高效液相色谱法分离化妆品中7种限用色素

黄向红，孟红燕，陈德文

（1.浙江树人大学生物与环境工程学院，浙江 杭州　310015; 2.常州大学石油化工学院，江苏 常州　213100；3.义乌市产品（商品）质量监督检验研究院，浙江 义乌　322000）



高效液相色谱法分离化妆品中7种限用色素

黄向红1，孟红燕2，陈德文3

（1.浙江树人大学生物与环境工程学院，浙江 杭州310015; 2.常州大学石油化工学院，江苏 常州213100；3.义乌市产品（商品）质量监督检验研究院，浙江 义乌322000）

摘要：以乙腈/水为流动相，使用C 18色谱柱和紫外检测器，建立了同时分析分散黄3、颜料橙5、苏丹红I、II、III、IV、苏丹蓝II的高效液相色谱方法。外标法定量，探讨了检测波长和流动相对7种限用色素分离的影响，确定了较佳的色谱分离条件,R SD≤5.21%，回收率为61.91%～106.0%。

关键词：高效液相色谱法；化妆品；色素；分离

随着生活水平的不断提高，化妆作为美容方式之一，已经成为一种世界流行的时尚。在化妆品中添加着色剂可以起到美化修容作用[1]，然而，大多数色素是合成染料，长期或过量使用对人体有一定潜在危害[2]，因此人们对化妆品成分提出了更高的要求。世界上很多国家纷纷立法对化妆品中着色剂的用量加以限制[3]。

目前，对化妆品中有机着色剂的测定主要采用高效液相色谱法（H PLC）[4]、高效液相色谱－串联质谱法[5]、分光光度法[6]和胶束荧光法[7]等。本研究根据化妆品的种类，在采用液-液萃取简单易行的样品前处理方法提取后，用H PLC对7种限用色素同时进行检测，探讨了检测波长和流动相对色素分离的影响，确定了较佳的色谱分离条件。

1　实验部分

1.1仪器

电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司），Agi l ent1200高效液相色谱仪（配有四元高压泵和紫外检测器，安捷伦公司）。

1.2试剂与材料

甲醇、乙腈(色谱级)；色素（w>99%）；超纯水。

1.3溶液的制备

标准溶液的配制：准确称取一定量的7种色素标准品各10 m g，置于10 m L容量瓶中，用甲醇定容。该贮备液在4℃以下密封冷藏保存，使用时稀释至所需浓度。

样品溶液的配制：准确称取样品5 m g，置于2.5 m L离心管中，用甲醇-离子液体溶液充分摇匀使样品溶解。

1.4色谱条件

色谱柱：H ypersi lC18柱（4.6 m m×250 m m，粒径5 μm）；柱温：室温；流动相：乙腈-水；检测波长475 nm；流速0.80 m L/m i n；进样体积20μL。

1.5计算

回收率=（加标测定值-测定值）/加标值×100%

2　结果与讨论

2.1色谱条件的确立

2.1.1检测波长的确定

波长选择是依据待测物质最大吸收波长来决定的。通常，高效液相色谱检测器为紫外检测器，因而，H PLC中波长的选择和紫外波长选择一致，均为选择最大吸收波长，这样能保证检测的灵敏度和响应值最高。扫描分散黄3、颜料橙5、苏丹红I、II、III、IV、苏丹蓝II 7个色素的紫外吸收光谱，如图1。从图1可以看出，7种色素在475 nm附近吸收均较强，单位质量吸光度相近，确定将475 nm作为检测波长。

图1　7种色素的的紫外吸收光谱

2.1.2流动相的选择

本实验考察了上述7种限用色素在甲醇/水和乙腈/水流动相体系中的色谱分离情况。各标准品色素的分离色谱图如图2。由图2可以看出，在甲醇/水体系中，色谱图基线不稳，各个峰分离度小，苏丹蓝Ⅱ没有出峰，苏丹红IV的保留时间较晚，与前一个峰出峰时间相隔甚远。而在乙腈/水中，7种限用色素能够得到较好的分离结果，故选择乙腈/水作为流动相。

图2　7种色素在甲醇/水和乙腈/水流动相体系中的色谱分离情况

2.2精密度试验

在上述条件下，对样品进行平行测定，7种色素平行测试的相对标准偏差如表1所示，分别为分散黄3：4.87%；颜料橙5：3.07%；苏丹红Ⅰ：5.21%；苏丹红Ⅱ：3.31%；苏丹蓝Ⅱ：3.31%；苏丹红Ⅲ：3.40%；苏丹红Ⅳ：3.12%。(n=8)。实验结果表明：选择的波长和流动相满足分离7种限用色素的条件，高效液相色谱精密度高。

2.3准确度试验

样品稀释后加入一定量分散黄3、颜料橙5、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹蓝Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的混合标样，样品加标色谱图如图3所示，回收率为61.91%～106.0%，分离方法可行。

图3　样品加标色谱图

3　结论

选择的7种限用色素在化妆品着色剂中具有一定的代表性，高效液相色谱法可以有效地分离化妆品色素，该方法精确度和准确度都比较高，选择的波长和流动相满足分离色素的要求，是值得推广的一种色素测定方法。

表1　样品平行测试的相对标准偏差

参考文献

[1]李玮,芮昶,屠海云.高效液相色谱法测定化妆品中的7种色素[J].分析实验室,2011,30(12):85-89.

[2]郑星权,周淑玉,周世伟.化妆品卫生检验手册.北京:化学工业出版社，2003:17-31，371.

[3]中华人民共和国卫生部.化妆品卫生规范[S].北京:中国标准出版社,2007．

[4]M ust af a Soyl ak,Yunus Em re Unsal,Erkan Yi l m az.De鄄termination of rhodamine B in soft drink,waste water and lipstick samples after solid phase extraction[J]. Food and Chemical Toxicology,2011（49）:1796–1799.

[5]Chi en Chun W ang,Adri ana N.M asi,Li l i ana Fernandez．On-line micellar-enhanced spectrofluorimetric deter鄄mination of rhodamine dye in cosmetics[J].Talanta 2008（75）:135–140.

[6]林维宣,孙兴权,赵雪蓉.高效液相色谱-串联质谱法同时检测化妆品中6种禁用着色剂 [J].色谱, 2012,30（5）:527-532.

[7］卢剑,郦明浩.H PLC法测定唇彩、口红中苏丹红色素含量[J]．香料香精化妆品,2008（1）:20-22.

doi：10．13752／j．issn．1007－2217．2016．02．006

收稿日期：2016－01－27