树突细胞因子诱导的杀伤细胞治疗老年中晚期食道癌的效果及对外周血淋巴细胞亚群的影响

2016-06-30曲颜丽

中国老年学杂志 2016年11期

关键词：食道癌亚群外周血

周　宁　曲颜丽　唐　勇

(新疆医科大学附属肿瘤医院消化科，新疆　乌鲁木齐　830000)

树突细胞因子诱导的杀伤细胞治疗老年中晚期食道癌的效果及对外周血淋巴细胞亚群的影响

周宁曲颜丽唐勇

(新疆医科大学附属肿瘤医院消化科，新疆乌鲁木齐830000)

〔摘要〕目的探讨树突细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)治疗老年中晚期食道癌的效果及对外周血淋巴细胞亚群的影响。方法随机抽取该院收治的老年中晚期食道癌患者8例，分别采集患者外周血单个核细胞，在体外诱导产生DC细胞和CIK细胞，分3次回输给对应的患者，观察治疗效果，分别在第1次回输1 w前以及每次回输结束后1个月采集患者的外周血，用流式细胞仪检测患者淋巴细胞亚群的变化状况。结果经过治疗，有4例完全缓解，3例部分缓解，1例出现轻微体温升高；同时各患者外周血淋巴细胞亚群各指标均明显好转，以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2变化最为显著。结论采用DC-CIK细胞方法治疗老年中晚期食道癌效果显著，可有效改善患者免疫抑制状态，提高机体免疫效应，同时淋巴细胞亚群中各指标明显好转，无严重不良反应。

〔关键词〕树突细胞因子诱导的杀伤细胞；中晚期食道癌；淋巴细胞亚群

目前治疗食道癌的方法成效并不显著，药物对肿瘤细胞和正常细胞的分辨能力差，容易产生各种不良反应，而且肿瘤细胞极易产生毒性，损害机体的免疫功能。最大程度保存患者免疫细胞的活性是治疗老年中晚期食道癌的核心。过继细胞治疗中晚期食道癌中最具代表性的就是树突细胞(DC)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)。有研究〔1〕指出应用DC或者CIK治疗老年食道癌能起到免疫性和非免疫性双重抵抗肿瘤细胞的功效。本研究旨在探究DC-CIK细胞治疗老年中晚期食道癌的效果及对外周血淋巴细胞亚群的影响。

1对象与方法

1.1一般资料选取新疆肿瘤医院消化内科收治的老年中晚期食道癌患者8例，男5例，女3例，年龄64～75 岁，TNM分期：Ⅲ期3例，Ⅳ期5例。纳入标准：①所有经电子胃镜检查活检明确病理组织学诊断确切，食道钡餐、浅表淋巴结彩超及胸部CT等检查诊断为中晚期食道癌；②治疗前1个月内未行放化疗及免疫治疗；③患者年龄≥60岁，预计生存期>5个月；④无严重的细菌、病毒感染；⑤患者本人和家属均知情同意；⑥KPS评分〔2〕≥60分。排除标准：①正在接受放疗、化疗或其他全身性抗肿瘤治疗方式者；②同时有其他恶性肿瘤或传染性疾病者；③经过手术，伤口并未完全愈合者；④对生物制品过敏者；⑤实验指标异常者。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂倒置显微镜(日本Olympus公司)；流式细胞仪(型号为FACS Vantage SE，美国Thermo公司)；生物安全柜和细胞培养箱(美国BD公司)；GT-T551(日本Takara公司)；临床使用标准rGM-CSF、LTS1077、和rIL-4(天津灏洋生物制品有限公司)；淋巴细胞分离液(杭州四季青生物工程材料有限公司)；人血清蛋白(美国Qiagen公司)。

1.2.2DC和CIK细胞分离及培养方法①利用细胞分离机在无菌的环境下取患者全血50～60 ml，加入淋巴细胞分离液来制备单个核细胞；②在37℃恒温条件下，CO2含量为5%左右培养箱中培养单个核细胞大约3 h，收集培养箱中的悬浮细胞，准备培养CIK细胞；③取贴壁细胞加入白细胞介素(IL)-4 500 U/ml、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)1 000 U/ml，放在37℃恒温以及饱和湿度条件下，CO2含量约5%的培养箱中培养4 d，更换培养液，加入肿瘤坏死因子(TNF)-α 100 ng/ml培养3 d〔3〕，悬浮的成熟DC细胞备用；④将步骤②中收集到的悬浮细胞按照1×106/ml的密度种在培养瓶中，加入IL-4 2 500 U/ml、干扰素(IFN)-γ 100 ng/ml，24 h后加入Anti-CD3 单抗50 ng/ml〔4〕，在第11天收集成熟的CIK细胞备用。

1.2.3DC-CIK治疗方法所有患者均在采集细胞后的第7、9、11、13天分6次予1 ml DC细胞液进行相应注射，分别为双侧锁骨下、双侧腋下以及双侧腹股沟区，每位患者注射的总DC细胞数为3×107～10×107，在采集细胞后的第11、13天静脉回输2×109～15×109的CIK细胞。

1.3检测指标分别在细胞回输治疗前1 w和治疗后1个月抽取患者外周血2 ml(需要进行抗凝处理)，采用流式细胞检测仪测定淋巴细胞的免疫功能指标： CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2的动态变化。同时对本组患者治疗后出现的异常体征如恶心、呕吐、体温升高、头晕目眩等进行分析。

1.4疗效评定标准两组患者治疗1个月后行CT扫描诊断，评估疾病状态和治疗效果；3个月后再一次进行评估，之后每3个月复查一次。在此过程中，如果患者出现异常反应，随时复查。按照肿瘤疗效评价标准〔5〕分为：完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、病情稳定(SD)、病情进展(PD)。

1.5统计学分析采用SPSS18.0软件进行χ2、t检验。

2结果

2.1疗效评价本组患者DC-CIK细胞的治疗效果(CR 4例、PR 31例、SD 0例，PD 1例)明显优于传统治疗效果(CR 1例、PR 1例、SD 2例、PD 4例；χ2=38.56,2.486,4.861,3.568；均P<0.05)。

2.2治疗前后淋巴细胞亚群指标变化情况外周血淋巴细胞亚群各指标治疗前和治疗3个疗程后变化显著(P<0.05)。见表1。

2.3不良反应8例患者经过DC-CIK治疗后，1例患者出现体温升高现象，经物理降温，短时间内体温恢复正常，无其他严重不良反应发生。

表1　外周血淋巴细胞亚群各指标变化±s)

3讨论

食道癌起病隐匿，多数患者就诊时已是中晚期。尽管治疗食道癌的方式不断改进，但是食道癌患者5～10年存活率仍在25%以下，通过手术治疗后的复发率高达约65%。有资料称〔6〕，DC疗法是目前一种很有前途的恶性肿瘤治疗手段。有文献报道〔7〕，使用DC疫苗治疗12例胃肠道恶性肿瘤患者后，患者病情均有明显的好转。还有研究表明〔8〕，DC细胞是已知的功能最强大的抗原递呈细胞，能分泌出很多种细胞因子，诱导T细胞产生毒性，增强B细胞的增殖活性，激活淋巴细胞的免疫应答系统功能，对肿瘤免疫发挥至关重要的作用。

CIK细胞是在体外经过多种培养细胞因子激活后所获得的对肿瘤细胞具有巨大杀伤力的T细胞，具有非主要组织相容性复合体(MHC)限制性、高效、广谱杀死肿瘤细胞活性的免疫作用，它的主要作用机制是杀伤肿瘤细胞的同时增强淋巴细胞增殖、激活淋巴细胞免疫功能等。在恶性肿瘤的临床研究中发现，CIK细胞可以较好地控制疾病的发展和癌细胞的转移。理论上，DC细胞联合CIK细胞可以产生非特异性免疫和特异性免疫的双重抵抗肿瘤细胞作用。本研究结果表明， DC-CIK细胞联合治疗中晚期食道癌效果显著，无明显不良反应，淋巴细胞亚群各指标也有明显好转，其中以CD3+CD4+CD25+、Th1和Th2变化最为显著，可以适当推广。文中不足之处在于样本选取稍少，而且DC和CIK细胞培养过程中，受到很多限制。

4参考文献

1蔡艳荣.DC-CIK联合化疗在晚期肾癌患者中的综合应用价值〔J〕.实用癌症杂志,2015；30(4):559-62.

2谭洁,王彬,何志洁,等.自体DC-CIK细胞治疗晚期肾细胞癌的疗效〔J〕.中国肿瘤生物治疗杂志,2013；20(6):711-6.

3殷先尧,郑美娟,徐元宏.T细胞亚群与慢性丙型肝炎病毒相关性分析〔J〕.安徽医科大学学报,2014；49(3)：327-30.

4张国庆，焦顺昌，温新宇，等.大肠癌患者与正常健康人淋巴细胞表型差异分析〔J〕.细胞与分子免疫学杂志，2012；28(7)：735-7.

5何立香,蒋思卿,彭大为.DC-CIK治疗恶性肿瘤的研究进展〔J〕.医学综述,2013；19(1):59-62.

6罗芳,石君.术后辅助化疗联合免疫治疗对结肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群数量的影响〔J〕.临床合理用药杂志,2015；8(2C):111-2.

7张国庆，赵宏，温新宇，等.大肠癌患者化疗前后淋巴细胞亚群变化〔J〕.中国医学科学院学报,2013；35(2):155-60.

8杨蕾,庄芸,钱锡峰,等.老年免疫性血小板减少症患者外周血T淋巴细胞亚群检测及其临床意义〔J〕.临床血液学杂志,2015；(3):384-8，391.

〔2015-10-15修回〕

(编辑滕欣航)

基金项目：新疆医科大学科研创新基金资助项目(No.XJC201384)；新疆维吾尔自治区自然科学基金(No.2013211A067)