B细胞特异性激活蛋白在神经内分泌肿瘤中的表达*

鲁永兰， 杨文秀*

(贵州医科大学 病理学教研室， 贵州 贵阳　550004)



B细胞特异性激活蛋白在神经内分泌肿瘤中的表达*

鲁永兰**， 杨文秀***

(贵州医科大学 病理学教研室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 观察B细胞特异性激活蛋白(PAX5)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达。方法： 经证实为NEN病例标本56例，用免疫组化SP法检测其石蜡包埋肿瘤组织中PAX5和Ki67表达，比较PAX5在不同肿瘤大小(肿块直径≤2 cm或>2 cm)、Ki67表达率(Ki67≤20%或>20%)及TNM分期(早期或晚期)中的表达情况。结果： PAX5在Ki67>20%病例中的阳性表达率(59.52%)高于Ki67≤20%病例(21.43%)，在晚期病例(62.16%)高于早期病例(26.32%)，差异有统计学意义(P<0.05)；在不同肿块直径病例中的阳性率比较，差异无统计学意义(P=0.78)。结论： PAX5在NEN中有一定表达，表达与肿瘤增殖活性(Ki67表达率)及TNM分期有关。

[关键词]B细胞特异性激活蛋白； 神经内分泌； 肿瘤； 免疫组织化学； 染色法，SP

神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasm，NEN)是一种来源于具有激素分泌功能的神经内分泌细胞的异质性肿瘤。在过去30年间，其发病率呈不断上升趋势[1-3]。B细胞特异性激活蛋白(B cell-specific activator protein, BSAP)又名PAX5，是一种B细胞发育和分化的重要转移因子。目前研究热点主要集中在与B细胞相关淋巴瘤，如急性B淋巴母细胞性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等[4-5]。近来关于PAX5表达对NEN的影响亦有报道。有研究发现，在神经母细胞瘤和小细胞肺癌(small cell lung carcinoma, SCLC)中，PAX5基因敲除会导致肿瘤细胞生存能力严重下降[6-7]。PAX5不仅支持癌细胞生存，也有助于癌细胞的转移。本研究通过检测不同部位的NEN 中PAX5的表达，分析其与肿瘤临床分期、肿块大小及肿瘤增殖活性(Ki67)的关系。

1对象与方法

1.1临床资料

收集2009年1月～2013年7月经病理证实为NEN的标本56例，男性37例，女性19例；年龄20～86岁，中位年龄52岁。NEN TNM临床分期为Ⅰ期3例，Ⅱ期16例，Ⅲ期20例及Ⅳ期17例；发生部位为胃10例，肠8例，胰腺1例，肺22例，宫颈3例，卵巢2例，食道2例，鼻咽3例，皮肤4例及膀胱1例。

1.2方法

PAX5和 Ki67蛋白的表达，采用 SP法检测，取4 μm厚打胶白片，经烘烤、脱蜡、抗原修复、血清封闭后，加入一抗(PAX5稀释度1∶25，Ki67稀释度1∶100)，4 ℃孵育过夜， 0.01 mol/L的PBS(pH7.2)清洗3次，加入二抗(通用型)37 ℃孵育30 min，0.01 mol/L的PBS(pH7.2)清洗3次，DAB染色，自来水冲洗、脱水透明、封片。以0.01 mol/L的PBS(pH7.2)代替一抗作为空白对照，以组织中的淋巴细胞作为PAX5内对照。结果判断：PAX5和Ki67阳性信号定位于细胞核，阳性染色为细胞内具有清晰可见和定位准确的棕黄色颗粒。

1.3观察指标

以肿块最大直径(肿块直径≤2 cm与>2 cm)、Ki67阳性表达率(Ki67≤20%与>20%)及TNM分期(早期与晚期)为判断标准对NEN病例进行分组，比较PAX5蛋白在相应两组病例中的表达情况。

1.4统计学方法

数据采用SPSS 19.0统计软件处理，计数资料以百分数(%)表示，数据比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

经SP染色后，PAX5和Ki67阳性信号定位于细胞核，核内可见清晰的棕黄色颗粒(图1)。Ki67>20%病例的PAX5阳性表达率高于Ki67≤20%病例，差异有统计学意义(χ2=6.09，P=0.01)；晚期(Ⅲ和Ⅳ期)病例的PAX5阳性表达率高于早期(Ⅰ期和Ⅱ期)病例，差异有统计学意义(χ2=6.45，P=0.01)；肿块直径≤2 cm病例的PAX5阳性表达率和肿块直径>2cm病例比较，差异无统计学意义(χ2=0.08，P=0.78)。见表1。

注：A为 PAX5，B为Ki67≤20%，C为 Ki67>20%图1　NEN中PAX5与Ki67的表达(SP法，×400)Fig.1　Expression of PAX5 and Ki67 in NENs of stomach

比较参数nPAX5表达(n,%)阳性阴性χ2P肿块最大径(cm) ≤22110(47.62)11(52.38)0.080.78 >23518(51.43)17(48.57)Ki67表达 ≤20%143(21.43)11(78.57)6.090.01 >20%4225(59.52)17(40.48)TNM分期 Ⅰ期和Ⅱ期195(26.32)14(73.68)6.450.01 Ⅲ期和Ⅳ期3723(62.16)14(37.84)

3讨论

PAX是一类由9个基因组成的高度保守的、对哺乳动物细胞分化及肿瘤形成具有重要调控作用的一组基因控制家族。PAX5主要对B细胞特异性结合蛋白进行编码，是一种B细胞发育和分化的重要转移因子[8]。目前研究热点主要集中在与B细胞相关淋巴瘤，如慢性淋巴细胞白血病和霍奇金淋巴瘤等。近来已有学者关注到PAX5对NEN的影响。Nguyen等[9]检测了53例来自不同部位的小细胞癌PAX5蛋白，发现其阳性率为79.2%。本研究采用SP法检测56例NEN中PAX5蛋白表达情况，分析PAX5表达与本组病例部分临床病理特征的关系;结果发现PAX5表达与肿瘤大小无明显关系(P>0.05)，而与Ki67指数及肿瘤临床分期密切相关(P<0.05);PAX5的阳性表达在Ki67>20%的NEN病例高于Ki67≤20%的病例；在晚期NEN病例高于早期病例，这与Panzuto等[10]的研究结果基本一致。在NEN的诊断中，国际公认的最可靠的标记是CgA、Syn和CD56等[11]。本研究结果表明，PAX5在NEN中有一定程度表达，表达与肿瘤增殖活性(Ki67表达率)、TNM分期有关。提示PAX5阳性表达可能是NEN病理诊断的重要补充。关于PAX5表达对NENs临床病理特征和预后的影响的机制有待于进一步的深入研究。

4参考文献

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(2016-02-25收稿，2016-04-30修回)

中文编辑： 吴昌学； 英文编辑： 刘华

Expression of PAX5 in Neuroendocrine Neoplasms

LU Yonglan, YANG Wenxiu

(DepartmentofPathology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004 ,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To observe the expression of B cell-specific activator protein (PAX5) in neuroendocrine neoplasms(NENs). Methods: 56 confirmed NEN cases specimens were enrolled in this study. Immunohistochemical SP method was adopted to detect the expression of Pax5 and Ki67 in paraffin embedding tumor tissues. The positive expression rates of Pax5 was compared in different tumor size (mass diameter≤2 cm or>2 cm), in different Ki67 expression rates (Ki67≤20% or>20%) and in different TNM stage (early or late stage). Results: The positive expression rate of Pax5 in Ki67>20% cases was 59.52%, significantly higher than 21.43% in Ki67 ≤ 20% cases(P<0.05). The positive expression rate of Pax5 in late stage was 62.16%, significantly higher than 26.32% in early stage(P<0.05).There was no statistically significant difference in positive expression rate of Pax5 between different tumor size (P=0.78). Conclusion: There is a certain degree of expression of Pax5 in NENs, which is related to the proliferation activity of the tumor (Ki67 expression rate) and the TNM stage.

[Key words]B cell-specific activator protein; neuroendocrine; neoplasm; immunohistochemistry; staining method，SP

*[基金项目]国家自然科学基金项目(81100299)

[中图分类号]R736

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)05-0567-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.05.018

**贵州医科大学2012级硕士同等学历研究生，现在安顺市人民医院工作

***通信作者 E-mail:ypq1964@163.com

网络出版时间：2016-05-13网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160513.2059.028.html