芩榆散治疗鸡人工感染大肠杆菌病试验

朱广双，季慕寅，萧　晟，王本忠，张海燕(芜湖职业技术学院　生物工程学院，安徽　芜湖　241003)



芩榆散治疗鸡人工感染大肠杆菌病试验

朱广双，季慕寅，萧晟，王本忠，张海燕
(芜湖职业技术学院生物工程学院，安徽芜湖241003)

摘要:目的:探讨芩榆散对鸡人工感染大肠杆菌病的治疗效果。方法:选取200羽14日龄罗曼公鸡，其中40只为空白对照组，治疗试验选取160羽接种大肠杆菌O1造病，次日将发病鸡随机分为4组，其中第1 －3组分别为高、中、低剂量的药物治疗试验组，分别在饲料中添加3.0%、1.5%和0.75%的芩榆散，第4组为阳性对照组，不用药，第5组为空白对照组，各组连续处理5 d，第6 d统计各组的有效率。结果:高剂量组芩榆散的痊愈率(67.5%)和有效率(85%)最高，均显著高于阳性对照组。结论:该散剂可用于鸡大肠杆菌病的治疗。

关键词:鸡;人工感染;大肠杆菌病;芩榆散;痊愈率;有效率

鸡大肠杆菌病是由致病性血清型大肠杆菌引起的各种疾病的总称，其主要的病型有胚胎和幼雏的死亡、败血症、气囊炎、心包炎、输卵管炎、肠炎、腹膜炎和大肠杆菌性肉芽肿等［1］。由于该病常和霉形体病合并感染，又常继发其他传染病(如新城疫、禽流感惑、传染性支气管炎、巴氏杆菌病等)，故该病治疗十分困难。目前本病已成为危害养禽业的重要传染病，常造成巨大的经济损失。因此，应引起人们对鸡大肠杆菌病的足够重视。抗生素的应用对本病的治疗虽然起到了一定作用，但使得大肠杆菌对其产生了抗药性，抗生素的敏感性下降，同时，也产生了药物残留问题，直接影响肉鸡产品安全卫生与出口贸易［2］。

目前，人们开始重新重视传统中药，中药具有残毒低，能够调节机体的免疫机能和不易产生耐药性等优点［3］，在畜禽传染病防治中，发挥着越来越为重要的作用。清热燥湿、涩肠止泻的中药种类繁多，可以组方治疗鸡大肠杆菌病，来取代目前以抗生素为主的治疗鸡大肠杆菌的办法，解决抗生素药物残留和抗药性的问题，生产无公害、绿色农产品。本试验通过人工诱发鸡大肠杆菌病，然后用芩榆散进行治疗，旨在确认该药对鸡大肠杆菌病的疗效，为临床应用提供理论依据。

1　材料与方法

1.1试验药物

黄芩、地榆、老鹳草和地锦草四味中药，由芜湖同仁堂药房购入，按照比例粉碎、混合，加工制备，而得芩榆散方剂。

鸡大肠杆菌O1分离株，由南京农业大学预防兽医学教研室提供。将菌种接种普通营养平板，37℃培养24 h复壮后，挑选典型生长菌落接种于普通液体培养基，37℃摇动培养8 h。通过麦氏比浊法测定菌液A610的OD吸光度值和预试验结果，确定攻毒的菌液浓度为1×107CFU/mL。

1.3方法

1日龄罗曼公鸡(购自南京汤泉农垦种鸡场) 200羽，常规饲养至14日龄时，随机分为5组，每组40羽。第1～4组均用大肠杆菌O1攻毒，每羽口服、肌肉注射各0.5 ml菌液、第二天鸡群普遍出现症状时，第1～3组为用药高、中、低剂量组，分别在日粮中添加3.0%、1.5%、0.75%芩榆散;第4组为阳性对照组，人工造病，且日粮不添加药物;第5组为空白对照组，隔离饲养，不攻毒，日粮也不添加药物［4］。各组连续处理5 d，第6 d统计疗效。

1.4观察指标

每天观察鸡的临床症状表现，记录死亡只数;剖检死亡病鸡，取病料进行病原分离培养、鉴定。病死鸡用0.1%新洁尔灭溶液浸泡后，无菌术打开腹腔，采集肝脏、心包液等病料接种普通营养肉汤，37℃培养24 h后，接种麦康凯琼脂平板培养基，继续培养18～24 h，挑取可疑菌落涂片，革兰氏染色，镜检，接种营养肉汤进行纯培养，24 h后转接普通营养琼脂斜面，进一步接种伊红美蓝琼脂、SS琼脂和三糖铁斜面培养基进行培养，取纯培养物分别作硫化氢试验、M－R试验、吲哚试验、甲基红试验、V－P试验、枸橼酸盐试验、动力试验［5］;并接种葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇等生化管进行生化鉴定。

1.5药效判定

按如下标准判定疗效:

痊愈:鸡只精神活泼，饮食完全正常。

显效:鸡只存活，但有临床症状，精神及饮食未完全正常。

成都市几年前率先开始在中小学推广“中华经典诵读”活动，按照“重在潜移默化，贵在扎实持久”的原则，将诵读活动逐步融入中小学生的日常学习生活中。在此基础上，成都市把图书配备、电子图书馆建设等作为工作重点之一，各学校也加强班级图书角、学校图书室的建设，带动市级、县级尤其是社区图书馆的开放利用。这些措施，为建设书香成都、书香校园提供了基本的保障。

无效:鸡只死亡，剖检呈典型的鸡大肠杆菌病病变。

保护率或有效率=存活羽数÷试验样本数，痊愈率=痊愈羽数÷试验样本数，显效率=显效羽数÷试验样本数，无效率=无效羽数÷试验样本数。

1.6数据处理

用生物学统计方法检验、比较各组有效率的差异显著性。

2　结果与分析

2.1造模结果

鸡群在接种大肠杆菌13 h后开始出现症状，主要表现为精神沉郁，食欲下降或废绝，羽毛蓬松，两翼下垂，头颈缩入，闭眼昏睡，不愿活动，严重者卧地不起，大部分鸡只排白色水样稀粪，24 h后普遍出现上述症状，28 h后开始出现死亡，剖检的病变特征为脾肿大、肝充血肿大、质脆易碎、浆膜增厚、有大量渗出物，心包腔中有大量纤维素性渗出物，肠系膜出血。

分离菌株在营养琼脂上形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明灰白色菌落;在麦康凯琼脂上形成红色菌落;在伊红美蓝琼脂上产生黑色金属闪光的菌落;在SS琼脂上生长较差，呈红色;三糖铁培养基产酸产气，初步鉴定是大肠杆菌。鉴别试验结果见表1，生化试验均呈阳性;硫化氢试验出现黑色沉淀，呈阴性; MR试验呈阳性;吲哚试验呈阳性;甲基红试验呈阳性; V－P试验呈阴性;枸橼酸盐试验呈阴性;动力试验呈阳性，表明分离菌株为大肠杆菌［6］。

表1　分离菌株的生化试验结果Table 1　 Biochemical test results of isolated strains

表1分离菌株生化试验结果显示，经临床症状、剖检变化和细菌分离鉴定，证明鸡人工感染大肠杆菌病造模试验成功。

2.2治疗结果

芩榆散治疗试验鸡大肠杆菌病效果详见表2。结果显示，与阳性对照组相比，药物试验组鸡群的临床症状均呈现不同程度的减轻，仅有部分鸡只出现典型临床症状和死亡。芩榆散高剂量组的有效率(85.0%)、痊愈率(67.5%)为最高，其次为芩榆散中剂量组(77.5%)、(62.5%)，这2组的有效率显著高于芩榆散低剂量组(65.0%) (P＜0.05) ;各组之间的显效率差异不显著(P＞0.05)。

表2　芩榆散治疗试验性鸡大肠杆菌病效果Table 2　 The curative effect of Qinxian powerd to control chicken E.coil

3　结论与讨论

鸡大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌引起的一种常见疾病，常呈急性败血症，发病率和死亡率均较高，对养禽业危害严重。氟苯尼考、恩诺沙星是目前临床上(除头孢类抗生素)防治禽源大肠杆菌的主要抗菌药，但对氟苯尼考、恩诺沙星的相关研究相对较少［7］，耐药性调查［8］结果表明随着这2种药物在临床上的大量使用，大肠杆菌对氟苯尼考、恩诺沙星的耐药性逐年增加，这2种药物的疗效已大大降低。抗生素的广泛使用及滥用很容易使细菌产生耐药性，细菌耐药株的产生对于疾病的防治造成了极大的困难。

中兽医学认为，鸡大肠杆菌病按中兽医理论类属于湿热壅积肠道的里热证、泄泻证，大多由外感暑湿、疫毒之邪，或饮食不洁，湿热郁结肠内，胃肠受损，运化失常，湿热内生，致使气血阻滞，湿郁热蒸，肠胃气化被阻，气血与暑湿热毒博结，造成湿热泄泻，治宜健脾补中，清热解毒，燥湿止痢［9］。芩榆散是依据中兽医学理论，同时结合腹泻病的特点，以治本、治标、扶正祛邪为原则，芩榆散由黄芩、地榆、老鹳草和地锦草等四味中药制成。设计以清热燥湿的黄芩为主药、以凉血止血、涩肠止泻的地锦草、地榆、老鹳草等为佐药，方中黄芩［10］、地锦草［11］对大肠杆菌均有较好的抑制效果;地锦草［11］、老鹳草［12］和地榆［13］，凉血止血、涩肠止泻，可以修复胃肠道损伤、溃疡，常用于肠炎的治疗。以上各味单方药合用组方，具有清热燥湿、收敛止泻功效和较强的抗菌作用，抗菌机理与抗生素治疗类似，干扰细菌细胞壁合成，抑制细菌核酸合成，抑制细菌生长［14］，可以用于治疗鸡大肠杆菌病。

据报道［15］，对黄芩抗菌作用的研究大多局限于体外试验法，体外试验采用平皿内试验物稀释法。本试验采用体内试验方法研究了芩榆散的抗菌作用，治疗试验中芩榆散高剂量组的保护率为最高，将攻毒量的致病菌注入雏鸡体内，再将药物以高中低三组不同剂量拌料投给已感染的雏鸡，观察其保护情况，结果表明高剂量组的治疗效果最好，说明芩榆散可以用于治疗禽病。本试验研究为生产无公害、绿色禽产品提供条件，在治疗鸡大肠杆菌病方面具有较好的推广价值。

本试验结果表明，芩榆散可有效降低人工诱发的鸡大肠杆菌病的死亡率，高剂量组的治疗效果最好，略高于中剂量组，显著高于低剂量组和感染对照组。芩榆散中剂量组也有显著的治疗效果，与高剂量组差异不显著，结合生产成本和饲料营养结构考虑，可选用中剂量治疗鸡大肠杆菌病。

参考文献:

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［5］农业部兽药审评委员会办公室.兽药试验技术规范汇编［M］.北京:农业部兽药审评委员会办公室，2001: 25.

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［12］范红艳，郭建鹏，于海玲.老鹳草提取物对消炎痛型及利血平型胃溃疡小鼠溃疡指数的影响［J］.延边大学医学学报，2006，29(4) : 256－258.

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(责任编辑:马世堂)

Experiments of Treating Artificial Infection of Escherichia Coli with Qinyu Powder in Chickens

ZHU Guang－shuang，JI Mu－yin，XIAO Sheng，WANG Ben－zhong，ZHANG Hai－yan
(College of Bioengineering，Wuhu Institute of Technology，Wuhu 241003，China)

Abstract:The objective of the experiment is to study the effect of Qinyu San powder on chicken injected by Escherichia coli.Method: Two hundred 14－age chickens were divided into 5 groups.After injected by Escherichia coli，chicken in group 1－4 were fed diets including 3.0%，1.5%，0.7% and 0% Qinyu San，respectively.Group 5 was the control group which was not injected by bacteria.Result: The cure rate and efficacy in the 3.0% Qinyu San group was significantly higher than that of the 0% group.Conclusion: Qinyu San powder might be an strategy for controlling chicken colibacillosis.

Key words:Qinyu San powder; Chicken; Escherichia coli; Infection

中图分类号:S831.7

文献标识码:A

文章编号:1673－8772(2016) 02－0006－04

收稿日期:2016－01－07

基金项目:安徽省质量工程项目食品技术人才实训中心校企合作实践教育基地项目(2013sjjd036)。

作者简介:朱广双(1975－)，男，安徽省芜湖市人，硕士，讲师，主要从事中兽医学研究。