蜜炙酸枣仁中斯皮诺素含量测定

隋利强　王　建　黄礼书　陈喆明

(1 福建中医药大学，福州，350122； 2 济宁市食品药品检验检测中心，济宁，272025)



蜜炙酸枣仁中斯皮诺素含量测定

隋利强1王建2黄礼书1陈喆明1

(1 福建中医药大学，福州，350122； 2 济宁市食品药品检验检测中心，济宁，272025)

摘要目的：以高效液相色谱法测定蜜炙酸枣仁中斯皮诺素的含量。方法：采用反相高效液相色谱法，以WondaCract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱，乙腈-水为流动相，检测波长335 nm，流速1 mL/min，柱温30 ℃。结果：斯皮诺素的线性范围0.005～0.3 mg/mL，r=0.9965，平均回收率为99.74%，RSD=1.46%。结论：该方法准确、重现性好，可为蜜炙酸枣仁的炮制工艺研究及质量控制提供检测标准。

关键词高效液相色谱法；蜜炙酸枣仁；斯皮诺素

酸枣仁为鼠李科Rhamnaceae植物酸枣的种子，是临床应用较为广泛的中药，具有养肝、宁心安神、生津、敛汗的功效，临床主要用于治疗失眠、心脾气血两虚，脾不统血证与治阴亏内热，心神不宁证,临床常用于治疗虚烦不眠[1-2]。

有关酸枣仁炮制方法的记载，最早见于南齐《刘涓子鬼遗方》，记载方法为炒法。历代炮制方法包括蒸法、酒浸法、姜汁炒等。2015版《中华人民共和国药典》中收载酸枣仁、炒酸枣仁。除此之外，福建省临床常用蜜枣仁，初步调研,福州同春药业有限公司供应的酸枣仁有酸枣仁、炒酸枣仁、蜜枣仁3种炮制品，近些年蜜枣仁销售量接近炒酸枣仁，说明蜜枣仁在福建省用的比较普遍，是地方习惯用药。该饮片用药历史悠久，收载于《福建省中药饮片炮制规范》[3]。

实践证明,酸枣仁蜜炙后不但可增强益阴敛汗作用，而且利于贮藏。研究显示，酸枣仁、炒酸枣仁、蜜枣仁3种炮制品在相同条件下贮藏12个月，蜜枣仁颜色、光泽、气味、霉变、虫蛀等5个方面均优于酸枣仁和炒酸枣仁。初步分析，酸枣仁经炼蜜炮制后，蜂蜜易渗人酸枣仁内部组织，降低酸枣仁的含水量，使酸枣仁不易吸潮霉变，颜色鲜艳，光泽度好，易于贮藏。此外,蜂蜜含有较丰富的营养成分，如葡萄糖、果糖、蔗糖、有机酸、维生素及无机盐类等，具滋补作用，味甜能矫味，并具有润肺止咳、润肠通便、解毒的作用，所以酸枣仁蜜炙后可增强益阴敛汗作用。另外，蜂蜜中含有大量还原糖，能防止药材有效成分的氧化变质[4]。

现代研究表明酸枣仁含酸枣仁皂苷、三萜化合物等，具有镇静、催眠、安神的作用。此外，2015年版《中华人民共和国药典》中所规定的酸枣仁质量标准中还包括斯皮诺素，该成分是酸枣仁中起效成分和质控成分。所以本研究以斯皮诺素为标准品，用高效液相色谱法测定了蜜炙酸枣仁中该成分的含量，旨在为蜜炙酸枣仁中斯皮诺素的含量测定及质量控制提供检测标准[5]。

1仪器与试剂

电子天平(梅特勒-托利多称重设备有限公司，XS105型)；电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司，京制00000246)；高效液相色谱仪(戴安，U3000型)。

甲醇(20141218，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈(20140321，国药集团化学试剂有限公司)；酸枣仁(20141107，陇西聚堂中药材实业有限公司)；斯皮诺素(99.35%，MuST-14042311，中国科学院成都生物研究所)。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱WondaCract ODS-2，(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水；检测波长：335 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：10 μL；以乙腈为流动相A，以水为流动相B；梯度洗脱；理论板数按斯皮诺素峰计算应不低于2000。

表1　斯皮诺素HPLC梯度洗脱条件

图1　蜜枣仁样品HPLC图谱

图2　斯皮诺素标准品HPLC图谱

2.2对照品溶液的制备取斯皮诺素对照品10 mg,精密称定，于10 mL容量瓶中加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得，HPLC图谱见图1。

2.3供试品溶液的制备参考文献[6-8]，取蜜枣仁样品粉末(过四号筛)约1 g，精密称定，置索式提取器中，加石油醚(60%～90%)适量，加热回流4 h，弃去石油醚液，药渣挥去溶剂，加入70%乙醇20 mL，加热回流2 h，滤过，滤渣用70%乙醇5 mL洗涤，合并洗液与滤液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[9-15]，HPLC图谱见图2。

2.4标准曲线的绘制精密吸取斯皮诺素对照品贮备液0.1、0.15、0.2、0.3、0.6 mL,分别置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，配成系列对照品溶液。按上述色谱条件进样测得各浓度峰面积，以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，得回归曲线Y=220.23x+1.4498，R=0.9930，结果显示斯皮诺素在0.05～0.3范围内有良好线性关系。见图3。

2.5精密度试验精密量取对照品溶液(1 mg/mL)0.2 mL于2 mL容量瓶，加甲醇定容，进样量为10 μL,分别连续进样5次，结果对照品峰面积的RSD=1.52%。见表2。

图3　斯皮诺素标准曲线

编号123456RSD%峰面积23.9924.0524.1724.1224.3124.991.52

2.6稳定性试验精密量取对照品溶液(1 mg/mL)0.2 mL于2 mL容量瓶，加甲醇定容，进样量为10 μL，分别于1、2、3、4、6、8、10和12 h进行测定，结果对照品峰面积的RSD=1.89%。见表3。

表3　稳定性试验

2.7重复性试验取同一样品5份，每份1 g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备溶液，分别进样，进样量10 μL，测定5个结果RSD为2.0%。见表4。

表4　重复性试验

2.8加样回收率试验精密量取已知含量(0.1430 mg/mL)的炒酸枣仁样品溶液0.9 mL，加入0.1 mL对照品溶液(1 mg/mL)，摇匀，进样10 μL进行测定，平行测定6份。计算平均回收率，结果平均回收率为99.74%，RSD=1.46%。见表5。

表5　斯皮诺素加样回收率

2.9样品含量测定样品按上述供试品溶液的制备方法制备样品溶液，精密吸取样品溶液10 μL，依照上述色谱条件进行测定。见表6。

表6　样品斯皮诺素含量测定结果

3讨论

本实验以斯皮诺素为标准品，用HPLC法测定了福州特色饮片蜜炙酸枣仁中该成分的含量，实验结果显示，该方法准确、重现性好，可为蜜炙酸枣仁的炮制工艺研究及质量控制提供检测标准。

目前，蜜枣仁生产多依赖传统经验，缺乏客观化、数字化、可推广的工艺参数。如此条件下，很难保证饮片质量，进而会影响临床疗效。因此，斯皮诺素含量可作为质控指标，开展蜜枣仁炮制工艺规范化和质量标准研究。

实验过程中，尝试分析生枣仁中斯皮诺素的含量，发现酸枣仁蜜炙后斯皮诺素含量稍有升高，可能与炮制过程辅料和加热有关，尤其是加热可在一定程度上促进药效成分的溶出。如需进一步研究酸枣仁蜜炙过程中的变化，需结合多个化学成分指标和药效学分析进行深入研究。

参考文献

[1]王茜,张艳强,杨艳婷,等.酸枣仁的化学成分及应用研究进展[J].黑龙江中医药,2015,28(2)：259-261.

[2]曾碧映,李嘉滢,李新才，等.中药酸枣仁研究现状[J].湖南中医药大学学报,2012,32(12):74-75.

[3]福建省卫生厅.福建省中药炮制规范[S].福州:福建科学技术出版社,1988：498.

[4]宋金泉,梁贞杰.3种酸枣仁的炮制体会[J].海峡药学,2008,20(9):72-73.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2015:366-367.

[6]娄燕,贾英,何博赛,等.RP-I-IPLC双波长法同时测定酸枣仁汤中5种成分的含量[J].沈阳药科大学学报,2013,30(7):537-540.

[7]常广璐,李国辉,李天祥,等.天津产与市售野生酸枣仁的质量比较研究[J].中草药，2015,11(5):751-755.

[8]崔思娇,罗洁,马天成,等.酸枣仁的超高效液相色谱指纹图谱[J].中国药学杂志，2013,48(7):509-511.

[9]杨军宣,张毅,蒲晓东,等.超临界-CO2萃取酸枣仁皂苷类成分的研究[J].中成药,2015,37(4):899-902.

[10]林海成,祝洪艳,张连学,等.正交试验优选酸枣仁总皂苷提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2015,21(5):42-45.

[11]毕福钧，林彤，江英桥，等.酸枣仁提取物定性定量分析方法的研究[J].中药新药与临床药理,2015,26(3)：365-369.

[12]王勇,魏娜,徐爽,等.多指标正交试验法优选酸枣仁药材水提取工艺[J].海南医学院学报,2011,17(11):1452-1456.

[13]路娟,王维宁,赵娟,等.灰关联度法评价中药酸枣仁的质量[J].沈阳药科大学学报，2011,28(7):549-555.

[14]毕福钧,林彤,江英桥.酸枣仁提取物定性定量分析方法的研究[J].中药新药与临床药理，2015,26(3):365-369.

(2015-10-20收稿责任编辑：洪志强)

Determination of Spinosin in Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae

Sui Liqiang1,Wang Jian2,Huang Lishu3,Chen Zheming3

(1FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China; 2JiNingCenterforFoodandDrugControl,JiNing272025,China; 3FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China)

AbstractObjective:To determine the content of Spinosin in Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae(Mizhi Suanzaoren) by HPLC(High Performance Liquid Chromatography).Methods:The experiment was conducted in the condition of WondaCract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5μm),mobile phase isacetonitrile-water,detection wavelength 335nm,and flow velocity 1 mL/min,column temperature 30 ℃,using RP-HPLC.Results:The linearity range of Spinosin is 0.005～0.3 mg/mL,r=0.9965,average recovery rate is 99.74%,RSD=1.46%.Conclusion:This method is accurate with great reproducibility.It can offer testing standards for processing study and quality control of Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae.

Key WordsHPLC; Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae; Spinosin

基金项目：福建省自然科学基金面上项目——基于特征成分“安神”增效的“蜜枣仁”炮制原理研究(编号：2016J01386)；福建中医药大学校管重点学科专项课题——福州特色饮片“蜜枣仁”炮制工艺规范化研究(编号：X2014106-学科)

通信作者：隋利强(1981.05—)，男，研究生，讲师，研究方向：中药炮制原理与炮制工艺研究，E-mail：suiliqiang007@163.com

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.040