UPLC-TUV测定啤酒中亮蓝含量

谭 翔，曹利雅

（贵阳市建材质量检验中心 ，贵州 贵阳 550009；2.贵州医科大学公共卫生学院，贵州 贵阳 550025）

UPLC-TUV测定啤酒中亮蓝含量

谭 翔1，曹利雅2

（贵阳市建材质量检验中心 ，贵州 贵阳 550009；2.贵州医科大学公共卫生学院，贵州 贵阳 550025）

摘 要：利用超高效液相色谱法测定啤酒中人工合成色素亮蓝的含量。采用色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm（2.1mm×50mm Column），流动相为甲醇-0.02mol·L-1乙酸铵（39∶61），流速0.3mL·min-1，检测波长628nm，柱温16.1℃，进样量5μL。检测结果表明，亮蓝在1.0～25mg·L-1（r=0.9994）间线性关系良好，平均回收率为98.7%，RSD=0.49%，在3种市场所售啤酒中均未检测到亮蓝。该方法可以用于检测啤酒中是否添加人工合成色素亮蓝，为市场上销售啤酒质量检测提供参考依据。

关键词：超高液；啤酒；亮蓝；含量测定

啤酒是深受大众喜爱的酒精饮料之一。现代有些苦瓜啤酒制造商为了让啤酒的色泽光鲜通常都会加入人工合成色素亮蓝［1-3］。亮蓝作为可食用色素适用于糕点、糖果和配制酒的着色［4-6］。但《食品添加剂使用卫生标准》（GB 2760-2014）中规定，亮蓝在饮料、汽水、配制酒等的最大使用量为0.025g·kg-1［7］，含量超标会影响人体健康［8］。

由于常规性发酵啤酒中不允许加入合成色素，为了检测市场上常规性发酵啤酒中是否添加色素亮蓝，本文基于超高效液相色谱的优良性能，建立了一种更快、更简捷、灵敏度更高的啤酒中亮蓝含量的测定方法［9-10］。

1 仪器与试药

Waters ACQUITY超高效液相色谱仪，色谱柱: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m（2.1mm×50mm Column）。

亮蓝对照品（1mg·mL-1），甲醇（色谱纯），乙酸铵（分析纯），柠檬酸（分析纯），氨水（分析纯），无水乙醇（分析纯），纯净水。

啤酒3种（市售）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm（2.1mm×50mm Column）；流 动 相:甲醇-0.02mol·L-1乙酸铵（39∶61），流速0.3mL·min-1，检测波长628nm，柱温16.1℃，进样量5μL。

通讯联系人：曹利雅，贵州医科大学公共卫生学院。E-mail:591404002@qq.com

2.2 对照品溶液的制备

取1mg·mL-1的亮蓝标准溶液于容量瓶，加纯净水分别稀释成浓度为1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮蓝溶液。

2.3 供试品溶液制备

移取50mL供试品，加热驱除CO2和乙醇，用200g·L-1的柠檬酸溶液调节pH=6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加水调成粥状，倒入供试品溶液中，搅拌，抽滤，用60℃、pH=4的柠檬酸水溶液洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸（6+4）混合溶液洗涤3～5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水（7+2+1）混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，水浴蒸发至干，加2.00mL水溶解，经0.22μm滤膜过滤。

2.4 线性关系

分 别 吸 取 浓 度 为1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮蓝溶液5μL注入超高效液相色谱仪，按2.1的色谱条件进行测定，以峰面积 （Y）对浓度（X，mg·L-1）进行线性回归，亮蓝在1.0～25mg·L-1范围内线性关系良好，回归方程Y=21425X+1588.9，R2=0.9994。

2.5 精密度考察

精密吸取25mg·L-1的对照品溶液，按照2.1的色谱条件连续进样6次，记录峰面积，计算得到RSD=1.18%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

按照2.3的方法配制供试品溶液6份，再按照2.1的色谱条件进行测定，记录峰面积，计算得到RSD=1.25%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性考察

取供试品溶液，按2.1的色谱条件分别在0、4、8、12、16、20、24、48、72h进样，记录峰面积，计算得到RSD=1.88%，表明供试品溶液在72h内稳定。

2.8 加样回收率

取6份同一啤酒样品溶液各1mL，分别加入浓度为1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮蓝标准溶液1mL，摇匀，按2.1的色谱条件注入超高液相色谱仪，记录峰面积。计算加样回收率，平均回收率为99.21%，RSD=0.49%，结果见表1。

表1 样品加样回收率结果

2.9 含量测定

取3种市售啤酒，按照2.3的方法制备供试品溶液3份，按照2.1的色谱条件进行测量，结果都未检测到亮蓝。

3 讨论

本文建立了超高效液相色谱快速测定啤酒中人工合成色素亮蓝含量的方法，该方法简便准确、灵敏度高，避免了常规亮蓝含量测定时梯度洗脱带来的繁琐和比例不易调节等缺点，可为食品和市场监管部门对啤酒质量的监控提供理论依据和参考价值。

参考文献：

［1]李祝，肖洋.高效液相色谱法测定苦瓜啤酒中的亮蓝［J］.酿酒科技，2008（4）:112-113.

［2]龙洲雄，胡海山，万春花，等.高效液相色谱法测定苦瓜啤酒中亮蓝［J］食品科学，2006，27（12）:657-659.

［3]王冬梅.高效液相色谱法快速测定苦瓜啤酒中亮蓝［J］.医药论坛杂志， 2004（18）:3849-3852.

［4]张敏，肖珺，劳宝法.高效液相色谱法测定糕点中亮蓝的方法研究［J］.中国卫生检验杂志，2012，22（10）: 2517-2519.

［5]张钰，詹铭，季玉梅.高效液相色谱法测定糕点中亮蓝［J］中国预防医学杂志，2012，13（7）:554-556.

［6]陈鹏，王微，孙红.荧光光谱法快速测定饮料中亮蓝［J］.光谱实验室，2012，29（6）:3849-3852.

［7]冯骥，刘慧，赫春香.双波长分光光度法联合测定亮蓝和苋菜红［J］.安徽化工，2013，39（3）:78-80.

［8]张飞，郑家概，付强，等.充气糖果中胭脂红酸的高效液相色谱测定［J］.广州化工，2013，41（24）:132-135.

［9]吴云，徐买成.超高效液相色谱快速检测熟牛肉制品中柠檬黄、胭脂红、日落黄、诱惑红的含量［J］.饮食保健，2015（10）:5-6.

［10]杨燕飞，张俊燕，陈晓风.五味子中非法添加苋菜红、日落黄、亮蓝的检测［J］.食品与药品，2015，17（1）:53-55.

中图分类号：O 657.7+2

文献标识码：A

文章编号：1671-9905（2016）02-0034-02

作者简介：谭翔（1988-），男，汉族，四川梓潼人，助理工程师，研究方向:分析检测

收稿日期：2015-12-24

Determine of Brilliant Blue Content in Beer by UPLC-TUV

TAN Xiang1， CAO Li-Ya2
（1. Guiyang City Building Materials Quality Inspection Center， Guiyang 550009， China；2.School of Public Health， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China）

Abstract:Ultra high performance liquid chromatography was applied to determine the content of brilliant blue in beer with ACQUITY UPLC BEH column C18 1.7μm（2.1mm×50mm Column）， mobile phase was methanol- 0.02mol/L ammonium acetate（39∶61）， fow rate was 0.3mL/min， the wavelength was 628nm， column temperature was 16.1℃， and sample size was 5μL. The result showed that brilliant blue had a good linear relationship between 1.0～25mg/L. The average recovery was 98.7%， RSD=0.49%.

Key words:UPLC； beer； brilliant blue； content detection