不同灭菌工艺银翘散中指标成分含量的比较

方家悦 徐 剑* 杨立勇 张永萍

（贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002）



不同灭菌工艺银翘散中指标成分含量的比较

方家悦 徐 剑* 杨立勇 张永萍

（贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002）

【摘要】目的 比较不同灭菌工艺银翘散中指标成分含量。方法 以灭菌率为指标，采用正交试验优化银翘散微波灭菌工艺参数，UPLC法测定其中5种成分含量，并与传统干热灭菌方法对比。结果 微波灭菌工艺下的5种指标性成分的总含量略高于传统灭菌工艺。结论 微波灭菌技术用于银翘散的干燥，工艺简单、干燥时间短，且能有效保留各指标成分。

【关键词】银翘散；灭菌工艺；含量测定

银翘散含有大量挥发油类有效成分，传统灭菌方法均存在一些不足[1-3]，而微波灭菌是利用微波的介质加热特性，相关的文献报道，微波灭菌温度低、时间短、灭菌效率高，对成分的影响相对较小[4-5]。

1 仪器与试药

1.1 仪器：ACQUITY 型UPLC（美国 Waters 公司生产，涵盖Empower3色谱数据），卤素水分测定仪（HG63型，METTLER公司）；微波炉（型号：EM-F2117ES1，合肥荣事达三洋电器股份有限公司）；手提式不锈钢压力蒸汽灭菌器（型号：YX280B，上海三申医疗器械有限公司）。

1.2 试药：银翘散，营养琼脂培养基，玫瑰红钠培养基，绿原酸、甘草苷、橙皮苷，连翘苷、牛蒡苷，以上对照品均为20毫克/瓶。甲醇，甲酸，仟净蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 微波灭菌工艺筛选：选取微波功率、灭菌时间和含水量为考察因素。称取银翘散样品0.1 g，用无菌生理盐水稀释10、100、1000 倍3个不同的浓度梯度。移取1∶0000菌液1 mL加入平皿中后倾倒20 mL营养琼脂培养基，在30~35 ℃的恒温恒湿培养箱中培养48 h，记录菌落数；移取1∶100菌液1 mL加入平皿中后倾倒20 mL玫瑰红钠琼脂培养基，在23~28 ℃的恒温恒湿培养箱中，培养72 h，记录菌落数。数据显示微波功率600 W，灭菌时间5 min，含水量15%左右时进行微波灭菌是最佳的工艺条件且所选因素皆无明显显著性。

2.2 色谱条件：BEH Shield RP17色谱柱，0.15%甲酸水溶液-甲醇按时间洗脱，流速为每分钟0.25 mL，柱温40 ℃，检测波长279 nm，进样体积2 µL。

2.3 混合对照品溶液的制备：首先，取适量的绿原酸、甘草苷、橙皮苷、牛蒡子苷和连翘苷对照品并用甲醇溶解至一定刻度后置25 mL量瓶中，每样对照品都稀释成一定浓度。其次，分别取不同量的上述对照品溶液置同一25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀后得到混合对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备：取0.2 g银翘散粉末放于具塞锥形瓶中，同时加入50 mL浓度为75%的甲醇，称定质量后回流提取1 h并放冷，再称定质量，接着用甲醇溶液补足减失的质量，摇匀过滤后，取续滤液，用0.22 µm微孔滤膜过滤。

2.5 方法学考察：分别精密吸取不同量的上述5种对照品储备液配成6个不同浓度的对照品混合溶液，注入UPLC测定后得回归方程（表1）。数据表明，5种对照品范围内线性关系均良好。

表1 5种指标性成分的回归方程

取同一份供试品溶液，连续进样6次，测定峰面积，计算RSD （n=6）。取6份含量明确的银翘散各0.1 g加入一定量对照品溶液进行检测，计算各成分的加样回收率。结果见表2。结果表明：仪器的精密度良好，样品在24h的稳定性良好，能够准确测定银翘散中5种指标性成分的含量。

表2 精密度、重复性、稳定性及回收率结果

2.6 样品测定：精密吸取各灭菌工艺下的银翘散供试品溶液，注入UPLC后记录色谱图并测定各样品中5种指标性成分的含量（表3）。结果表明：两种灭菌工艺下的银翘散化学成分类型无差异，但微波灭菌工艺下的5种指标性成分的总含量略高于传统灭菌工艺。

表3 不同灭菌工艺下的指标性成分含量[（n=3）mg/g]

3 讨 论

微波灭菌是在其热力效应与电磁力效应共同作用下完成的。热力效应作用下细胞核浓缩、溶解、细胞缩小、解体而达到杀灭细菌的目的，电磁力效应作用下细菌电容性结构的细胞膜在微波交变电场中被击穿破裂，同时，细菌赖以生存的离子通道，出现调节功能障碍，从而造成细菌死亡。与其他灭菌方法相比，微波灭菌具有速度快、适用性广、低温操作、安全可靠、连续化操作和满足环保等优点，本研究确定的银翘散微波灭菌工艺参数为：灭菌功率600 W，灭菌时间5 min，含水量15%。在该工艺条件下，灭菌前后银翘散中指标成分含量无明显变化，灭菌效果良好。关于微波对霉菌、大肠菌群等微生物指标的影响有待进一步研究。

参考文献

[1] 黄玉兰,李镇涛,吕谦.中药制剂微生物污染的因素及对策[J].药物评价研究,2011,34(3):204-207.

[2] 陈天朝,徐丽军,宋薇.中药固体制剂灭菌技术研究现状、问题及对策[J].中医学报,2013,28(128):1015-1017.

[3] 吴健雄,曹光环,秦建平,等.正交试验优化人参的微波灭菌工艺研究[J].现代药物与临床,2012,27(1):27-30.

Comparision of Content of Index Component in Yinqiao Power by Different Sterilization Technologies

FANG Jia-yue, XU Jian, YANG Li-yong, ZHANG Yong-ping
(Guiyang College of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China)

[Abstract] Objective To compare the different sterilization process in Yinqiao Powder content. Methods The sterilization rate as the index, the optimum process parameters of microwave sterilization of Yinqiao Powder by orthogonal test， determination of the 5 components in the UPLC method， and compared with the traditional heat sterilization method. Results The total content of 5 kinds of index components in microwave sterilization process was slightly higher than that of conventional sterilization process. Conclusion The microwave sterilization technology for yinqiao powder drying， simple process， short drying time, and can effectively retain all indexes.

[Key words]Yinqiao power； Sterilization technology； Determination

中图分类号：R282.710.3

文献标识码：B

文章编号：1671-8194（2016）06-0022-02

*通讯作者