肝细胞肝癌患者外周血中T细胞亚群和NK细胞的变化

李晓云　于晓辉　王维　戴飞　武承凤　孙延荣



肝细胞肝癌患者外周血中T细胞亚群和NK细胞的变化

李晓云于晓辉王维戴飞武承凤孙延荣

730050甘肃兰州兰州军医兰州总医院医务部(李晓云，孙延荣)，消化科(于晓辉，王维，武承凤)，统计室(戴飞)

【摘要】目的探讨肝细胞肝癌(HCC)外周血中T细胞亚群及NK细胞含量的变化，进一步了解HCC患者的免疫功能状况。方法收集181例HCC患者作为试验组，其中小HCC 39例、中等HCC 64例、大HCC 46例、巨块型HCC 32例；有肝硬化基础的HCC 150例，其中乙型肝炎肝硬化96例、丙型肝炎肝硬化49例、酒精性肝硬化3例、自身免疫性肝硬化2例。无肝硬化基础的HCC 31例，其中乙型肝炎病毒感染20例、丙型肝炎病毒感染8例、无原因的3例。对150例有肝硬化基础的患者按Child-Pugh分成A、B、C三级，其中A级37例、B级47例、C级66例。选择46名健康人群作为正常对照组。采用流式细胞仪检测两组患者血清中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞的含量。结果随着HCC体积的增大，外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞和NK细胞的含量明显降低，而CD8+T细胞含量升高，与正常对照组比较，其差异具有统计学意义(P<0.05)；有肝硬化基础的HCC患者，随着Child-Pugh分级的增加， CD3+T细胞、CD4+T细胞和NK细胞的含量也明显降低，而CD8+T细胞含量升高，与正常对照组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论HCC患者的T细胞和NK细胞的变化不但与肿瘤大小相关，还与HCC的肝硬化背景及分级相关。HCC患者机体免疫状况的变化，对判断HCC患者的免疫功能、病情及预后具有重要的临床意义。

【关键词】肝细胞肝癌；CD3+T细胞；CD4+T细胞；CD8+T细胞；NK细胞

肝细胞肝癌(HCC)在我国是恶性肿瘤导致死亡的主要疾病之一。HCC多有病毒性肝炎背景，而病毒性肝炎患者多存在免疫功能紊乱等状况，如T淋巴细胞亚群比例失调，容易并发严重的继发感染，加重肝功能损害易导致病情恶化或死亡。本研究就针对181例HCC患者外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞的含量进行检测，从而进一步了解HCC的大小、肝硬化背景与患者机体免疫状况的关系，对指导临床治疗、病情评估及预后具有重要参考价值。

资料和方法

一、一般资料

全部病例来源于2005年11月-2015年11月兰州军区兰州总医院消化科、肝胆外科及肿瘤科的住院患者，收集181例HCC患者作为试验组，其中小HCC 39例、中等HCC 64例、大HCC 46例、巨块型HCC 32例。有肝硬化基础的HCC 150例，其中乙型肝炎肝硬化96例、丙型肝炎肝硬化49例、酒精性肝硬化3例、自身免疫性肝硬化2例。无肝硬化基础的31例，其中乙型肝炎病毒感染20例、丙型肝炎病毒感染8例、无原因的3例。对150例有肝硬化基础的患者按Child-Pugh分成A、B、C三级，其中A级37例、B级47例、C级66例。试验组男101例，女39例，年龄25～79岁，平均年龄(50.0±7.5)岁。选择46名健康人群作为正常对照组，男38例，女8例，年龄20～61岁，平均年龄(48.0±6.3)岁。所有患者均排除患有其他疾病，如糖尿病、肾病、硬皮病等；对照组系在消化科工作的医护人员志愿者，均无心、肝、肾等重要脏器疾患，无肝炎、血吸虫病史。

二、仪器

FACS Cali bur 流式细胞仪为美国Becton- Kickin-son (BD) 公司生产，激发波长188 nm。

三、试剂

鼠IgG1-FITC/Ig GPE (阴性对照)，CD4-FITC/CD8-PE，CD3-FLTC，pH7.2磷酸盐缓冲溶液(PBS)，均为北京中衫金桥公司产品。

四、方法

所有患者均在晨起空腹抽取静脉血5 mL 管，以EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠) 抗凝，利用 FACS Calibur流式细胞仪及 Cell Quest 软件(均由 BD 公司提供)对血样进行测定和分析。

五、统计学处理

结果

随着HCC体积增大及Child-Pugh分级增加，外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞和NK细胞的含量明显降低，而CD8+T细胞含量升高，与正常对照组比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)。但小HCC和Child-Pugh A级患者外周淋巴细胞含量与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1和表2。

讨论

HCC占原发性肝癌的90%以上， 其发病率在全球范围内居第6位，而死亡率高居第3 位[1]。我国HCC的发病人数约占全球的50%以上[2]。HCC起病隐匿、早期临床症状不显著，大部分HCC确诊时已进展至中晚期，已失去根治性手术治疗时机，多选择微创介入或保守性病灶切除联合化疗、放疗等姑息性治疗措施，以期能够提高生存率，改善患者预后。在患者病程中有较多因素可影响预后，如肝脏原发病灶大小、肝功能Child-Pugh分级、临床分期、淋巴结转移及血管浸润，同时机体免疫状况变化对HCC的疗效和预后也有重要影响[3]。

正常情况下，机体的免疫监控机制可消灭大多数异常的细胞。而HCC在生长过程中会释放多种细胞因子，这些细胞因子能够减弱或阻断机体对肿瘤细胞的免疫识别、清除，获得免疫逃逸能力，从而促进肿瘤细胞的生长、增殖，肿瘤细胞增殖进而分泌更多的细胞因子影响机体免疫功能，通过多种手段调控机体的免疫应答[4]。淋巴细胞是免疫系统的重要组成成分，在免疫反应过程中各司其职，维持正常的免疫功能，在肿瘤的发生发展中既有杀伤型免疫细胞，如NK 细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞能直接或通过分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞，抑制肿瘤生长；也有某些抑制型免疫细胞，如CD8+T细胞不但不能清除肿瘤细胞，反而在肿瘤的发生发展过程中抑制其他效应细胞的抗肿瘤作用[5]。研究表明HCC患者外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞数量明显减低，CD8+T细胞的数量却显著升高，经射频消融或手术治疗后检测发现CD4+T细胞、NK细胞的数量较治疗前有所增加，CD8+T细胞的数量减低，CD4+T/CD8+T也有升高[6]。同样，临床研究[7-11]显示在肺癌、乳腺癌、卵巢癌患者外周血及胃肠肿瘤患者腹水中CD4+T细胞、NK细胞增加与病情严重程度密切相关，CD8+T细胞减少也与病情相关，在治疗过程中监测可发现CD4+T细胞、NK细胞数量逐渐升高，而CD8+T细胞数量减少。研究表明[12-13]，特异性阻断CD8+T细胞表达可增强机体的抗肿瘤免疫能力，提示CD8+T细胞可作为肿瘤免疫治疗的新靶点。

表1　HCC患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞的检测结果(±s)

注：*P<0.05，▲P>0.05 (*表示中等、大及巨块HCC与正常对照组比较，▲表示小HCC与正常对照组比较)

表2　Child-Pugh分级的HCC患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞的检测结果(±s)

注：*P<0.05，▲P>0.05 (*表示Child-Pugh B、C级肝硬化与正常对照组比较，▲表示Child-Pugh A级肝硬化与正常对照组比较)

本研究显示随着HCC病灶的增大及Child-Pugh分级的增加，外周血中CD3+T细胞、CD4+T细胞和NK细胞的含量明显降低，而CD8+T细胞含量升高，与正常对照组比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)。但小HCC和Child-Pugh A级患者外周淋巴细胞含量与正常对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。HCC病灶越大肿瘤细胞数量更大，分泌更多的细胞因子影响机体免疫调控，使得CD4+T细胞和NK细胞数量减低，而CD8+T细胞含量升高，进一步加剧了机体失调的免疫调控机制，加重免疫损伤，进而可能促进病情进展。Child-Pugh分级B、C级患者肝功能差，机体免疫力低下，免疫功能紊乱表现更为显著，CD4+T细胞、NK细胞及CD8+T细胞数量发生改变，也能发挥免疫逃逸作用，促进肿瘤细胞生长、增殖。而通过调节免疫功能的辅助治疗在一定程度上有助于减轻HCC患者肝脏免疫损伤，改善肝功能，进而可能提高其治疗有效率、生存率，改善预后等。因此除外目前手术、介入、化疗及放疗等治疗方法，免疫治疗也是一种重要的辅助治疗手段。

综上所述，HCC的发生、发展、治疗及预后均与机体免疫调控密切相关，消除HCC患者体内抑制性T细胞如CD8+T细胞在肿瘤患者的异常增殖，消除其抗肿瘤免疫作用将成为免疫治疗领域的重要研究方向，免疫治疗的重要性不可忽视，因此需要开展进一步实践与研究，以期获得更为确切及规范的治疗，为 HCC患者生存及预后提供更多保障。

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(本文编辑：赖荣陶)

通信作者：于晓辉，Email: yuxiaohui528@126.com

(收稿日期：2014-12-10)

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