两种致病菌对抗菌素类药物的感受性试验

2016-07-01张娟张凤翔许冬梅毕靖红

水产养殖 2016年5期

关键词：感受性氟苯尼抗菌素

张娟，张凤翔，许冬梅，毕靖红

（兴化市渔业技术指导站，江苏　兴化　225700）

两种致病菌对抗菌素类药物的感受性试验

张娟，张凤翔，许冬梅，毕靖红

（兴化市渔业技术指导站，江苏兴化225700）

资助项目：2015年泰州市高层次人才科研项目；江苏省水生动物疫病监控项目

抗菌素目前已经被广泛应用于水生动物细菌性疾病的治疗，然而由于长期使用和使用方法不当等原因，致病菌对抗菌素逐渐产生了耐药性。为了帮助养殖户科学地选择和使用水产用抗菌素类药物，避免渔用药物滥用或者误用，2015年4—10月，项目组从江苏省兴化市人工养殖的鱼体内分离了致病菌，测定其对常见水产用抗菌素类药物的敏感性。

1　材料与方法

1.1供试药物

供试药物为目前比较常用的抗菌素：恩诺沙星、土霉素、硫酸新霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、阿莫西林、多西环素、痢菌净、磺胺二甲嘧啶和复方新诺明。

1.2供试菌株

草鱼、鲫鱼和鳊鱼为兴化市常规养殖品种，养殖面积一般为15×667 m2～40×667 m2，2015年4—10月在发病的成鱼养殖池塘中随机采样，草鱼规格为1～2 kg/尾，鲫鱼为0.15～0.3 kg/尾，鳊鱼为0.3～0.4 kg/尾，病鱼一般表现为赤皮、烂鳃、肠炎等症状。采用无菌操作的方法，从鱼体内（肝脏、脾脏、肾脏）分离致病菌（菌株分离的时间、地点和水生动物种类等详细情况见表1和表2），菌株保存于兴化市渔业技术指导站，主要为嗜水气单胞菌株和温和气单孢菌株。

1.3供试菌株最小抑菌浓度的测定将供试药物采用适宜的溶媒溶解后，在无菌条件下用营养琼脂培养基将药物稀释，制作成药物浓度分别为64、32、16、8……0.25 mg/L的2倍稀释药物系列培养基，将系列培养基制成药敏板。最后，定量吸取0.5麦氏单位的细菌混悬液0.1 mL加入药敏板中，摇匀。置于35℃条件下培养24 h，经肉眼观察，无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）。

2　结果

2.1嗜水气单胞菌对抗菌药物的感受性

试验共分离了16株嗜水气单胞菌，通过检测供试药物对菌株的最小抑菌浓度，得出16株嗜水气单胞菌对各种抗菌药物感受性，如表3所示。

2.2温和气单孢菌对抗菌药物的感受性

试验共分离了5株温和气单孢菌，通过检测供试药物对菌株的最小抑菌浓度，得出5株温和气单孢菌对各种抗菌药物感受性，如表4所示。

3　分析与建议

3.1致病菌药物感受性分析

不同抗菌素药敏试验的敏感性结果判定标准有所不同，参照临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）标准，对药物的敏感性及耐药性判定范围划分，如表5。依据这一划分范围，将所有抗菌药物对菌株的MIC值测定结果进行判定，得出了嗜水气单胞菌对抗菌素类药物的感受性测定结果（表6）和温和气单胞菌对抗菌素类药物的感受性测定结果（表7）。

表1　嗜水气单胞菌菌株的来源

表2　温和气单胞菌菌株的来源

3.2药物使用建议

同种病原菌对不同抗菌素的感受性不同，不同的病原菌对同种抗菌素的感受性也不同［1］。该研究中，嗜水气单胞菌对氟苯尼考、恩诺沙星和痢菌净等敏感；对土霉素、硫酸新霉素、甲砜霉素、多西环素和复方新诺明等具有一定的耐药性；对阿莫西林和磺胺二甲嘧啶全部具有耐药性。温和气单胞菌对氟苯尼考、恩诺沙星、甲砜霉素和痢菌净等敏感；对土霉素、硫酸新霉素、多西环素和复方新诺明等具有一定的耐药性；对阿莫西林和磺胺二甲嘧啶全部具有耐药性。嗜水气单胞菌和温和气单孢菌均属于弧菌科气单胞菌属，从检测结果可以看出，这两种菌对同一种抗菌素药物的感受性类似。

21株菌株对阿莫西林和磺胺二甲嘧啶均具有耐药性，说明该药对气单孢菌已无明显效果，治疗鱼病时尽量避免使用。氟苯尼考的MIC值小于0.25 μg/mL，恩诺沙星的MIC值小于2 μg/mL，痢菌净的MIC值集中于2～4 μg/mL，说明气单胞菌对氟苯尼考最敏感。因此，若发生由气单孢菌引起的水生动物疾病时，建议选用氟苯尼考、恩诺沙星和痢菌净等药物，其中优先选用氟苯尼考。