美国贝克曼库尔特IMMAGE800特种蛋白仪性能评价

杨娟娟

(临汾市人民医院检验科，山西临汾 041000)

·临床研究·

美国贝克曼库尔特IMMAGE800特种蛋白仪性能评价

杨娟娟

(临汾市人民医院检验科，山西临汾 041000)

摘要:目的通过评价美国贝克曼库尔特IMMAGE800特种蛋白仪的性能，提高实验室的检测能力和效率，为医学实验室认可提供可靠试验数据。方法参照CLSI对IMMAGE800特种蛋白仪的精密度、准确度、线性试验、携带污染率及参考范围进行检测。结果IMMAGE800特种蛋白仪8个项目的批内精密度变异系数、总不精密度变异系数小于评判标准，准确度验证小于厂家声明，抗链O(ASO)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、IgA、IgG、IgM呈线性而C3、C4呈非线性。各测定项目的携带污染率均小于0.05%，属于可接受范围，参考范围验证通过。结论IMMAGE800特种蛋白仪具有良好的准确性、重复性、携带污染率小，参考范围符合本实验室，完全可以满足临床实验室要求。

关键词:精密度；准确性；线性试验；携带污染率；参考范围

IMMAGE800特种蛋白仪是一款自动化程度高、操作简便且故障率较低的仪器，通过速率散射比浊法进行测量,根据医学实验室认可的标准，需进行IMMAGE800的检测系统进行性能评价。检测系统性能评价是医学实验室认可的重要内容，检测系统未经评价和验证直接应用有可能会降低其性能的可靠性和有效性[1]。仪器的分析性能达到临床可接受标准后才可用于患者的检测[2]。

1资料与方法

1.1仪器美国贝克曼库尔特IMMAGE800特种蛋白仪。

1.2试剂IMMAGE800特种蛋白仪所用试剂为配套试剂，试剂批号为：抗链O(ASO)，M408008；类风湿因子(RF)，M501021；C反应蛋白(CRP)，M410280；IgA，M409246；IgG，M408071；IgM， M404011；C3，M309352；C4，M409210；血清学质控品批号为M407012；蛋白质控品批号为M407012；定标液CAL1批号为M312002，定标液CAL5 批号为M402019。

1.3标本标本为本院门诊和住院患者的新鲜静脉血清(无抗凝剂负压管3～5 mL)，离心3 000 r/min离心5 min，标本无溶血、黄疸和脂血，含相应检测项目高、中、低3个水平。BECKMAN原装质控及定标液。对仪器进行常规维护保养，每日室内质控均在控。

1.4方法

1.4.1精密度验证取新鲜患者血清包含高、中、低值的混合血清，每天重复测定4次，连续测定5 d，计算均值(M)、批内和批间总不精密度[3]。按照卫生部临床检验中心全国室间质量评价计划特种蛋白项目25%的可接受范围，结合实验室的自身情况，以批内和批间均小于1/4总可允许范围为判断标准，评价IMMAGE800特种蛋白仪8个项目的精密度[4-5]。

1.4.2准确性验证按照CLSI EP15-A2文件要求，使用已知浓度的标准物质进行准确性验证[6]。每天重复测定2次，连续测定5 d。根据10次测量值计算均值、标准差及相对偏差的绝对值。与厂家声明比较，校准品测定均值与标示值比较，相对偏差小于或等于10%，则认为试验数据可以证实准确度，否则不能够证实。

1.4.3线性试验分别取ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4测定接近预期上限的高值血清各一份，分别按100%、80%、60%、40%、20%的比例进行稀释，每个稀释度重复测定4次，将实测与理论值比较(偏离小于10%)，实测值作为Y值，理论值作为X值，作X-Y坐标图，对试验数据进行多项式回归分析处理，利用拟合的二次多项式系数b2，和3次多项式模型系数b2、b3与0比较，P>0.05时，差异无统计学意义，说明线性良好，P<0.05时，差异有统计学意义，属于非线性。

1.4.4携带污染率试验高值标本对低值标本的污染，取RF为1 180 U/mL的高浓度标本，及低浓度标本RF为24 U/mL，制备成5份标本。按照低高交叉的顺序重复测定3次(H1、L1、H2、L2、H3、L3、H4、L4、H5、L5)，按下面公式计算污染率：Ki=(CiL-C0)/3×CH，标本针携带污染率为K1到K5的平均值，C0为低值标本测定5次的均值，CH为高值标本测定5次的均值，CiL为低浓度标本序号。以低于0.05%为符合要求。

1.4.5参考范围验证参照CLSI C28-A2文件中提供的方法，选择20例正常健康成人标本，在保证仪器运行良好的情况下随机测量ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4[7]，对数据进行分析，计算r值(落在参考范围内的标本数/总的试验标本数)，要求r>0.9，若r<0.9，重新选择20例参考人体，计算r值，r>0.9则可以接受，若r<0.9重新检查操作系统，如果操作没有问题，则认为该参考区间不适合于本实验室，需要重新建立参考区间。

2结果

2.1精密度验证ASO、RF、CRP、IgM、IgA、IgG、C3、C4批内精密度与总不精密度均小于1/4总可允许范围，按照卫生部临床检验中心全国室间质量评价计划特种蛋白项目25%的可接受范围(即实验室的判断标准为1/4×25%=6.25%)，8个项目均符合要求。见表1。

表1　　不同标本精密度验证结果

2.2准确性验证校准品CAL1测定的IgM、IgA、IgG、C3、C4的相对偏差分别为1.03%、1.14%、1.89%、1.50%、1.03%，小于厂家声明(小于10%)，校准品CAL5测定ASO、RF、CRP的相对偏差分别为1.58%、1.00%、2.87%，远远小于厂家声明。所以准确度通过验证。见表2。

2.3线性范围验证患者高值血清ASO 为5 420 U/mL，进行100%、80%、60%、40%、20%稀释，重复测定四次，测定值(Y)与计算值(X)作图，计算r2值为0.9 943，b2为-0.198，三次多项式模型系数b2、b3分别为0.034、-0.018，与0比较，差异无统计学意义(P>0.05)；方法同上，患者高值血清RF为3 312 U/mL ，r2值为0.9 938；患者高值血清CRP为204 mg/L，r2值为0.991 2；IgA高值29.40 g/L，r2值为0.990 9；IgG高值为68.7 g/L，r2值为0.991 8 ；IgM高值为6.77 g/Lr2值为0.979；二次多项式系数b2，三次多项式模型系数b2，b3与0比较，差异无统计学意义(P>0.05)；判断以上项目检测系统均呈线性。C3高值为2.54 g/L，r2值为0.930 9；C4高值为0.87 g/L，r2值为0.879；C3、C4项目r2<0.95，呈非线性。见表3。

表2　　各标本准确度验证结果

表3　　各标本线性范围验证结果

2.4携带污染验证取高浓度标本及低浓度标本进行测定，计算高浓度标本对低浓度标本的污染率。高浓度标本浓度为1 180 U/mL，低浓度标本的浓度为24 U/mL，按照低高交叉的顺序进行测定，计算携带污染率。高值测定的平均值为1 208 U/mL，低值测定的平均值为24 U/mL。按照公式计算污染率：Ki=(CiL-C0)/3×CH。加样针的携带污染率为0.025%，小于0.05%为符合要求。

2.5参考范围验证随机抽取健康成人20例，进行ASO、RF、CRP、IgA、IgG、IgM、C3、C4测定，测定结果与成人参考范围进行对比，计算R值(R值为落在参考范围内的标本数/总的试验标本数)ASO、RF、CRP、IgA、IgG、IgM测定的20组数据均落在参考值范围内R值均为1.0；而C3有2组数据低于参考值范围，R值为0.9；C4有1组数据低于参考值范围，R值为0.95，所有结果均符合要求。见表4。

表4　　成人参考范围结果验证

3讨论

随着检验技术的不断发展、项目的不断增加、仪器及试剂品种繁多，检验质量的控制变得越来越重要。目前，国内外对于医学实验室质量管理要求主要是以美国临床实验室改进法案修正案(CLIA′88)、美国病理学家协会(CAP)的实验室认可计划以及国际标准化组织制定的标准ISO15189医学实验室认可为主[8]。医学实验室认可管理强调临床实验室必须有计划地定期对实验室内的检测系统参数进行验证[9]。本实验按照国际标准化组织ISO15189质量体系认可要求，通过实验设计，对已使用8年的IMMAGE800特种蛋白仪进行验证。

检测系统中最主要、最基础的分析性是精密度和准确度。精密度是首先完成的评价，在重复性良好的情况下完成其他试验，否则评价缺乏基本保证[10]。CLIS为检测系统的不同分析性能提供了各种评价验证方案，EP15主要用于评价与验证临床实验室定量分析方法的精密度和准确度，方法简单、方便，适用于日常和单个医学实验室的验证评价[11]。参照CLIS EP15-A2文件，对IMMAGE800特种蛋白仪测试的8个项目进行精密度性能分析，结合试验室自身条件，将评判标准按照卫生部临床检验中心室间质量评价特种蛋白项目的可接受范围1/4标准执行。试验结果，8个项目的批内精密度和总不精密度均小于评判标准，精密度符合临床要求。

准确度是检测系统中另一项非常重要的性能评价指标，是其他性能评估试验的基础。按照CLSI EP15-A2文件要求，使用已知浓度的标准物质进行准确性验证。结果显示，IMMAGE800特种蛋白仪上的8个项目的相对偏差远远小于厂家声明，准确度性能完全符合临床要求。

按照EP6-A方案，采用多项式回归方法评价仪器的线性，结果显示ASO、RF、CRP、IgG、IgM、IgA 6个项目在给定的范围内呈线性。而C3、C4呈非线性，原因可能为：C3、C4的检测范围较小，稀释增加了基质效应，故在日常工作中，C3、C4稀释后的结果是不可靠的。

在临床工作中，高值标本对低值标本的携带污染不容小觑，IMMAGE800特种蛋白仪标本针携带污染率为0.025%，小于0.05%，可满足临床需求，不影响加样顺序。

由于种族不同、区域不同、人群分布不同、人群生活习惯不同，故应建立适合本实验室的参考值范围；首先根据说明书的健康成人参考值范围进行验证，随机选择20位健康成人，验证参考值范围；经验证，参考值符合要求。故认为可以使用厂家的参考值范围。

通常一个检测系统应用到临床之前，实验室必须对其进行性能验证，最主要的性能指标包括精密度、准确度、检测线性范围以及参考范围是否符合当地人群[12]。IMMAGE800虽然不属于新的检测系统，但因为使用年限长达8年，故也需要进行性能验证。根据验证结果，证明该仪器在按时按需进行保养情况下，可保持良好的工作状态。

参考文献

[1]Ledue TB,Collins MF,Ritchie RF.Development of immunoturbidimetric assays for fourteen human serum proteins on the Hitachi 912[J].Clin Chem Lab Med,2002,40(5):520-528.

[2]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient sample;approved guideline[S].EP9-A,NCCLS,1986.

[3]Füzéry AK,Levin J,Chan MM,et al.Translation of proteomic biomarkers into FDA approved cancer diagnostics:issues and challenges[J].Clin Proteomics,2012,10(1):1-14.

[4]冯仁丰．临床检验质量管理技术基础[M]．5版.上海：上海科学技术文献出版社，2003．

[5]叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程[M]．3版．南京：东南大学出版社，2006．

[6]魏昊，丛玉隆，中国实验室国家认可委员会技术委员会医学分委会．医学实验室质量管理与认可指南[M]．北京：中国计量出版社，2004．

[7]程文琴，章复湘，张如.医院传染病信息管理系统的应用研究[J]．中华医院感染学杂志，2012，22(14)：3107-3109．

[8]李萍．临床实验室质量和能力要求[J]．中华检验医学杂志，2007，30(8)：958-960．

[9]郭拥军，李大为，文江平，等．罗氏Modular P-800生化分析仪检测6种血清特种蛋白性能评价[J]．国际检验医学杂志，2011，32(11)：1220-1221．

[10]韩静，胡梅，杨桂花，等．BNⅡ特种蛋白仪测定IgG、IgA和IgM性能评价[J]．国际检验医学杂志，2013，34(10)：1292-1294．

[11]张莉，吴炯，郭玮，等．医学检验检测系统应用前的性能评价[J]．检验医学，2006，21(6)：560-563．

[12]张葵．定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法[J]．临床检验杂志，2009，27(5)：321-323．

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.044

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)10-1402-03

(收稿日期：2016-01-27)