HPLC法测定逍遥散中芍药苷的含量

梁萍 彭建彪 龙凯

【摘 要】 目的：建立逍遥散中芍药苷的测定方法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（Durashell C18柱；250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84）；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃。结果：芍药苷在0.0423～0.4234μg范围内呈现良好的线性关系，r=0.9996，平均回收率为99.95%（RSD=1.73%，n=6）。结论：本方法专属性强，准确度高，重现性良好，可用于逍遥散的质量控制。

【关键词】 逍遥散；含量测定；芍药苷；HPLC

【中图分类号】R286.0 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）11-0017-02

Abstract：Objective To establish a method for determination of paeoniflorin in Xiaoyao Powder. Method Eighteen using C18 column chromatography （Durashell C18 column；250×4.6mm，5μm）；The mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric acid solution （16∶84）；Detection wavelength： 230nm；Flow rate： 1.0ml/min；column temperature：30℃.Result Paeoniflorin in 0.0423μg ～ 0.4234μg range showed a good linear relationship（r=0.9996），The average recovery was 99.95% （RSD=1.73%， n=6）.Conclusion The method has strong specificity and high accuracy，Good reproducibility， can be used for the quality control of Xiaoyao Powder.

Keywords：Xiaoyao Powder；Determination； Paeoniflorin； HPLC

逍遥散为云南省个旧市中医院制剂，执行标准为滇ZJGF/2005-721.逍遥散由柴胡、当归、白芍、薄荷等七味药制备而成，具有疏肝解郁、健脾和胃的功效。处方中白芍为方中主药，白芍的主要活性成分为芍药苷，现行质量标准未测定芍药苷不够全面，为保证该制剂的内在质量，研究采用高效液相色谱法（HPLC）对处方中白芍主要活性成分芍药苷进行定量研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent1260型高效液相色谱仪；Sartorius BP211D电子天平，奥豪斯AR224CN电子天平。

1.2 试药 芍药苷对照品（批号：110736-201438，中国食品药品检定研究院）；逍遥散（批号：20150814、20151013、20151108、20151215，云南省个旧市中医院）。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Durashell C18 （4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长[1]：230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加甲醇制成每1ml含芍药苷40μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备[1] 取本品约0.3g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇35ml，超声处理（功率240W，频率45KHz）30min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 取缺白芍的阴性样品0.3g，按“2.3”项供试品溶液的制备方法制备，即得。

2.5 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果供试品色谱中呈现与對照品保留时间一致的色谱峰，阴性样品在与芍药苷对照品相同的保留时间处未显色谱峰，可见其他原辅料对主成分无干扰。（见图1）。

2.6 线性关系考察 分别精密吸取2.2中对照品溶液（每1ml含芍药苷42.3389μg）1、2、4、8、10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以芍药苷峰面积为纵坐标，进样量为横坐标作线性回归，结果峰面积Y与其进样量X（μg）之间呈良好的线性关系，芍药苷的线性范围为：0.0423～0.4234μg，回归方程为：Y=1265.48236X-8.172520，r=9996。

2.7 稳定性试验 取同一逍遥散供试品溶液按上述色谱条件分别在0、1、2、4、8、12h时进样测定，测得芍药苷峰面积分别为472.49792、476.46701、476.68494、476.56143、475.38214、477.20706，RSD为0.37%，表明供试品溶液在12h内稳定。

2.8 精密度试验 精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定5次，测得芍药苷峰面积分别为：537.34906、537.89551、538.09821、538.14862、538.51733、527.16009，RSD为0.83%，结果表明精密度良好。

2.9 重复性试验 取同一批号（批号20150814）样品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定，芍药苷的平均含量为6.2130mg/g，RSD为0.76%，结果表明重复性良好。

2.10 回收率试验 精密称取6份供试品（批号：20150814，已测芍药苷含量为6.2130mg/g），每份约0.15g，按1∶[KG-*2]1比例加入芍药苷对照品，即加入芍药苷对照品溶液（芍药苷浓度0.2117mg/ml）4.5ml，挥去溶剂。然后按供试品溶液处理方法同法处理，将处理好的供试品溶液按含量测定方法同法测定，计算回收率，芍药苷的平均回收率为99.95%，RSD为1.73%。结果见表1。

2.11 样品含量测定 取4批逍遥散样品，按供试品溶液的制备方法操作，按“2.1”项下色谱条件测定芍药苷的含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 芍药苷[2] 具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿的作用。芍药苷是处方中主药白芍的主要活性成分，且其含量也相对较高，现行质量标准未测定芍药苷不够全面，通过试验用HPLC法测定逍遥散中芍药苷的含量。

3.2 方中白芍直接粉碎入药，参照2015年版《中国药典》一部白芍含量测定项 下的提取方法，用稀乙醇超声30min提取白芍中芍药苷较为完全 。

3.3 经试验，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（16∶[KG-*2]84），流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：230nm，测得结果比较理想。本法专属性强，操作方便，准确度高，重现性良好，可以用于逍遥散的质量控制。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：105.

[2]吴春福.芍药及其化学成分的药理学研究概况[J].中药通报，1985，10（6）：43-46.

（收稿日期：2016.04.08）