CHD5及Ki67在胃癌组织中的表达①

周　昱，廉奇鑫，王　新

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江 佳木斯 154003)



CHD5及Ki67在胃癌组织中的表达①

周昱，廉奇鑫，王新

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江 佳木斯 154003)

摘要：目的：研究CHD5与Ki67在胃黏膜癌变组织中的表达程度及两个因子同临床相应病理学特征之间的联系以及两者内在联系。方法：通过采用ElivisionTMPlus/HRP免疫组化方法，分别检测58例胃癌组织标本中CHD5和Ki67两个与癌症相关基因的表达状况。结果：①在胃黏膜癌变组织及其相应的周围正常组织中CHD5基因的蛋白显色阳性率分别为34.48% (20/58)和70.69% (41/58)，并明显的看出，在周围组织中的表达多呈阳性。将结果分析处理后得出，CHD5的表达与癌组织的浸润深度、瘤体组织分化程度、病变淋巴转移以及肿瘤TNM分期有关(均P<0.05)；与患者的性别、发病年龄、肿瘤直径范围及远处转移无关(P>0.05)。②在胃黏膜癌变组织及其相应的周围正常组织中ki67蛋白显色阳性结果分别为67.24% (39/58)和36.21% (21/58)，结果分析后得出，在癌组织中肿瘤相关基因ki67的表达多为阳性。数据行统计处理后表明，ki67与癌组织的浸润深度、瘤体组织分化程度、病变淋巴转移以及肿瘤TNM分期有关(P<0.05)；与患者的性别、发病年龄、肿瘤直径范围及远处转移无关(P>0.05)。结论：①在胃癌组织中CHD5表达下降与浸润深度、组织分化程度、患者是否出现淋巴结转移以及TNM分期有关，②ki67在胃正常组织中表达不明显，在胃癌中高表达。且与浸润深度、组织分化程度、是否出现淋巴结转移以及TNM分期密切相关。③CHD5与ki67表达具有负相关性，提示二者有彼此制约、相互拮抗的作用。

关键词：胃癌；CHD5；Ki67

我国各种恶性肿瘤中，罹患胃癌[1]的人口数量和每年死于胃癌的人口数目均排在前三位，在多数情况下，胃癌患者术后生存质量低，存活期短，且极易复发。细胞与分子生物学研究表明，胃癌演变过程是分多步骤进行的,而且期间需要多因素协同参与。其过程涉及原癌基因、肿瘤抑制基因、肿瘤细胞凋亡相关因子及肿瘤转移相关基因等多个因子的参与，该过程中，上述因子的参与形式是多变的。本课题研究CHD5与ki67胃癌组织及正常胃黏膜组织中的表达，并探索它们在胃癌组织中的临床意义及相关性，从而判定预后。

1资料与方法

1.1标本来源

选取经佳木斯大学附属第一医院于2011-10～2014-10确诊为胃癌并行手术治疗的患者病理蜡块，且再次由资深病理科医生证实，共计58例，每例标本均采集胃粘膜癌变组织和距边缘5cm的相应周围正常组织，患者术前均未进行放、化疗、免疫治疗、生物治疗及其它相关肿瘤治疗。按照患者性别分成两组，其中男35例，女23例。依据患者实际年龄分成两组，其中>45岁38例，≤45岁20例，年龄32～85岁，平均(42.74±8.38) 岁。依照现行第7版[2,3]AJCC 国际胃癌TNM标准进行临床分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期 34例，Ⅳ期7例(行统计学处理时将Ⅰ期、Ⅱ期归为一组，把Ⅲ期、Ⅳ期归为一组)。根据是否存在淋巴结转移划分成两类，其中确定存在淋巴结转移者37例，经证实无淋巴结转移者21例。判断肿瘤浸润深度又将其分成两组，其中侵及浆膜层35例，未侵及浆膜层23例。同时按组织分化程度划归成3组：高等程度度组织分化8例，中等程度组织分化18例，低等程度组织分化32例。依据肿瘤直径大小划分两组，其中包括34例肿瘤直径≥5cm，25例<5cm。最后依据是否存在远处转移分类，其中包括有明确的远处转移者17例，而未证实发生远处转移者41例。

1.2主要试剂

鼠抗人单克隆抗体CHD5工作液购自上海联硕生物科技有限公司，兔抗人多克隆抗体Ki67(即用型抗体)购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3免疫组化

通过免疫组化方法(Elivision法)探索CHD5、ki67在为癌及正常癌旁组织中的表达情况。

1.4结果判定

参照相关文献[4,5]进行结果评分。

(1)结果判定：CHD5在肿瘤组织及细胞的表达位置是同时出现于细胞核和细胞浆内的，但侧重点有所不同，以细胞核表达为主，而Ki67在肿瘤细胞内的表达定位仅限于细胞核内。如果把胃癌组织切片在显微镜下观察，两者一旦呈阳性表达在细胞核均呈现为棕黄色颗粒，且强度大于背景非特异性染色者判定为阳性。(2)结果评分标准：采用双重判定，把染色强度和阳性细胞百分比两个指标共同作为评分标准，最后把二者评分乘积作为最终评分进行统计学分析。具体标准参照如下：染色强度判定，基本不着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深棕色为3分；阳性细胞比例判定(不管显色程度深浅)，着色细胞占总细胞数比例≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。最后用阳性细胞的百分比得分乘以染色强度得分，把最终乘积最为结果进行判定：≤3为阴性(-)，4分以上为阳性，4～5分为(+)，6～7分为()，>8分为()。

1.5统计学方法

采用软件SPSSl7.0进行处理分析，计数资料采用χ2检验，相关回归分析采用 linear regression、logistic 分析，P<0.05表示存在差异，具有统计学意义。

2结果

2.1IHC 法检测CHD5蛋白在胃黏膜癌变组织及相应的周围正常中组织的表达

选用的58例胃黏膜癌变组织及细胞中，CHD5的阳性表达率为34.48%(20/58)，明显低于相应的周围正常组织中的70.69%(41/58)，存在有统计学上的显著的差异，具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　CHD5在周围正常组织和肿瘤组织中的表达

CHD5的蛋白阳性表达定位在细胞核及细胞浆内均有不同程度显示，但以细胞核表达为主，呈现出棕黄色颗粒状弥漫性分布。

2.2IHC法检测ki67在胃黏膜癌变组织及相应的周围正常中组织的表达

58例胃黏膜癌变组织及细胞中，ki67的阳性表达率为67.24%(39/58)，高于相应的周围正常组织中的36.21%(21/58)，存在有统计学上的差异，具有明显的统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　ki67在周围正常组织和肿瘤组织中的表达

ki67的阳性表达定位仅限于细胞核内，呈棕黄色颗粒状弥漫性分布的表达情况。

2.3CHD5与ki67在胃黏膜癌变组织中的表达及临床相应病理特征之间的关系

CHD5与ki67在胃黏膜癌变组织中的蛋白表达程度与癌组织的浸润深度、瘤体组织分化程度、病变淋巴转移以及肿瘤TNM分期有关(均P<0.05)；与患者的性别、发病年龄、肿瘤直径范围及远处转移无关(P>0.05)。见表3。

表3　CHD5与ki67在胃黏膜癌变组织中的表达程度和临床相应病理特征的关系

注：#P<0.05。

2.4CHD5蛋白和ki67在胃癌组织标本中表达水平的相关性

胃黏膜癌变组织标本中CHD5的阳性表达率为34.48%，而ki67阳性表达率为67.24%；相应的周围正常组织中CHD5阳性表达率为70.69%，而ki67阳性表达率为36.21%。通过CHD5与ki67表达的关联性分析发现：CHD5的表达与ki67的表达均具有关联性。CHD5与ki67 在胃黏膜癌变组织中的蛋白表达存在负相关(r=-0.743)。见表4。

表4　胃癌中CHD5与Ki67蛋白的关系

3讨论

近年来有学者CHD5(染色体质域解螺旋酶DNA结合蛋白5)是一种肿瘤抑制因子。后经证实，CHD5的构成极其复杂，其本质是具有能调节染色质功能的染色体非组蛋白，并且其组合相当独特。染色体质域解螺旋DNA结合蛋白主要作用体现为染色体重塑方面，但在其它许多方面也受到学者关注，如如何调节基因表达等。在临床工作中ki67应用已经较普遍，对于肿瘤的评估具有指导意义。Ki-67是一种核蛋白质由MKI-67基因编码，又称之为MKI-67，在病理免疫组化中经常用到，提示细胞的增殖活跃程度。Ki67抗原是Gerdes等在1983年发现的,它是不稳定的非组蛋白核蛋白[6],Ki67是一种已经被证实的核蛋白，在胃癌进展过程中起到了调节细胞的凋亡的作用，它的表达过程同细胞周期是紧密联系在一起的，Ki67能够促进细胞向恶性程度加重的方向转化，期间也发挥了帮助肿瘤的扩散和转移等多方面的作用。

综上所述，通过联合检测CHD5和ki67 在胃癌中的表达情况，结果发现CHD5与Ki67 在胃癌中的阳性表达存在负相关(P<0.05)，提示CHD5在肿瘤调控方面如介导细胞凋亡、拮抗细胞增殖等机制中发挥着重要作用，CHD5作为一个抑癌基因，其表达程度的下降或不明显可能导致细胞凋亡与增殖的失衡，从而促进了恶性转化，促使了胃癌的形成和进展。本研究旨在阐明抑癌基因CHD5异常表达在胃癌的形成、进展及侵袭进程中可能存在重要意义，临床实践测定CHD5和ki67在胃黏膜癌变组织中的表达程度，对衡量胃癌恶性度是存在指导性意义的，甚至有助于我们预测患者生存周期。

参考文献：

[1]朱艳丽 ,刘亮 ,崔颖，等.COX- 2、Ki- 67在胃癌发生发展中的表达及其相关性研究[J].黑龙江医药科学，2010，33(6)：30-31

[2]Washington K. 7th edition of the AJCC cancer staging manual:stomach[J]. Ann Surg Oncol，2010,17:3077-3079

[3]Santiago JM,Sasako M,Osorio J.TNM-7th edition 2009 (UICC/AJCC) and Japanese Classification 2010 in Gastric Cancer. Towards simplicity and standardisation in the management of gastric cancer[J].Cir Esp，2011,89：275-281

[4]许良中，杨文涛. 免疫组织化学反应结果判断标准[J].中国癌症杂志，1996，6(4)：229-231

[5]Mayer B，Jauch K M，Gunthert U，et a1．De novoexpression of CD44 and survival in gastric cancer [J]．Lancet，1993，342(7)：1019-1021

[6]李义强,赵春雨,田寅,等.p53、P534S与Ki67在乳腺癌中的表达及意义[J].黑龙江医药科学，2012，35(4)：69-70

基金项目：①1.黑龙江省青年基金，批准号：QC2013C013；2.佳木斯大学青年基金，编号：sq2013-013。

作者简介：周昱(1969～)男，黑龙江集贤人，学士，副主任医师，硕士研究生导师。 通讯作者：王新(1962～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。E-mail:zhouyu731@126.com。

中图分类号：R735.2

文献标识码：A

文章编号：1008-0104(2016)03-0042-03

(收稿日期：2015-12-07)