MACC1与C-met在食管癌组织中的表达及其临床意义

杨绍广

(天津市西青医院 消化内科，天津300383)



MACC1与C-met在食管癌组织中的表达及其临床意义

杨绍广

(天津市西青医院 消化内科，天津300383)

我国食管癌的发病率和死亡率分别占全球食管癌发病和死亡人数的53.86%和49.26%[1]，早期诊断、治疗对于延长患者的生存期、提高生活质量有着重要的意义。肠癌转移相关基因1(Metastasis-associated in colon cancer 1，MACCl)是近年发现的与结肠癌浸润转移密切相关的基因，在结肠癌组织中表达明显的升高[2]。研究表明，MACCl与结肠癌、卵巢癌以及肺腺癌等多种肿瘤的生长、转移以及复发的关系较为密切[3，4]。MACCl是肝细胞生长因子/肝细胞生长因子受体(HGF/C-met)信号转导通路的调节因子，能够独立预测结肠癌形成、转移。本研究检测了食管癌组织及癌旁组织中C-met与MACC1的表达，并探讨其表达的临床意义，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料选择2013年6月至2015年5月我院病理科保存的诊断为食管癌的病理切片86例，另取癌旁组织(距离食管癌5 cm以上)的切除标本86例。患者术前均未接受过化疗、放疗以及内分泌治疗。其中男52例，女34例；年龄38-77岁，平均(48.6±7.3)岁；根据美国癌症联合会(AJCC)2009分段标准：胸上段18例，胸中段42例，胸下段26例；临床病理分期按照食管癌国际TNM分期标准：Ⅰ期17例，Ⅱ期28例，Ⅲ期31例，Ⅳ期10例；有淋巴结转移46例，无淋巴结转移40例。

1.2主要试剂MACCl兔抗人多克隆抗体IgG由美国Sigma公司(稀释浓度1∶300)生产，C-met兔抗人多克隆抗体IgG由北京博奥森生物技术有限公司(稀释浓度1∶200)生产，兔超敏二步法免疫组织化学检测试剂盒以及DAB显色试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司生产。

1.3方法使用免疫组织化学法检测：将组织进行切片(4 μm)，65℃烘烤照30 min后，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化。将组织切片置于pH6.0的柠檬酸钠缓冲液中，微波抗原修复20 min，室温下置于3%的过氧化氢甲醇溶液中灭活15 min。使用0.01 m/ml pH7.4的PBS缓冲液冲洗5 min，3次。干燥后，滴加兔抗人MACC1多克隆抗体以及兔抗人C-met多克隆抗体，4℃过夜。PBS冲洗3次，加入生物素化二抗工作液，室温30 min。干燥后，加入DAB显色剂，室温5 min后终止显色。Mayer氏苏木精复染2 min，梯度乙醇脱水、树脂封片。

1.4结果判断阳性对照用已知MACCl、C-met阳性表达的结肠癌组织切片；阴性空白对照用PBS缓冲液代替一抗。对MACC1、C-met的表达水平进行半定量的评估。显微镜下计算阳性表达细胞所占的百分数，并对染色的细胞进行染色程度的得分评判。阳性细胞数<5%时为阴性(-)；5%-25%为(+)；26%-50%为(++)；51%-75%为(+++)；超过75%为(++++)，分别记作0-4分。根据荧光的强度分为阴性(0分)，弱(1分)，中等(2分)以及强烈(3分)。

1.5观察指标测定组织中MACC1与C-met的表达水平，并分析其与食管癌病理特征的关系。

1.6统计学方法使用SPSS17.0软件系统分析所有的数据，计数资料采用χ2检验；相关性分析采用Spearman秩相关检验。若P<0.05则判断差异有统计学意义。

2结果

2.1观察组及对照组阳性率食管癌组织标本中MACCl、C-met表达的阳性率均显著高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2MACCl、C-met表达与食管癌临床病理特征的关系MACCl表达与性别、年龄、肿瘤部位均无关(P>0.05)；与分化程度、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。C-met表达与性别、年龄、肿瘤部位和浸润深度均无关(P>0.05)；与分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。见表2。

表1　两组MACCl、C-met阳性率比较(n/%)

注：与对照组比较，aP<0.05。

表2　MACCl、C-met表达与食管癌临床病理特征的关系

2.3食管癌组织中MACCl、C-met表达的相关性

Spearman相关分析结果表明，食管癌组织中MACCl、C-met表达呈正相关相关(r=0.356，P=0.001)。见表3。

表3　食管癌组织中MACCl、C-met表达的相关性

3讨论

由于食管癌早期的临床症状不典型，就诊时往往以处于中晚期，5年存活率仅为10%-20%。因此，寻找与其诊断、预后相关的特异分子指标，对于提高食管癌患者的生存率十分重要。

MACC1是2009年由Stein等发现并命名，其与结肠癌的浸润转移密切相关，定位于人染色体7p21.1，含有7个外显子、6个内含子，MACC1蛋白的功能结构域与细胞的信号传导和凋亡有关，同时，还能结合MET启动子，激活HGF/MET信号传导通路，使得C-met的表达明显的提高[5，6]。研究表明，在胃癌、卵巢癌、肝癌、脑胶质瘤以及肺癌中，MACCl的表达均异常增高，且与肿瘤的浸润、转移有密切的关系。C-met蛋白是一种跨膜蛋白，具有酪氨酸激酶活性，由原癌基因C-met编码表达，被认为是肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的唯一受体[7]。HGF广泛分布于人体组织中，在伤口愈合、胚胎发育以及形态变化中均有着十分重要的作用。当配体HGF较好C-met受体后，激活细胞外β亚基的相应位点，信号传导入细胞内，激活酪氨酸激酶(PTK)，使得C-met受体自身酪氨酸残基(Tyr)磷酸化，多种信号通路被启动，从而促进肿瘤细胞的侵袭与迁移[8，9]。

本研究结果表明，食管癌组织标本中MACCl、C-met表达的阳性率显著高于癌旁组织标本(P<0.05)；MACCl表达与分化程度、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)；C-met表达与与分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。Guo[10]等采用免疫组化法检测了98例胃癌及癌旁组织中MACC1和C-met蛋白的表达，结果显示，在原发肿瘤中MACC1和C-met蛋白的阳性率分别为61.22%和59.18%，与癌旁组织相比，均具有显著性差异(P<0.05)；MACC1和C-met的表达密切相关(P<0.05)；MACC1蛋白在胃癌组织中的表达与腹膜转移、淋巴结转移以及肝转移的存在均有密切的关系(P<0.05)，而与性别、年龄、肿瘤大小及部位、临床阶段或远处转移无关(P>0.05)。张瑞涛[11]等研究结果显示，在卵巢上皮性癌中，MACC1、HGF和C-met蛋白的表达异常升高，与临床分期、组织分化以及淋巴结转移相关(P<0.05)；MACC1蛋白的表达与HGF和C-met蛋白的表达呈正相关，HGF蛋白与C-met蛋白表达呈正相关(P<0.05)。MACC1蛋白主要通过作用于C-met启动序列的Sp1位点，使得C-met的表达上调，增强HGF/C-met信号途径的级联放大作用[12，13]。

综上所述，MACCl、C-met与食管癌的病理过程有着十分密切的关系，可以通过联合检测MACCl和C-met的表达作为食管癌的早期诊断、恶性程度评估及预后的临床指导。

参考文献：

[1]王建军,洪强,胡丛岗,等.结肠癌转移相关基因1蛋白在食管癌组织中的表达及其意义[J].中华医学杂志,2013,93(32):2584.

[2]Stein U,Walther W,Arlt F,et al.MACC1,a newly identified key regulator of HGF-MET signaling,predicts colon cancer metastasis[J].Nat Med,2009,15(1):59.

[3]Shirahata A,Sakata M,Kitamura Y,et al.MACC 1 as a marker for peritoneal-?disseminated gastric carcinoma[J].Anticancer Res,2010,30(9):3441.

[4]胡兴胜,付曦,文世民,等.MACC1和C-met在非小细胞肺癌中的表达及其预后价值[J].中国肺癌杂志,2012,15(7):399.

[5]Arlt F1,Stein U.Colon cancer metastasis:MACC1 and Met as metastatic pacemakers[J].Int J Biochem Cell Biol.2009,41(12):2356.

[6]Stein U,Dahlmann M,Walther W.MACC1-more than metastasis Facts and predictions about a novel gene[J].J Mol Med (Berl),2010,88(1):11.

[7]王兴名,郭莉,张志强,等.C-met 在新疆哈萨克族与汉族食管鳞癌组织及血清中的表达及意义[J].天津医药,2015,43(1):64.

[8]Lim YC1,Han JH,Kang HJ,et al.Over expression of C-met promotes invasion and metastasis of small oral tongue carcinoma[J].Oral Oncol,2012,48(11):1114.

[9]Matsumura A,Kubota T,Taiyoh H,et al.HGF regulates VEGF expression via the C-met receptor downstream pathways,PI3K/Akt,MAPK and STAT3,in CT26 murine cells[J].Int J Oncol,2013,42(2):535.

[10]Guo T,Yang J,Yao J,et al.Expression of MACC1 and C-met in human gastric cancer and its clinical significance[J].Cancer Cell Int,2013,13(1):121.

[11]张瑞涛,史惠蓉,黄好亮,等.MACC1、HGF和C-met蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其意义[J].南方医科大学学报,2011,31(9):1551.

[12]张玉鹏,李昭宇,魏洪吉,等.MACC1和C-met蛋白在肝细胞癌组织中的表达研究[J].中华普通外科杂志,2013,28(7):534.

[13]Boardman LA.Over expression of MACC1 leads to downstream activation of HGF/MET and potentiates metastasis and recurrence of colorectal cancer[J].Genome Med，2009,21(4):36.

文章编号：1007-4287(2016)05-0791-03

(收稿日期：2015-09-11)