三七总皂苷与氯吡格雷联合应用对高脂血症大鼠血液流变学的影响

熊友谊(安徽科技学院　食品药品学院，安徽　凤阳　233100)



三七总皂苷与氯吡格雷联合应用对高脂血症大鼠血液流变学的影响

熊友谊
(安徽科技学院食品药品学院，安徽凤阳233100)

摘要:目的:研究三七总皂苷联合氯吡格雷对高血脂症血液流变学的作用。方法:大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、三七总皂苷组、氯吡格雷组、三七总皂苷组联合氯吡格雷组(PNSBGL)。除正常对照组外，其余各组喂饲高脂饲料，每日1次，连续给8周;自制模之日起，治疗组分别给予三七总皂苷、氯吡格雷、三七总皂苷+氯吡格雷治疗。8周后采血，测定各组小鼠全血粘度、血小板功能和血脂水平。结果:与模型组比较，三七总皂苷、PNSBGL治疗组血粘度、血小板功能、血脂含量、纤维蛋白原含量、红细胞压积呈现显著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，氯吡格雷组血粘度、血小板功能、红细胞压积呈现显著性降低(P＜0.01或P＜0.001) ;与三七总皂苷组比较，PNSBGL治疗组血粘度、血小板功能、红细胞压积呈现显著性降低(P＜0.05或P＜0.01) ;与氯吡格雷组比较，PNSBGL治疗组血粘度、血小板功能、血脂含量、纤维蛋白原含量、红细胞压积呈现显著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。结论:三七总皂苷与氯吡格雷联合应用对高脂血症大鼠血液流变学改变具有协同改善作用。

关键词:三七总皂苷;氯吡格雷;高脂血症;血液流变学

高血脂引起的以高血粘稠度、血液流速减缓和血小板高聚集为特征的血液流变学改变是构成高血压、冠心病、糖尿病患者晚期心脑血管事件发生的重要危险因素。而改善血管壁功能、抑制血小板聚集和黏附、降低血液粘稠度的药物，以增加血液流速，防止血栓形成是预防心脑血管事件发生的重要措施［1］。三七总皂苷为三七根系的主要用药用部分，亦是复方丹参滴丸的活性组成成分。现代药理学研究表明三七总皂苷具有抑制血小板聚集，降低血脂和降低血粘度的作用，因疗效确切而成为我国防治心脑血管事件发生的首选药物之一［2］。氯吡格雷为抗血小板药物，因其抗血小板作用强以及不引起严重的肝肾毒性和胃肠道反应，被广泛应用于防治因血小板高聚集引起的心脑血管事件临床治疗中［3］。为此，本研究将三七总皂苷与氯吡格雷联合应用于高脂血症引起的血液流变学改变的治疗中，观察两药联合应用是否能够增强对高血脂、高血液粘稠度、血小板高聚集的改善作用，为临床心脑血管疾病的防治提供新的治疗方案和参考依据。

1　材料和方法

1.1实验动物与材料

8周龄SPF级SD大鼠32只，体质量180～220 g，雌雄各半，由蚌埠医学院实验动物中心提供(许可证号: SYXK(皖2012－002) ; DL－5低速离心机，郑州长城科工贸易有限公司; LBY－N6B型血液黏度仪，北京普利生仪器有限公司;扭力天平:型号JN－A，上海第二天平仪器厂;体外血栓形成和血小板粘附两用仪:型号XSN－R1，无锡县电子仪器二厂生产;三七总皂苷，批号080628，广西梧州制药(集团)股份有限公司;胆固醇，批号: 010624，天津博迪化工股份有限公司;胆盐，批号: 200904，北京奥博星生物技术有限责任公司;甲硫咪唑，批号: 20110709，天津市博迪化工有限公司;低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)测定试剂盒，批号: 110451，南京建成科技有限公司;高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)测定试剂盒，批号: 110441，南京建成科技有限公司;甘油三酯(TG)测定试剂盒批号: 115351，南京建成科技有限公司;总胆固醇(TC)测定试剂盒，批号: 111361，南京建成科技有限公司;大鼠血浆纤维蛋白原试剂盒，批号: 201211，厦门慧嘉生物科技有限公司。

1.2实验模型的制备及给药

32只SD大鼠经普通饲料适应性喂养7 d后随机分为五组，即正常对照组、模型组、三七总皂苷组、氯吡格雷、三七总皂苷与氯吡格雷联合给药组(PNSBGL)。取200 g猪油加热融化，加入100 g胆固醇，加热融化后再加入1.0 g甲硫咪唑和20 g胆酸钠，不断搅拌。随后加入200 mL吐温80、200 mL丙二醇及60 mL蒸馏水，充分搅匀，并完全溶解。冷却后加蒸馏水至1000 mL，充分混匀后冰箱保存，使用前40℃水浴融化。除正常组外，其余各组按体积10 mL/kg灌胃上述脂肪乳，每日1次，连续给8周;正常对照组灌胃10 mL/kg的上述溶媒(含20%吐温80、20%丙二醇的水溶液)。自制模之日起，三七总皂苷组灌胃三七总皂苷100 mg/kg，每日1次;联合给药处理组每日灌胃100 mg/kg和氯吡格雷30 mg/kg的生理盐水悬液;正常对照组及模型组灌胃同等体积的生理盐水。各组给予普通饲料喂养，实验期间自由采食饮水。

1.3血液流变学的测定

动物于最后一次造模及给药后禁食12h，3%戊巴比妥钠1 mL/kg麻醉，腹主动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝，取其0.8 mL全血采用LBY－N6B型血液黏度仪测定低切变率下全血粘度(ηL)、高切变率下全血粘度(ηH)及全血还原粘度(RV)。

1.4血小板功能的测定

腹主动脉取血，迅速注入长25 cm、直径2 mm的硅胶管中，约占硅胶管长度的1/2。将硅胶管置于体外血栓形成和血小板粘附两用仪中，匀速旋转15 min，将形成的血栓用滤纸吸干表面液体，测量长度;用扭力天平测量血栓湿重;然后在烘干机中37℃加热20 min后取出，测量血栓干重。血小板粘附率测定采用玻球法，即用微量注射器取腹主动脉取血1 mL，迅速加入109 mmol/L的枸橼酸钠抗凝液0.2 mL，混匀后置球形瓶内，置于体外血小板粘附仪，离心15 min，按常规方法分别测定粘附前后血小板计数。

1.5纤维蛋白原和红细胞压积的测定

取腹主动脉血0.8 mL于抗凝离心管中，10000 rpm/min离心5 min，吸取上层血浆根据试剂盒的要求测定纤维蛋白原含量。取腹主动脉血0.8 ml于抗凝离心管中，15000 r/min离心5 min，以微量毛细管法测定红细胞压积。

1.6血脂的测定

取1 mL腹主动脉血，离心后血清中的TC、TG、HDL－C、LDL－C根据试剂盒的要求，采用全自动生化分析仪测定。

1.7统计方法

实验采用SPSS 16.0软件单因素方差分析及Bonferroni均数两两比较法进行统计分析。

2　结果与分析

2.1三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠全血粘度的影响

与正常对照组比较，模型组的ηL、ηH、RV显著性增加(P＜0.05) ;与模型组比较，氯吡格雷组、三七总皂苷组、PNSBGL组ηL、ηH、RV显著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，而PNSBGL组较三七总皂苷、氯吡格雷组降低更为显著(P＜0.05或P＜0.01)，见表1。

表1　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠全血粘度的影响Table 1 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood viscosity in hyperlipemia model rats

表1　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠全血粘度的影响Table 1 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood viscosity in hyperlipemia model rats

注:模型组与正常对照组比较，#P＜0.001;给药组*与模型组比较P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;三七总皂苷、氯吡格雷组与PNSBGL组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别　　ηH　　ηL RV mPa/s正常对照组3.80±0.29　9.00±0.35　5.75±0.63模型组　5.78±0.50#　11.94±0.49#　9.70±0.50#三七总皂苷　5.29±0.36＊＊△　11.48±0.47＊＊△　8.90±0.49＊＊△氯吡格雷　5.41±0.34＊△△　11.50±0.37＊△△　9.08±0.45＊△△PNSBGL　4.91±0.31＊＊＊　10.29±0.39＊＊＊　7.58±0.47＊＊＊

2.2三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠血小板功能的影响

与正常对照组比较，模型组的血小板长度、湿重、干重、粘附率显著性增加(P＜0.001) ;与模型组比较，氯吡格雷组、三七总皂苷组、PNSBGL组血小板长度、湿重、干重、粘附率显著性降低(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，而PNSBGL组较三七总皂苷、氯吡格雷组降低为显著(P＜0.05或P＜0.01)，见表2。

表2　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠血栓形成和血小板粘附率的影响Table 2 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the platelet function in hyperlipemia model rats

表2　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠血栓形成和血小板粘附率的影响Table 2 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the platelet function in hyperlipemia model rats

注:模型组与正常对照组比较，#P＜0.001;给药组与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;三七总皂苷、氯吡

组别　　血小板粘附率(%)　　血小板长度(cm)　　血小板湿重(g)　　血小板干重(g)正常对照组24.0±4.6　7.73±0.35　0.25±0.02　0.10±0.01模型组　36.9±6.9#　9.60±0.38#　0.48±0.03#　0.25±0.03#三七总皂苷　32.7±5.6＊△△　8.48±0.45＊△△　0.43±0.05＊△△　0.21±0.02＊△△氯吡格雷　31.6±3.5＊＊△　8.05±0.44＊＊△　0.33±0.03＊＊＊　0.17±0.03＊＊＊PNSBGL　28.8±3.0＊＊＊　7.71±0.37＊＊＊　0.30±0.04＊＊＊　0.15±0.02＊＊＊

格雷组与PNSBGL组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

2.3三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠纤维蛋白原和红细胞压积的影响

与正常对照组比较，模型组的纤维蛋白原含量、红细胞压积显著性增加(P＜0.001) ;与模型组比较，三七总皂苷、PNSBGL组纤维蛋白原含量显著性降低(P＜0.001)，氯吡格雷组无显著性改变(P＞0.05) ;与模型组比较，氯吡格雷组、三七总皂苷组和PNSBGL组红细胞压积显著性降低(P＜0.05或P＜0.001)，而PNSBGL组较氯吡格雷组降低则更为显著(P＜0.01)，见表3。

表3　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠纤维蛋白原和红细胞压积的影响(x±s)Table 3 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on fibrinogen and erythrocyte pressure product in hyperlipemia model rats

表3　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠纤维蛋白原和红细胞压积的影响(x±s)Table 3 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on fibrinogen and erythrocyte pressure product in hyperlipemia model rats

注:模型组与正常对照组比较，#P＜0.001;给药组与模型组比较，*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;三七总皂苷、氯吡格雷组与PNSBGL组比较，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。

组别　　纤维蛋白原(g/L)　　红细胞压积(%)正常对照组1.53±0.21　34.8±3.2模型组　2.40±0.22#　47.6±3.4#三七总皂苷　1.84±0.16＊＊＊　38.1±2.2＊＊＊氯吡格雷　2.36±0.18△△△　44.0±3.1＊△△PNSBGL　1.83±0.15＊＊＊　37.6±4.7＊＊＊

2.4三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠血脂的影响

与正常对照组比较，模型组的TC、TG、LDL显著性增加(P＜0.001) ;与模型组比较，三七总皂苷、PNSBGL组TC、TG、LDL显著性降低，HDL显著性增(P＜0.01) ;与模型组比较，氯吡格雷组TC、TG、LDL、HDL差异均无统计学意义(P＞0.05) ;与三七总皂苷组比较，PNSBGL组TC、TG、LDL、HDL差异无统计学意义(P＞0.05)，见表4。

表4　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠血脂的影响(Table 4 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood lipid in hyperlipemia model rats

表4　三七总皂苷与氯吡格雷联合治疗对高脂血症大鼠血脂的影响(Table 4 The effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins on the blood lipid in hyperlipemia model rats

注:模型组与正常对照组比较，#P＜0.001;给药组与模型组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;三七总皂苷、氯吡格雷组与PNSBGL组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别TC　TG　HDL　LDL正常对照组111.9±14.7　141.1±13.2　45.5±5.9　37.8±5.4模型组　148±16.3#　235.3±15.7#　47.4±5.3#　54.3±4.9#三七总皂苷　131.1±14.2＊＊　222.8±11.5＊＊　56.0±6.2＊＊　45.5±3.6＊＊氯吡格雷　151.7±11.5△△　231.5±12.4△△　45.2±5.4△△　52.5±4.5△△PNSBGL　130.0±10.6＊＊　220.6±10.3＊＊　54.6±5.9＊＊　43.6±4.0＊＊

3　结论与讨论

血液流变学改变是高脂血症的一个主要特征，主要表现为血液粘稠度增高、血液流动减缓和血小板高聚集的血液高凝状态。高血脂造成脂质大量沉着、堆积在动脉内膜上，造成内皮损伤、动脉管腔狭窄、血流受阻，而血液过渡粘稠又造成血流缓慢、血流不畅，血细胞在血小板的作用下可聚集于损伤的内皮部位而形成赘生物，最终可能堵塞血管而引起局部组织和器官的缺血坏死，脱落的栓子亦可随着血流漂移导致异位栓塞。这些原因是导致老年心血管事件发生的重要病理机制［4］。因此临床治疗心脑血管疾病通常给予降血脂药、抗血小板药用以降低血液粘度和预防血栓的形成［5］。

高脂血症是临床常见病和多发病。患者除了日常注意控制脂肪的摄入外，严重者需要给予降血脂治疗。对于高脂血症合并严重心脑血管疾病的患者，除了常规给予降血脂治疗外，尚需给予抗血小板药以改善血液的高凝状态。临床常采用的降血脂药为他汀类，抗血小板药常采用氯吡格雷或阿司匹林。由于阿司匹林对胃肠粘膜刺激性强，长时服用可诱发出血、溃疡及导致肝肾损伤等副作用，使其应用受到一定的限制，而氯吡格雷不会引起严重的胃肠道反应和肝肾毒性，安全性及疗效较好，因此在防治心脑血管事件方面较阿司匹林应用更为广泛［6］。但氯吡格雷与他汀类药物的联合应用会产生相互拮抗作用，从而使临床治疗效果降低。为此，本实验采用三七总皂苷代替他汀类药物与氯吡格雷联合应用，以观察他们对高脂饮食所致的血液流变学改变是否具有协同预防或改善作用。三七总皂苷是三七的提取物，具有活血祛瘀，通脉活络功效，对血脂具有良好的调节作用，亦具有明显抗血小板功能和降纤作用［7］。而氯吡格雷是一种新颖的抗血小板药，通过阻断二磷酸腺苷受体而抑制血小板活性，常用于防治动脉粥样硬化性疾病、心肌梗死、脑卒中及外周血管疾病等疾病，疗效确切，与阿司匹林相比副作用更小。本研究结果显示两药联用后，无论是在降低全血粘度还是在抗血小板功能方面作用都得到了增强，而在降血脂方面基本与单独使用三七总皂苷持平，可见三七总皂苷与氯吡格雷对高脂血症引起的血液流变学改变具有显著的协同抑制作用，而氯吡格雷并不影响三七总皂苷对血脂的调节作用。研究也显示氯吡格雷对纤维蛋白原含量未产生明显的影响而三七总皂苷则能够显著下调纤维蛋白原，可见两药在改善血液高凝状态方面的作用机制并不相同或完全相同，结果与文献报道一致［8］，亦或是两药协同改善高脂血症引起的血液流变学的药理学基础之一。

综上所述，三七总皂苷与氯吡格雷联用即可产生良好的降脂作用，又可发挥强大的抗血小板功能和降低血液粘度的作用，提示联用可能在预防心脑血管事件应用方面具有不错的前景和开发价值。

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(责任编辑:马世堂)

Effect of Clopidogrel Combined with Total Panax Notoginseng Saponins on the Hemorheology in Hyperlipemia Model Rats

XIONG You－yi
(College of Food and Drug，Anhui Science and Technology University，Fengyang 233100，China)

Abstract:Objective: To explore the effect of clopidogrel combined with total panax notoginseng saponins in the treatment of the hemorheology in hyperlipemia.Methods: Rats were assigned randomly to one of the following six experimental groups: normal control，model，total panax notoginseng saponins，clopidogrel，clopidogrel combined with total Panax notoginseng saponins.All rats，except for those in the control group，were administrated with high－fat diet to establish hyperlipemia model，once every day for eight successive weeks.Starting from the date of the molding，all treatment groups of rats were respectively administrated with corresponding drugs: total Panax notoginseng saponins，clopidogrel or clopidogrel combined with total Panax notoginseng saponins.After 8 weeks，rat blood was collected to explore levels of blood viscosity，platelet function，blood lipid，fibrinogen and erythrocyte pressure product.Results: Compared with normal control group，levels of blood viscosity，platelet function，blood lipid，fibrinogen and erythrocyte pressure product showed significant improvement in groups of total Panax notoginseng saponins and PNSBGL，and levels of blood viscosity，platelet function and erythrocyte pressure product showed significant improvement in the group of clopidogrel (P＜0.05，P＜0.01 or P＜0.001).Compared with the group of total Panax notoginseng saponins，levels of blood viscosity，platelet function and erythrocyte pressure product showed significant improvement in the group of PNSBGL (P＜0.05 or P＜0.01).levels of blood viscosity，platelet function，blood lipid，fibrinogen and erythrocyte pressure product showed significant improvement in the group of PNSBGL(P＜0.05，P＜0.01 or P＜0.001).Conclusions: There is an outcomes of the clinical synergy and complementary advantages for the clopidogrel combined with total Panax notoginseng saponins group to treat the hemorheology in hyperlipemia.

Key words:Total Panax notoginseng saponins; Clopidogrel; Hyperlipemia; Hemorheology

中图分类号:R965.1

文献标识码:A

文章编号:1673－8772(2016) 02－0027－05

收稿日期:2016－01－10

基金项目:国家自然科学基金(81403268) ;安徽科技学院引进(稳定)人才专项(ZRC2013355)。

作者简介:熊友谊(1974－)，男，安徽省合肥市人，博士，讲师，主要从事中药活性物质研究。