成分混合可增强抑制作用，但是江香薷挥发油中的化学成分比较多，具体作用机制需进一步研究，为研究挥发油对金黄色葡萄球菌BF的形成的抑制作用还是对成熟的金黄色葡萄球菌BF的清除作用提供重要的依据。

［1］ 孙纪录， 陈小雪， 韩北忠.金黄色葡萄球菌生物被膜的控制方法研究进展［J］.中国酿造， 2011， 30（6）: 1-3.DOI:10.3969/ j.issn.0254-5071.2011.06.001.

［2］ MICHAEL O.Staphylococcal biofilms［J］.Curr Top Microbiol Immunol， 2008， 322（1）: 207-228.DOI:10.1007/978-3-540-75418-310.

［3］ 白艳， 王瑾， 林德峰， 等.葡萄球菌属细菌生物被膜研究进展［J］.中国药物应用与检测， 2012， 9（6）: 360-364.DOI:10.3969/ j.issn.1672-8157.2012.06.018.

［4］ 陈艳， 陈一强， 孔晋亮， 等.黄芩苷联合万古霉菌对金黄色葡萄球菌生物膜的体外影响［J］.中华医院感染学杂志， 2014， 24（2）: 264-268.DOI:10.11816/cn.Ni.2014-124142.

［5］ 许宏涛， 陶凤蓉， 张芃， 等.头孢菌素对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌防耐药突变浓度研究［J］.中华医院感染学杂志， 2009， 19（12）: 1475-1477.DOI:10.3321/j.issn:1005-4529.2009.12.002.

［6］ 刘宗英.医院感染金黄色葡萄球菌的分布及临床耐药性探讨［J］.中国卫生标准管理， 2015， 26（6）: 152-154.DOI:10.2969/ j.issn.1674-9316.2015.26.111.

［7］ 尧荣凤， 李智， 薛龙， 等.综合性医院金黄色葡萄球菌的分布及耐药性分析［J］.中国抗生素杂志， 2015， 40（9）: 685-699.DOI:10.3969/ j.issn.1001-8689.2015.09.012.

［8］ 李朝霞， 刘又宁， 王睿， 等.氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌及其耐药突变体的耐药性研究［J］.中国临床药理学与治疗学， 2006，11（6）: 696-701.

［9］ 王婉怡， 林伟东， 张大帅， 等.419 株奶牛源葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药性分析［J］.扬州大学学报（农业与生命科学版）， 2015，36（3）: 13-16.

［10］ 邓海， 李振文， 于宏伟， 等.我院近8年外科术后感染金黄色葡萄球菌耐药性分析［J］.中国实验诊断学， 2015， 19（7）: 1126-1127.

［11］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典: 第一部［M］.北京: 中国医药科技出版社， 2015: 259-260.

［12］ 李敏， 苗明三.香薷的化学、药理与临床应用特点分析［J］.中医学报， 2015（4）: 57-579.DOI:10.16368/j.issn.1674-8999.2015.04.198.

［13］ 胡珊梅， 范崔生， 袁春林.江香薷的本草考证和药材资源的研究［J］.江西中医学院学报， 1994， 6（2）: 31-34.DOI:10.1016/ j.addbeh.2009.03.005.

［14］ 李知敏， 孙彦敏， 王妹， 等.江香薷不同极性提取物的抗菌活性研究［J］.食品工业科技， 2014， 35（16）: 115-120.DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.16.016.

［15］ 苗琦， 方文娟， 张晓毅， 等.江香薷化学成分及药理作用研究进展［J］.江西中医药大学学报， 2015， 27（2）: 117-120.

［16］ 舒任庚， 胡浩武， 黄琼.江香薷籽挥发油成分的GC-MS分析［J］.中国药房， 2009， 20（9）: 674-675.

［17］ EMILIA M， IPPOLITO C， HAZEM S E， et al.Chemical composition and biological activity of the essential oil of Origanum vulgare ssp.hirtum from different areas in the Southern Apennines （Italy）［J］.Chemistry and Biodiversity， 2014， 11（2）: 639-651.DOI:10.1002/ cbdv.201300326.

［18］ AMAL A M， SAMII A， FAROUK K E， et al.Chemical composition of essential oil and in vitro antioxidant and antimicrobial activities of crude extracts of Commiphora myrrha resin［J］.Industrial Crops and Products， 2014， 57（3）: 10-16.DOI:10.1109/RSETE.2011.5964945.

［19］ 刘华， 李桂生， 罗永明， 等.江香薷醇提物石油醚部位化学成分分析［J］.中国实验方剂学杂志， 2011， 17（14）: 68-70.DOI:10.3969/ j.issn.1005-9903.2011.14.021.

［20］ 张有林， 张润光， 钟玉.百里香精油的化学成分、抑菌作用、抗氧化活性及毒理学特性［J］.中国农业科学， 2011， 44（9）: 1888-1897.DOI:10.3864/j.issn.0578-1752.2011.09.016.

［21］ Clinical and Laboratory Standards Institute.Clinical and laboratory standards institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing； Twenty-fifth informational supplement: M100-S225［S］.

［22］ 赵凌旭， 王蕾.中药黄檗对金黄色葡萄球菌体外抑菌效果的初步研究［J］.检验医学， 2015， 30（9）: 886-889.DOI:10.3969/ j.issn.1673-8640.2015.09.005.

［23］ WANG Yi， WANG Tao， HU Jianjiang， et al.Anti-biofilm activity of TanReQing， a traditional Chinese medicine used for the treatment of acute pneumonia［J］.Journal of Ethnopharmacology， 2011， 134（1）: 165-170.DOI:10.1016/j.jep.2010.11.066.

［24］ 舒任庚， 胡浩武， 张普照， 等.不同采收期江香薷挥发油成分GC-MS分析［J］.药物分析杂志， 2010， 30（3）: 443-446.

［25］ FURUYA E Y， LOWY F D.Antimicrobial resistant bacteria in the community setting［J］.Nature Reviews Microbiology， 2006， 4（1）: 36-45.DOI:10.1038/nrmicro1325.

Chemical Composition Analysis of Essential Oil from Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru and Inhibitory Activity of the Oil and Its Major Constituents on Biofilm Formation of Staphylococcus aureus

LI Zhimin1， WANG Mei2， PENG Liang1，*
（School of Pharmacy， Jiangxi Science and Technology Normal University， Nanchang 330013， China）

Objective: To analyze the chemical composition of the essential oil from Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru and to examine the inhibition of the oil and its main components on the biofilm formation of Staphylococcus aureus.Methods: The chemical composition analysis was carried out by gas chromatography-mass spectrometry （GCMS）.The inhibitory effects of the essential oil and its eight main components were examined against the biofilm formation of Staphylococcus aureus.Results: A total of 29 chemical compositions were identified in the essential oil.Its main components were thymol， carvacrol， p-cymene， γ-terpenene， thymyl acetate， α-caryophyllene， 3-carene， and carvacryl acetate.The percentage inhibition of the biofilm formation of Staphylococcus aureus by the essential oil reached 91.3%，although scavenging only 78.5% of the mature biofilm of Staphylococcus aereus.Carvacrol， 3-carene， carvacryl acetate and α-caryophyllene showed obvious inhibition against the formation of Staphylococcus aureus biofilms.Among these， 3-carene was the most effective inhibitor with a percentage inhibition of 93.9%.On the other hand， both p-cymene and thymyl acetate were able to significantly scavenge the mature biofilm of Staphylococcus aureus.Conclusion: The essential oil from Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru possessed a very strong inhibitory effect on the biofilm formation of Staphylococcus aureus.Moreover， it also could scavenge the mature biofilm of Staphylococcus aureus.This may be a result of the combined effects of several components in the essential oil.

Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru； essential oil； gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS）analysis； Staphylococcus aureus biofilms； inhibition

10.7506/spkx1002-6630-201614024

R93

A

1002-6630（2016）14-0138-06

李知敏， 王妹， 彭亮.江香薷挥发油的化学成分分析及其对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制作用［J］.食品科学， 2016，37（14）: 138-143.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201614024. http://www.spkx.net.cn

LI Zhimin， WANG Mei， PENG Liang.Chemical composition analysis of essential oil from Mosla chinensis Maxim.cv.Jiangxiangru and inhibitory activity of the oil and its major constituents on biofilm formation of Staphylococcus aureus［J］.Food Science， 2016， 37（14）: 138-143.（in Chinese with English abstract） DOI:10.7506/spkx1002-6630-201614024.http://www.spkx.net.cn

2015-12-02

江西省青年科学基金项目（20122BAB215017）

李知敏（1980—），女，讲师，硕士，研究方向为中药药效物质基础。E-mail：Lzmin3026@163.com

*通信作者：彭亮（1980—），男，副教授，博士，研究方向为中药药效物质基础。E-mail：pengliang8036@163.com