一例奶牛蹄病的综合诊治

程子龙，刘　朋，刘思当（山东农业大学动物科技学院，山东泰安　271000）



一例奶牛蹄病的综合诊治

程子龙，刘朋，刘思当
（山东农业大学动物科技学院，山东泰安271000）

摘要：2015年6-8月期间，山东某规模奶牛场180头奶牛先后出现蹄子肿胀、溃烂，无法站立，采食饮水困难，腹泻，逐渐消瘦等症状，死亡或淘汰80多头，损失重大。通过细菌分离鉴定和16SrRNA基因同源性分析，分离出葡萄球菌。通过对死淘牛蹄部组织进行病理组织学观察，对牛舍环境、日粮搭配、饲养管理等进行调查分析，最后确认该病例为葡萄球菌感染引起的蹄叶炎。其诱因可能与牛舍环境、日粮搭配、饲养管理等因素相关。基于发病原因对奶牛场制定综合防控措施，经过一周左右的治疗，病情得到控制。

关键词：奶牛；蹄病；综合诊治；葡萄球菌

1　发病背景

2015年6—8月，山东省某规模奶牛场180头奶牛出现严重的肢蹄病，开始时蹄冠部红肿，患牛疼痛症状明显，病蹄不敢负重。随着病情发展，蹄子肿胀越来越重，甚至出现破溃，继发细菌感染化脓。由于病牛无法站立，严重影响吃料和饮水，加上蹄部感染的细菌引起全身感染，重症病牛出现腹泻、脱水，甚至因败血症急性死亡，部分牛因无饲养价值而遭淘汰。

2　诊断方法

2.1病理学检查

详细观察蹄部，取蹄部炎症组织于10%福尔马林固定，常规石蜡切片［1］，HE染色，光镜下观察。

2.2细菌分离培养

自患牛蹄部脓肿内采集脓汁、破溃处化脓灶，在血琼脂平板上用划线分离培养法进行细菌分离培养［2］。划线完毕后分别进行有氧和无氧培养，24小时后观察细菌生长情况，整个实验过程要求严格无菌操作。

2.3革兰氏染色

用灭菌环分别挑取大小、形态、颜色不一样的单个菌落，在滴有无菌璘酸缓冲盐溶液（PBS）的载玻片上均匀涂布，自然晾干或者用酒精灯烤干；用革兰氏染液染色，自然晾干后用油镜观察。

2.4药物敏感试验

用圆纸片扩散试验法进行药敏试验［3］。分别将乳酸恩诺沙星、左氧氟沙星、氟苯尼考、硫酸新霉素、环丙沙星、林可霉素、头孢噻呋钠药敏片均匀贴在涂有细菌的平板上，放置在37 ℃恒温培养箱中培养18～24小时，观察结果。根据药物纸片周围有无抑菌圈及其直径大小，判断该菌对各种药物的敏感程度。

2.5分子生物学检测

分别挑取大小、形态、颜色不一样的单个菌落，混在LB液体培养基中，220 r/min、37℃摇菌12～16小时。用菌液作为模板，根据细菌16S rRNA基因设计通用引物，进行RCR、16S rRNA序列测定，并对测序结果进行BLAST比对分析［4-5］。2

.6 使用细菌鉴定药敏仪鉴定细菌

利用德国西门子96-Plus全自动细菌鉴定药敏仪，对平板上长出的菌落进行鉴定并做药敏试验［6］。

3　结果

3.1蹄部病变

蹄部冲洗干净以后可见趾间蜂窝织炎，球关节肿胀、化脓、破溃，破溃后形成腐肉样疣状物，切开后发现趾间皮肤增厚、发硬，关节腔内有大量的黄色积液（图1）。蹄部病理组织学观察，主要表现化脓性炎症病变。

图1　蹄部病变

3.2革兰氏染色结果

利用油镜观察，主要见革兰氏染色阳性菌，呈球形，两个或者四个甚至更多的细菌聚集成葡萄串状，初步判定为葡萄球菌（图2）。

3.3药敏试验结果

图2　油镜下细菌形态

所分离细菌主要对喹诺酮类药物敏感，对左氧氟沙星、恩诺沙星均为高敏，对氟苯尼考中敏，对青霉素、头孢噻呋钠、磺胺药不敏感。

3.4分子生物学检测结果

对细菌PCR产物进行测序分析，与登录号为KP279982.1的人葡萄球菌人亚种同源性为99%，为人葡萄球菌人亚种；另一株与登录号为KJ783397.1、KJ783395.1、KJ783392.1、KJ783387.1的产色葡萄球菌同源性为98%，为产色葡萄球菌。

3.5细菌鉴定仪鉴定结果

细菌鉴定结果显示有多种生物型葡萄球菌，包括松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌、木糖葡萄球菌、人葡萄球菌人亚种、溶血性葡萄球菌等不同血清型。

4　防治情况

通过细菌分离鉴定，从患病牛蹄部化脓部位分离到的多种葡萄球菌，导致奶牛蹄部出现红肿甚至化脓，引起严重的肢蹄病。另外其它一些因素也是本病的诱因，比如，日粮搭配不当，精料饲喂过多，牛运动场泥泞潮湿，饲料中内毒素、致炎因子含量过高等。除此之外，护蹄不当、其他疾病等也可诱发该病。因此，应综合考虑以上几个方面的因素，采取控制细菌感染、调整日粮结构、改善养殖环境、消除诱发因素等综合防控措施，实施治疗。

4.1全身用药

饲料中添加硫酸新霉素、包被维生素C、包被恩诺沙星，减少消化道内细菌内毒素、组织胺等致炎因子的产生。其具有抗氧化、减少自由基、减轻炎症反应等功效［7］。配合肌肉注射左氧氟沙星针剂，对病重的牛输液。

4.2局部治疗

定期对全群牛蹄部用4%硫酸铜溶液进行药浴；对已经发病的牛局部用普鲁卡因青霉素封闭治疗。用0.1%高锰酸钾或10%硫酸铜溶液冲洗蹄部［8］，涂以10%碘酊和鱼石脂，打上绷带，2～3天换药一次。

4.3改善饲养环境

保证牛舍清洁干燥，及时清除粪尿，定期消毒；运动场注意排水、平整，保持清洁干燥，清除石块。

4.4调整饲草饲料

合理调整日粮结构，控制奶牛日粮精粗比例，防止精料过多或日粮搭配不合理；控制日粮中钙磷比例，保证日粮中矿物质及微量元素的足量供给。另外，饲喂优质的饲草饲料，避免饲草饲料中存在内毒素和致炎因子。

通过实施上述综合防控措施，1周后未淘汰的病牛绝大多数治愈，牛群中未再有新病例出现，病情得以控制。

参考文献：

［1］侯春春，徐水. 浅析影响石蜡切片质量的关键因素［J］.中国农学通报，2009（23）：94-98.

［2］韩华. 细菌的分离培养与培养性状观察［J］. 养殖技术顾问，2013（6）：187.

［3］李新圃，郁杰，张礼华，等.药敏试验方法学研究概况［J］.天津畜牧兽医，1997（4）：7-10.

［4］朱飞舟，陈利玉，陈汉春. 16S rRNA基因序列分析法鉴定病原细菌［J］.中南大学学报（医学版），2013（10）：1035-1041.

［5］杨霞，陈陆，王川庆. 16S rRNA基因序列分析技术在细菌分类中应用的研究进展［J］.西北农林科技大学学报（自然科学版），2008（2）：55-60.

［6］段达荣，喻长法，闫李侠，等.革兰阳性菌引起的血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的方法探讨［J］.中国卫生检验，2013（13）：2748-2750.

［7］张卫星，万汇涓，曾宪惠.氧自由基致大鼠心肌线粒体损伤及维生素C对其保护作用的实验研究［J］.哈尔滨医科大学学报，2001（2）：82-84.

［8］肖红卫，李晓锋，刘西梅，等.牛蹄病综合防治措施［J］.湖北畜牧兽医，2007（12）：30-31.

（责任编辑：杜宪）

Comprehensive Diagnosis and Treatment of a Case of Dairy Cow Hoof Disease

Cheng Zilong，Liu Peng，Liu Sidang
（College of Animal Science and Technology，Shandong Agriculture University，Tai’an，Shandong 271000）

Abstract：From June to August in 2015，180 cows of a large-scaled dairy cow farm in Shandong Province showed hoof swell，fester and couldn't stand up to obtain food and water. Huge economic loss was caused by eliminating 80 of them. They were diagnosed as laminitis caused by staphylococcus via bacterial isolation and identification，16S rRNA homology analysis，histopathological observation of hoof tissue，research and analysis of the environment of cowshed，diets，feeding and management. The incentives may be the environment of cowshed，the collocation of diets，feeding and management. With a weekly treatment and comprehensive prevention measures，the condition of the disease was under control.

Key words：dairy cow；hoof disease；comprehensive diagnosis and treatment；staphylococcus

中图分类号：S851.34

文献标识码：B

文章编号：1005-944X-06-0080-03

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.06.023