（1，3）-β-D葡聚糖检测联合CD4+T淋巴细胞计数对获得性免疫缺陷综合征合并侵袭性真菌病诊断的价值*

杜榴恩



（1，3）-β-D葡聚糖检测联合CD4+T淋巴细胞计数对获得性免疫缺陷综合征合并侵袭性真菌病诊断的价值*

杜榴恩①

【摘要】目的：探讨分析（1，3）-β-D葡聚糖（BDG）检测（G试验）联合CD4+T淋巴细胞计数对于获得性免疫缺陷综合征（AIDS）合并侵袭性真菌病（IFD）的临床诊断价值。方法：选择本院收治的疑似合并IFD的AIDS患者59例作为研究对象，同时实施G试验及CD4+T淋巴细胞计数。按照IFD诊断标准，将患者分为IFD组31例及非IFD组28例。分析IFD组和非IFD组的CD4+T淋巴细胞计数结果及不同检测方法的阳性率检测结果。结果：IFD组CD4+T淋巴细胞计数显著低于非IFD组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；IFD组患者的G试验结果显示阳性率为74.19%，联合诊断结果显示阳性率为90.32%；非IFD组患者G试验结果显示阳性率为17.86%，联合诊断结果显示阳性率为10.71%，两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：G试验联合CD4+T淋巴细胞计数对于确诊AIDS合并IFD，具有极高的价值，值得推广应用。

【关键词】（1，3）-β-D葡聚糖； CD4+T淋巴细胞计数； AIDS； IFD

①广东省肇庆市第一人民医院 广东 肇庆 526060

Medical Innovation of China， 2016，13（16）：035-038

First-author's address：The First People's Hospital of Zhaoqing City，Zhaoqing 526060，China

侵袭性真菌疾病（IFD）是人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者/获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者的常见合并症之一，该病也是导致AIDS患者死亡的重要原因，具有较高的致死率［1］。研究认为，IFD发病较为隐匿，不具有典型的临床表现，目前还无成功率较高的治疗方式。因此，其早期以及特异性的诊断，有助于改善预后。既往常规应用真菌培养以及病理活检方式实施IFD检查，但实施真菌培养，其阳性检出率低，需要较长的时间；实施病理活检，则具有创伤性，而且难以操作，这两种方法均不能取得理性的效果。目前，较多的前沿研究均将非培养诊断作为IFD诊断的研究方向，其中（1，3）-β-D葡聚糖（BDG）检测（G试验）已得到广泛应用，并已经成为IFD的一种诊断标准。本院积极探讨分析（1，3）-β-D葡聚糖（BDG）检测（G试验）联合CD4+T淋巴细胞计数对于获得性免疫缺陷综合征（AIDS）合并侵袭性真菌病（IFD）的临床诊断价值，取得了具有推广价值的经验，基本情况如下。

1　资料与方法

1.1一般资料 本研究中所涉及的对象均为本院2014年8月-2015年8月期间收治的疑似合并IFD 的AIDS患者，共59例，其中男40例，女19例；患者年龄18～65岁，平均（48.5±5.5）岁。所有研究对象均符合美国疾病预防与控制中心（CDC）制定的AIDS相关诊断标准，具有抗HIV阳性，并经本院实验室筛查确诊。参照《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则》，将所有研究对象分为非IFD组（28例）和IFD组（31例）［2］。其中IFD诊断标准为：通过组织病理学检查发现真菌或者无菌组织培养发现真菌；患者有IFD宿主/环境因素、临床及影像学表现，均有临床诊断意义的微生物学依据（排除G试验）；患者具有IFD宿主/环境因素、临床及影像学表现，没有微生物学依据。

1.2方法 （1）样本采集：将疑似合并IFD 的AIDS患者采集肝素钠和乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝血浆样本各2 mL，分别实施G试验以及CD4+T淋巴细胞计数。同时送检痰液实施真菌培养及涂片，另外送检血液、骨髓、尿液、大便、胸腔积液、腹水、脑脊液真菌培养及涂片。（2）G试验：应用含肝素钠真空玻璃管采集血液2 mL送检，应用MB-80微生物快速动态检测系统以及G试验试剂盒实施检测。当BDG≥20 pg/mL时，则可判定结果为G试验阳性。（3）CD4+T淋巴细胞计数：抽取EDTA-K2抗凝静脉血2 mL送检，应用FACSCantoⅡ流式细胞仪、6色TBNK试剂和FRCS溶血素检测CD4+T淋巴细胞绝对数，单位为cell/μL。（4）真菌培养及鉴定：对提取到的患者血液、骨髓、脑脊液、痰液以及其他深部组织液实施真菌培养，应用全自动微生物分析系统以及真菌鉴定片实施真菌鉴定，按照真菌形态以及菌落特征等对菌种进行确定。

1.3观察指标 分析IFD组和非IFD组的CD4+T淋巴细胞计数结果及不同检测方法的阳性率检测结果。

1.4统计学处理 使用SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量资料采用（±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组的一般情况 IFD组中G试验阳性患者为23例，其中确诊IFD者共10例，病原菌方面：含念珠菌2例，曲霉1例，新生隐球菌2例，毛霉1例，马尔尼菲青霉4例；临床诊断IFD者共10例，可疑病原菌方面：含念珠菌2例，曲霉2例，马尔尼菲青霉1例，细菌真菌混合感染5例，2例死亡；拟诊IFD者共3例，含1例胃镜确诊真菌感染，2例存在影像学改变。非IFD组中G试验阳性患者为3例，25例存在肺部感染，23例存在口腔真菌感染，该组患者深部真菌其他检查均表现为阴性，22例得以缓解，5例因病菌感染加重，1例因多器官功能衰竭死亡。

2.210例确诊IFD患者G试验结果情况 10例IFD确诊患者中，有7例G试验阳性（阳性率70.00%），3例G试验假阴性（假阴性率30.00%），其BDG范围为15.53～＞1000.00 pg/mL，见表1。

表1　10例IFD确诊患者真菌感染G试验BDG结果情况

2.3AIDS患者IFD与CD4+T淋巴细胞计数分析 IFD 组CD4+T淋巴细胞计数显著低于非IFD组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2　AIDS患者IFD与CD4+T淋巴细胞计数分析　例

2.4G试验联合CD+T淋巴细胞计数诊断IFD的结果比较 IFD组患者的G试验结果显示阳性率为74.19%，联合诊断结果显示阳性率为90.32%；非IFD组患者G试验结果显示阳性率为17.86%，联合诊断结果显示阳性率为10.71%，两组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3　G试验联合CD+T淋巴细胞计数诊断IFD的结果比较　例（%）

3　讨论

AIDS患者的特征性生理病理变化即重度免疫功能缺陷，HV-1能够通过膜上的一种糖蛋白gp120 与CD4+细胞结合，CD4属于gp120的受体。人类CD4+细胞则主要为辅助性T细胞（Th），在HV-1进入到辅助性T细胞之后，会随着病毒而不断的被复制，借助于细胞凋亡机制而出现破坏，引发体内Th/Ts比例倒置，从而出现严重的免疫缺陷，显著提高机体的感染及某些肿瘤易感性，最终导致患者死亡。目前AIDS传染研究，已经证实血液、精液以及宫颈分泌物均能够传染，传染途径则包括：性接触传播、经血液传播以及母婴传播。针对这些情况，想要对患者实施早期诊断，有效控制传播发展，则必须实施有效的临床检测。目前患者临床检测中主要方式为G试验，即对患者真菌细胞壁成分BDG实施有效检测，联合CD4+T淋巴细胞计数检测，更有助于提高患者的临床检测阳性率，从而及早发现AIDS患者，实施有效治疗及控制传染。

G试验主要用于检测真菌细胞壁成分BDG，人体吞噬细胞在吞噬真菌后，将持续释放该物质，从而提升血液及体液中的BDG含量，但是针对浅部真菌感染而言，则不会存在类似现象。G试验主要适用于除新生隐球菌和接合菌之外的所有深部真菌感染早期诊断，尤其是针对念珠菌、镰刀菌、毛抱子菌等具有明显诊断效果，但该方式无法辨别和确定菌种。相关研究认为，G试验对于恶性血液病患者合并IFD而言，其诊断敏感性以及特异性均较高，该方法对于侵袭性真菌而言，是一种高效的非培养检测方式和手段［3］。

对于AIDS患者而言，其免疫功能具有严重缺陷，该类患者需要实施终身治疗［4］。T淋巴细胞中，起辅助诱导作用的CD4+T淋巴细胞进行性减少，免疫功能下降，而IFD发生率显著提升［5-7］。研究认为，CD4+T淋巴细胞计数是目前条件下用于监测AIDS感染的重要参数，CD4+T淋巴细胞水平同IFD之间具有紧密关系，同时也与AIDS合并IFD的发生情况以及存活时间等具有密切关系［8-13］。由此可以明显看出CD4+T淋巴细胞在AIDS合并IFD检测及预后评估中具有重要检测价值。

G试验对IFD早期诊断具有重要参考价值，但现实中存在假阳性以及假阴性问题，对该检测方法的推广应用造成了制约［14-15］。真菌感染与病原菌的毒力以及患者免疫水平存在密切关系，所以CD4+T淋巴细胞计数能够作为AIDS合并IFD的重要预测指标。本研究认为，G试验联合CD4+T淋巴细胞计数，对AIDS合并IFD具有较高的诊断能力，可以作为AIDS患者IFD抢先治疗的依据。

本次研究中，G试验对IFD组患者的临床诊断阳性率为74.19%，阴性率为25.81%，其敏感度低主要为AIDS患者的新生隐球菌感染率比较高，并且和后壁荚膜使实验出现假阴性有一定相关性，本次患者临床诊断过程中2例被诊断为新生隐球菌阳性。患者的新生隐球菌具有厚荚膜，很难进行BDG释放入血，对患者实施磺胺类药物抗感染治疗，并且对其检测BDG值是在临界范围上，所以可以确定患者为假阴性结果。由本临床研究结果可以明显看出，G试验联合CD4+T淋巴细胞计数在AIDS合并IFD临床诊断中的阳性率显著高于单纯的G试验检测，G试验联合CD4+T淋巴细胞计数对于确诊AIDS合并IFD具有极高的价值，值得推广应用。但也要注意对患者的临床确诊越早越好，实施G试验诊断时会受到多种因素的影响，同时也无法避免因为患者真菌感染导致的假阴性情况，对其临床诊断率具有一定的影响，从而影响诊断准确率以及治疗效果。因此可以结合多种检测方式共同诊断，以提高患者的早期诊断准确率，并及时对患者实施有效治疗。

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Significance of the Detection of （1，3）-β-D Glucan and CD4+T Lymphocyte Count for the Diagnosis of Invasive Fungal Disease in Patients with AIDS

DU Liu-en

【Key words】（1，3）-β-D glucan； CD4+T lymphocyte count； Acquired immune deficiency syndrome（AIDS）； Invasive fungal disease（IFD）

【Abstract】Objective：To discuss the diagnosis significance of the detection of （1，3）-β-D glucan （BDG） and CD4+T lymphocyte count for the diagnosis of invasive fungal disease （IFD） in patients with Acquired Immune Deficiency Syndrome （AIDS）.Method：Patients with AIDS suspected to suffer from IFD treated in our hospital were selected as the study objects，G test and CD4+T lymphocyte count were performed and detected simultaneously. According to the diagnosis standard of IFD， the patients were divided into IFD group of 31 cases and non-IFD group of 28 cases.G test for diagnosing IFD was analyzed for sensitivity and specificity. The results of CD4+T lymphocyte count and the positive rate of different detection methods of two groups were analyzed.Result：The CD4+T lymphocyte count in IFD group was significantly lower than that in non IFD group，the difference was statistically significant（P＜0.05）；G test results showed that the positive rate of IFD group was 74.19%， and the positive rate was 90.32%，G test results showed that the positive rate was 17.86% in the non IFD group，and the positive rate was 10.71%，the differences were statistically significant（P＜0.05）. Conclusion：G test combined CD4+T lymphocyte count has great value in diagnosing IFD with AIDS，it is worthy of generalizing and applying.

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.16.010

*基金项目：肇庆市科学技术局课题（201504030808）

通信作者：杜榴恩

收稿日期：（2015-12-08） （本文编辑：周亚杰）