增强化学发光法检测手术及输血感染标志物的临床应用

沈　锋，邱　辉，周惠娟

(安康市中心医院 检验科,陕西 安康725000)



*通讯作者

增强化学发光法检测手术及输血感染标志物的临床应用

沈锋*，邱辉，周惠娟

(安康市中心医院 检验科,陕西 安康725000)

摘要：目的对增强化学发光法检测感染性标志物进行临床应用评价。方法采用美国强生增强化学发光技术检测系统及配套试剂对乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)进行初筛检测，阳性标本立即重新复查一次，仍为阳性者判断为初筛试验阳性。对于HBsAg、抗-HCV初筛阳性标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)进行确证；抗-HIV初筛阳性者送HIV确诊实验室进行确诊、抗-TP初筛阳性者采用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)进行确证。结果增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的阳性检出率分别是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%，阳性检出率均高于各检测项目的复检确认方法的阳性率。41123例术前检查患者血清标本中，应用增强化学发光法共筛查出2399例HBsAg阳性标本、308例抗-HCV阳性标本、19例抗-HIV阳性标本、1123例抗-TP阳性标本。筛查的阳性标本经各项目的复检确认方法进行复检确认后，共确认出2325例HBsAg阳性标本、299例抗-HCV阳性标本、17例抗-HIV为阳性标本、1054例抗-TP阳性标本。应用增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时，经复检后各检测项目均呈现100%的阳性。结论增强化学发光法HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的检测特异性大于99%，检测阳性预测值完全能够满足临床诊疗需求，检测过程和工作效率都优于常规免疫标记技术，值得临床推广应用。

关键词：增强化学发光法；免疫检测；乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)；抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)；抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)；抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)

(ChinJLabDiagn,2016,20:0783)

手术及输血治疗是临床上不可或缺的诊疗手段，在诊疗过程中，机体不可避免的接触异物及各种侵袭性操作，由此引起相关病原体血流感染和病原体交叉传播屡见不鲜，同时引起的医疗纠纷时有发生。根据国家卫生计生委颁布的《临床输血技术规范》要求，对需采取手术及输血患者治疗前必须进行乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)4项感染性标志物进行检测。目前国内外临床主要采用酶联免疫吸附法(ELISA)作为输血/术前感染标志物的血清学初筛检测方法[1]，但由于ELISA法检测步骤繁琐、需要时间长不便于特检快检患者。为此我们采用增强化学发光免疫分析技术(chemiluminescent immunoassay,CLIA)对需急诊手术和输血患者4种感染性标志物进行检测。现将研究结果报道如下。

1资料与方法

1.1病例资料 收集安康市中心医院2014年4月-2015年4月需手术和输血治疗的患者41123例，其中男19009例，女22114例；年龄30 min-92岁。采集受试者静脉血3 ml常规分离血清。

1.2仪器与试剂试验中所用的仪器有美国强生公司VITROS 5600全自动生化免疫分析仪及配套试剂,芬兰Muitiskan MK3酶仪和Well wash4 MK2洗板机；ELISA诊断试剂盒(HBsAg和抗-HCV)购自英科新创(厦门)科技有限公司；TPPA试剂盒购自日本富士本株式会社。

1.3方法

1.3.1初筛试验所有受试者血清标本均立即应用增强化学发光法在VITROS 5600全自动生化免疫分析仪上进行乙肝表面抗原(HBsAg)、抗丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、抗人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)、抗梅毒螺旋体特异性抗体(抗-TP)四项感染标志物检测。判断标准：增强化学发光法S/CO值≥1为阳性，<1为阴性，所有阳性标本均采用同种试剂进行复检后仍为阳性者判断为初筛试验阳性。

1.3.2复检确认试验初筛阳性标本分别按各自项目的复检方法进行复检确证。对初筛阳性的HBsAg和抗-HCV用ELISA法进行复检；对于抗-HIV初筛阳性者送到HIV确证实验室进行确证；抗-TP阳性采用TPPA试验进行复检确证。所有检测项目最终向临床报告的阳性结果均以复检确认结果为标准。

1.4统计学分析采用SPSS17.0软件对检测结果进行统计学分析，组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.14项感染标志物检测结果增强化学发光法对HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP阳性检出率分别是5.83%、0.75%、0.05%、2.73%，经各项目的复检确认方法进行复检确认后HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP阳性检出率分别为5.65%、0.73%、0.04%、2.56%。初筛试验的阳性检出率均高于复检方法，阳性率比较差异无统计学意义(χ2值分别为1.23、0.13、0.11、2.25，P值分别为0.267、0.71、0.74、0.13)。初筛试验中各指标阳性检出率随着增强化学发光法S/CO值变化而变化，通过筛查得知当HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP的S/CO值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时，经复检后均呈现100%的阳性结果，见表1。

表1　增强化学发光法阳性S/CO值与各项目复检方法检测结果(例)

2.2复检确证试验结果统计学分析各项检测结果经统计学分析后，HBsAg检测特异性99.81%(95%可信区间为99.77%-99.85%)，阳性预测值为96.92%(95%可信区间为96.23%-97.71%)；抗-HCV检测特异性99.98%(95%可信区间为99.97%-99.99%)阳性预测值为97.08%(95%可信区间为95.20%-98.96%)；抗-HIV检测特异性99.99%，阳性预测值为89.47%；抗-TP检测特异性99.83%(95%可信区间为99.79%-99.87%)阳性预测值为93.86%(95%可信区间为92.41%-95.31%)。

3讨论

增强化学发光技术是在经典的化学发光技术体系中加入过氧酸盐和电子转移增强剂(三氯四羟基乙酰苯胺)增加荧光强度并且延长发光时间的一种改良化学发光技术。增强化学发光技术有着优异的检测灵敏度，极低的本底非特异性信号，由此本组资料显示检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP阳性检出率均高于复检方法，阳性率比较差异无统计学意义(P<0.05)。增强化学发光法检测特异性均在99.81%以上，与国外研究结果一致[2]。同时该方法对低浓度样品有着良好的精密度，宽泛的动态检测范围，而且对阴阳性样品有着良好的“分辨力”，研究资料显示其检测阳性预测值HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP分别达到96.92%、97.78%、89.47%、93.86%，抗-HIV阳性预测值略底，可能由于HIV感染例数有限，筛查范围所限。通过检测发现增强化学发光法检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP阳性率随S/CO值的变化而变化，当HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP检测S/CO值分别在5.71、9.24、15.9、10.82以上时，经复检后均呈现100%的阳性。检测过程中HBsAg对S/CO值反应最敏感，由于化学发光法本身具有较高的灵敏度，其灵敏度数值远低于HBsAg对机体起到有效保护作用的最低浓度[3]，因而大大降低复检率，减少人力物力的浪费。当检测S/CO值较低时会出现一定假阳性，这可能由于人种、感染的地域性差异及疾病发病率不同等因素的影响，笔者发现新生儿受出生时注射乙肝疫苗的影响，出现HBsAg假阳性率高于其它人群，但假阳性不足影响试验的可信度，与各项目复检确认方法比较阳性率差异无统计学意义。增强化学发光法有着她特有的准确度和特异性，这对一般医疗机构来说，从检测时间，经济和准确度等各方面无凝都是不可或缺的选择，特别适应于急诊患者的临床特检快检，可有效地减免一些医疗纠纷的发生。对于增强化学发光法筛查中产生的假阳性，要同时用各自复检方法进行复检确证，这样为增强化学发光法作一有效的补充，确保医疗安全。

有创检查和治疗是HBsAg、HCV、HIV与梅毒等病原体感染的重要传播途径。因检测病毒体存在“窗口期”，经输血治疗导致血源性疾病难以根除，现在成为人们所关注的公共卫生问题之一[4]。我国又是病毒性肝炎大国，特别是乙型肝炎、丙型肝炎的感染率相当率高。本研究显示HBsAg感染率为5.65%，低于我国自然人群HBsAg的携带率(9.75%)和赵玉河等研究的结论[5，6]，可能由于我国目前已将HBV预防纳入儿童计划免疫范畴起了显而易见的效果，但对于抵抗力低下特殊人群的危险性是不可小视的，有研究表明HBV不论在妊娠期、新生儿还是婴幼儿时期都具有高风险因子甚至可能导致产妇产后大出血等严重后果[7]。本次研究HCV的感染率为0.73%，与文献报道的HCV在健康人群中阳性可达0.7%-3.1%，属于我国正常人群中分布[8]。艾滋病和梅毒均是性传播血液传播疾病也是最为严重的传染性疾病，我国艾滋病和梅毒发病率有逐年上升的趋势，本次检测HIV的阳性率0.04%，梅毒的阳性率达到2.56%。由于HIV和梅毒目前还没有行之有效的预防措施，对于高危人群是不容忽视的，特别值得一提的是笔者在检测中发现，对于HIV和梅毒阳性的孕产妇患者的新生儿无一例幸免。随着西方开放思想及人们社会意识形态的改变，吸毒及不正当的性接触等因素明显增加梅毒及HIV发生感染的风险，已引起政府的高度重视。

综上所述，运用增强化学发光技术检测感染四项具有高度灵敏度和特异度，有效的缩短检测时间，非常适合大批量的筛查，特别适宜急诊患者。能够对患者采取及时有效的防治措施，避免和减少医院感染率和医疗纠纷的发生。

参考文献：

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[7]陈志，周松伟.3类人群检测4项感染性标志物的意义[J].检验医学与临床，2013,4(10):889.

[8]李兰娟，任红．传染病学[M].第8版.北京:人民卫生出版社，2013：21-23.

The clinical application of enhanced chemiluminescence on detecting operation and blood transfusion infection marks

SHENFeng,QIUHui,ZHOUHui-juan.

(DepartmentofClinicalLaboratory,AnkangCentralHospitalofShaanxiProvince,ShaaxiProvinceAnkang725000,China)

Abstract:ObjectiveClinical application evaluation of enhanced chemiluminescence on detecting operation and blood transfusion infection marks.MethodsA preliminary screening was carried out on the results of operation and blood transfusion infection marks,including HBsAg,anti-HCV,anti-HIV and anti-TP,by using JNJ enhanced chemiluminescence.We confirmed the positive results of preliminary screening if the results of twice repeated test were all positive.In order to make a definite diagnosis,ELISA was carried out on preliminary screening positive samples of HBsAg and anti-HCV test.The positive samples of HIV were sent to AIDS confirmed lab of CDC.TPPA was carried out on positive samples of anti-TP test.ResultsThe positive detection rate of HBsAg,anti-HCV,anti-HIV and anti-TP were 5.83%,0.75%,0.05%,and 2.73% by using enhanced chemiluminescence.The positive detection rate was all higher than the re-inspection confirmed methods.Among 41123 cases of patients’ serum specimens,2399 cases were HBsAg positive specimens,308 cases were anti-HCV positive specimens,19 cases were anti-HIV positive specimens and 1123 cases were anti-TP positive specimens by using enhanced chemiluminescence.Those positive specimens were confirmed by re-inspection confirmed methods.The result showed that 2325 cases were HBsAg positive specimens,299 cases were anti-HCV positive specimens,17 cases were anti-HIV positive specimens and 1054 cases were anti- TP positive specimens.When the S/CO values of HBsAg,anti-HCV,anti-HIV and anti-TP were higher than 5.71,9.24,15.9 and10.82 by using enhanced chemiluminescence detection,those specimens were all 100% positive with re-inspection confirmed.ConclusionEnhanced chemiluminescence applied on HBsAg,anti-HCV,anti-HIV,anti-TP detection worthy of clinical popularization and application,because the specificity of this method is greater than 99%.Positive predictive value of the method totally can satisfied the demand of clinical diagnosis and treatment.The detection process and efficiency of the method are all superior to conventional immunolabelling technique.

Key words:Enhanced chemiluminescence;Immunoassay;HBsAg;Anti-HCV;Anti-HIV;Anti-TP;Chemiluminescent immunoassay(CLIA)

文章编号：1007-4287(2016)05-0783-04

中图分类号：R575.1

文献标识码：A

作者简介：沈锋，男，36岁，主管检验师，从事临床检验方面研究。

(收稿日期：2015-11-04)