HPLC法测定丹参配方颗粒丹参酮ⅡA含量*

戴淑娟，韩玲玲

(1.安徽医学高等专科学校，安徽 合肥 230061；2.安徽省食品药品检验所，安徽 合肥 230051)



HPLC法测定丹参配方颗粒丹参酮ⅡA含量*

戴淑娟1，韩玲玲2

(1.安徽医学高等专科学校，安徽 合肥 230061；2.安徽省食品药品检验所，安徽 合肥 230051)

摘要:目的：利用HPLC法对丹参配方颗粒中丹参酮ⅡA的实际含量进行精确测定.实验条件：选用高效液相色谱法测定，分离条件为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇-水(75：25)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长为270nm.结果：丹参酮ⅡA的线性范围为8.03～41.0 μg·mL-1(r=0.999 2)，平均加样回收率为97.3%(RSD=1.04%).结论：HPLC法不仅便于操作、且灵敏度强，在调控丹参配方颗粒含量方面发挥相关作用.

关键词:丹参配方颗粒；丹参酮ⅡA；含量

丹参又名赤参，紫丹参，红根等.为双子叶植物唇形科，干燥根极根茎.丹参具有祛瘀止痛、通经止痛、清心除烦活血调经、养血安神等功效[1-3]，其主要成分有丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮I、丹酚酸等.丹参配方颗粒主要具有三大优点：一是生产自动程度高；二是制作条件稳定；三是基本不受人为因素影响，当前在临床实践诊治活动中，应用度较高[4].现代研究证明：丹参酮ⅡA有抗血栓、降低血脂、改善微循环等心血管治疗方面的突出作用.因此，在本研究课题中，拟通过比较先进成熟的HPLC法[5]对丹参配方颗粒中丹参酮ⅡA的实际含量进行精准度量.此测定方法不仅便于操作，且灵活性强，可在调控丹参配方颗粒含量方面发挥重要作用.

1仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，ChemStation色谱工作站；CP225D电子天平(德国Sartorious公司)；DL-180型号的超声波清洗器(产自上海之信电器公司).

1.2试药

丹参酮ⅡA对照品(批号0786-200802，中国药品生物制品检定所)；丹参配方颗粒(广东，批号1207021、1207023、1207017)；色谱甲醇.

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(75：25)；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：270nm；进样量：10μL.

2.2对照品溶液的配制

精准称定定量的丹参酮ⅡA对照品，将其放于容积为25mL的容量瓶内，往容量瓶内加入适量甲醇相溶，然后稀释至所需浓度(41μg·mL-1)的标准品溶液.

2.3供试品溶液的制备

将丹参配方颗粒细细研磨至颗粒均匀，精准称取一定质量的粉末(约等同于1g饮片)，将其放于锥形瓶内，然后立即注入25mL甲醇，密封称重， 超声20 min后冷却处置，再添加适量甲醇以达到所需重量，轻轻摇匀之后进行过滤.将续滤液通过0.45μm标准的微孔滤膜仔细过滤，方可获取供试品溶液.

2.4线性关系考察

分别精准量取0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL的参照品溶液置放在容量为5mL的容量瓶内，然后向瓶内注入甲醇，并定容于标准刻度，轻轻摇匀，最后，成功获取5个不同浓度的混合的对照品溶液.根据色谱条件及要求，用所测色谱峰的峰面积(A)向对待测物浓度(C)进行线性回归处理，进而获取丹参酮ⅡA的回归方程为A=86.03C-49.43，r=0.9992，线性范围：8.03～41.0μg·mL-1.

2.5精密度试验

将1份供试品溶液进行5次进样，并记录待测组分色谱峰的峰面积，测得丹参酮ⅡA的峰面积RSD为0.83%，这表示该色谱设备具有较佳的精密性.

2.6稳定性试验

将1份供试品溶液，存放于同等温度环境中，于5个不同时段(0h，2h，4h，8h，24 h)分5次进样，其峰面积(A)的RSD是1.89%，表示于24h内，供试品溶液性质平稳.

2.7重复性试验

取同一批丹参配方颗粒粉末平均分成5份，每份适量，制成供试品溶液，测得丹参酮ⅡA的峰面积(A)的RSD为1.61%，说明同一批丹参配方颗粒粉末具有较好的重复性.

2.8加样回收率试验

按照要求精密称取6份已测定含量的丹参配方颗粒，根据1:1的比例标准，遵照操作流程添加丹参酮ⅡA对照品.然后根据本实验中供试品溶液的要求配制供试品溶液，并在完成产品总量测定的基础上计算具体回收率.具体详见表1.丹参酮ⅡA的回收率为97.3%(RSD=1.04%).

表1　加样回收率实验(n=6)

表2　丹参酮ⅡA的含量测定结果(n=3)

2.9样品含量测定

精密称定三批丹参配方颗粒粉末，按照上述色谱条件和溶液配制方法制备供试品溶液，测定峰面积的，通过外标法对丹参酮ⅡA成分的具体含量进行计算，其色谱图信息可参见图1，含量测定结果见表2.由表2可知，三批配方颗粒丹参酮ⅡA的平均含量为0.012 mg·g-1，相当于原药材含量的0.001%.

图1　丹参配方颗粒HPLC色谱图

3讨论

依据2010年版中国药典，按丹参药材换算，原药料含丹参酮ⅡA不得少于0.20%，而本实验三批供试品均未达到要求，表明脂溶性成分在提取过程中严重丢失，后续的实验中我们将对此问题进行进一步研究.

在色谱条件筛选实验中，本文对样品的提取方法、提取时间、流动相比例流速、检测波长等多方面进行考察，结果表明甲醇超声提取样品30min，甲醇-水(75：25)为流动相，流速1.0mL/min,检测波长为270nm.得到的色谱峰峰型、各峰分离度均较理想.

本实验建立了一种丹参配方颗粒中丹参酮ⅡA的定量分析方法.此方法不仅操作简单，重现性良好且拥有比较理想的精密度，为严格管理药品相关成分的质量提供了有效手段，为临床实践诊治活动提供一定的方法指导.

参考文献：

[1]张克良，王继者.丹参的作用与用途[J].新中医，1983：11.

[2]陈向荣，陆京伯，等.丹参的药理作用研究新进展[J].中国医院药学杂志，2001(1)：97..

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) [S]. 北京：化学工业出版社, 2010:70.

[4]姚焕英,赵宁霞,等.配方颗粒临床利弊点滴谈[J].现代中医药, 2010,26(1):26.

[5]谢胜新.HPLC法测定丹参和丹参配方颗粒中丹参酮ⅡA的含量的研究[J].上海中医药杂志，2004，38(12)：52-53.

(责任编辑:王海波)

Determination of Tanshinone IIA in Salvia Miltiorrhiza Granules by HPLC

DAI Shu-juan1,HAN Ling-ling2

(1.AnhuiMedicalCollege,Hefei,Anhui230031,China;2.AnhuiInstituteforDrugControl,Hefei,Anhui230031,China)

Abstract:Objective:In order to establish an accurate and practical HPLC method for determinating the math of Tanshinone IIA in Salvia Miltiorrhiza Granules the HPLC methocl is used．Methods：Chromatographic separation was operated on an Agilent Zorbax SB-Cl8 column(250mm×4.6mm，5μm)with mobile phase of methanol(It's ratio IS 75:25),water solution at a flow rate of 1.0 mL/min and a column temperature of 22℃．The eluted analytes were detected by on-1ine UV detector whose wavelength was set at 270 nm．Results：The calibration curves of Tanshinone IIA was linear over the ranges of 8.03～41.0 μg/mL-1(r=0.999 2)，and the average recoveries was 97.3%(RSD=1.41%)．Conclusion：The established method is simple，rapid，reliable and can be used for drug contro1．It is meaningful for using in Clinical practice.

Key words:Salvia Miltiorrhiza Granules; Tanshinone IIA; Content

DOI:10.13877/j.cnki.cn22-1284.2016.06.007

*收稿日期：2016-05-04

基金项目：安徽省高等学校省级自然科学研究项目“牡丹皮配方颗粒制备方法及质量控制”(KJ2012Z204)

作者简介：戴淑娟，硕士研究生，讲师.

中图分类号：R-33

文献标志码：A

文章编号：1008-7974(2016)03-0018-03