调脂柔脉颗粒对高脂血症大鼠动脉壁ICAM-1基因表达的影响*

杨志宏　李经渭　袁有才　 李天浩　朱晓娜　曹　旸　问丽娜　郭　珍

陕西中医药大学附属医院(咸阳712000)



调脂柔脉颗粒对高脂血症大鼠动脉壁ICAM-1基因表达的影响*

杨志宏李经渭△袁有才▲李天浩◇朱晓娜曹旸问丽娜郭珍

陕西中医药大学附属医院(咸阳712000)

摘要目的:研究调脂柔脉颗粒对高脂血症大鼠动脉壁中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)影响。方法:将健康雄性SD大鼠72只按体质量随机分为6组,每组12只:空白组、模型组、西药组、调脂柔脉颗粒高剂量组、调脂柔脉颗粒中剂量组、调脂柔脉颗粒低剂量组。采用高脂饮食建立大鼠高脂血症模型,采用RT-PCR的方法检测各组大鼠动脉壁匀浆中ICAM-1基因的表达。结果:与空白对照组相比,模型组ICAM-1基因的表达明显升高，差异有统计学意义；与模型组相比各治疗组ICAM-1基因的表达有不同程度的下降，调脂柔脉颗粒大剂量组效果显著，差异有显著性(P<0.05)。结论:调脂柔脉颗粒能下调实验性高脂血症大鼠动脉壁ICAM-1基因的表达,与降血脂、预防动脉粥样硬化正相关。

主题词高脂血症/中医药疗法动物实验 @调脂柔脉颗粒

高脂血症是心脑血管病的最主要发病因素，脂质异常对动脉粥样硬化有促进作用。笔者在临床中总结研发的调脂柔脉颗粒有较好的降脂效果。为进一步研究其对高脂血症致动脉粥样硬化的作用， 拟通过高脂血症大鼠模型观测胸主动脉ICAM-1(Intercellular cell adhesion molecule-1 即细胞间黏附分子-1)基因的表达。

1材料1.1实验动物从第四军医大学实验动物中心购入72只SD大鼠, 雄性清洁级，体重200±20g。

1.2药物和试剂调脂柔脉颗粒：由天花粉、黄芪、葛根、制首乌、决明子、丹参、大黄、苍术、生山楂、槐角等药物组成，陕西中医学院附属医院制剂中心提供，10g/袋。辛伐他汀,杭州默沙东制药有限公司。高脂饲料：按85%的基础饲料、1.7%的胆固醇、4.3%猪油、8.6%蛋黄粉,0.4%的猪胆 盐的比例由第四军医大学动物实验中心配制。10%水合氯醛, 国产分析纯，陕西中医学院附属 医院制剂中心配制；TaqDNA聚合酶,天津强微生物科技有限公司；Trizol reagent, 北京瑞达恒辉生物技术发展公司；反转录试剂盒(Reverse Transcription System),美国Promega公司；上海生工生物工程技术服务有限公司合成ICAM-1、β-actin引物。实时定量PCR仪：BIO-RAD公司,RNA定量仪：美国Nano Drop ND-1000 spectrophotometer。

2方法2.1分组和造模将72只SD大鼠按体重质量随机分为6组,每组12只:模型组、空白组、对照辛伐他汀组、调脂柔脉颗粒低剂量组、调脂柔脉颗粒中剂量组、调脂柔脉颗粒高剂量组。空白组给予普通饲料饲养；其余各组动物给予高脂饲料。

2.2给药各组大鼠按1mL/(kg·d)灌胃，空白组、模型组给予纯净水灌胃,调脂柔脉颗粒低剂量组(0.125g/mL)、调脂柔脉颗粒中剂量组(0.25g/mL)、调脂柔脉颗粒高剂量组(0.5g/mL)混悬液灌胃；辛伐他汀(0.2mg/mL)混悬液灌胃，连续8周。

2.3主动脉取材造模及干预8周后采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,颈总动脉采血后，迅速取出主动脉和胸主动脉,剪碎置于冻存管,液氮冷冻，标本采集结束后转-80℃冰箱冻存备用。

2.4实时RT-PCR按照TRIZOL试剂说明书提取总RNA,采用Ta KaRa公司 Prime Script® RT reagent Kit Perfect Real Time(DRR037A)反转录试剂盒冰上加样。取上述逆转录产物PCR扩增ICAM-1：正义: 5′AGGTATCCATCCATCCCACA 3′，反义: 5′AGT-GTCTCATTCCCACGGA 3′,扩增产物长度388 bp。内参照β-actin引物序列: 正义: 5′CGTTGACATCCGTAAAGA 3′，反义 5′AGCCACCAATC-CACACAG3′,扩增产物长度173 bp。采用Ta KaRa Biotechology公司的 SYBY Premix Ex TaqTMⅡ(Perfect Real Time(DRR081A)试剂盒，依次加入以下试剂,构建PCR反应体系，变性95℃,30s,退火95℃,30s ,延伸60℃,30s,反应进行40个循环,PCR反应结束后，将PCR反应液从60℃缓慢升温到95℃，以获取融解曲线。

3结果3.1调脂柔脉颗粒对高血脂大鼠一般情况的影响模型组大鼠经8周高脂喂养，体重较空白组明显增加(P<0.01)，大鼠活动减少，懒动，毛发略黄。各治疗组大鼠精神状态较模型组明显好转，体重增加减缓(见表1)，活动灵活。

3.2调脂柔脉颗粒对高血脂症大鼠主动脉ICAM-1mRNA表达的影响与空白组比较，模型组主动脉ICAM-1基因的表达明显增加(P<0.01)；与模型组相比，对照组组及调脂柔脉颗粒低中高剂量组组均能减少动脉壁ICAM-1基因的表达(P< 0.01～0.05 )，且大剂量组明显优于小剂量与对照组 (P< 0.01)。见下表。

表1各组体重、ICAM-1mRNA表达

注：与模型组比较△P<0.05，与模型组比较▲P<0.01，与大剂量组比较◇P<0.05，与大剂量组比较◆P<0.01，与空白组比较□P<0.05，与空白组比较■P<0.01

4讨论高脂血症与动脉粥样硬化的发生有密切关系，已经被认为冠心病、脑卒中的疾病发生的关键诱发因素[1]，血脂的调控已经成为临床预防心脑血管病的主要方法之一。研究显示高脂血症能引起的炎症反应贯穿于动脉粥样硬化的始终及斑块破裂、血栓形成的全过程[2]，导致血管内皮功能紊乱,而ICAM-1是内皮细胞活化标志之一。ICAM-1是白细胞和内皮细胞的共同跨膜蛋白，研究显示在血管内皮功能损伤时能产生许多的细胞因子、炎性介质等物质能诱导ICAM-1mRNA的表达，促进单核细胞与内皮细胞的黏附，促进或加剧动脉粥样硬化发生[3]。

中医药在高脂血症防治中有丰富的经验，属“膏脂”范畴[4]。经系统文献分析[5]病位在肝、脾、肾、心、胃、胆，其中与“肝”相关的证型最多，同时伴有“瘀”的病机。这与笔者临床总结高脂血症病机为“肝郁血瘀浊阻”相吻合，笔者经验方调脂柔脉颗粒由决明子、制首乌、天花粉、黄芪、葛根、丹参、大黄、苍术、生山楂、槐角等组成，疏肝解郁，祛浊活血，临床应用有较好效果。本实验研究显示调脂柔脉颗粒可显著改善高脂血症大鼠一般状态，能较好的控制体重，改善动脉粥样硬化，其机理与降低ICAM-1表达正相关，且大剂量疗效最著。

参考文献

[1]阮晓枫，陈思韵，胡泽涛.高脂血症致动脉粥样硬化的防治与肠道微生态机制[J].世界最新医学，2015，15(44):35-36.

[2]谢健，童晓云，沈超，等.活血通脉颗粒对颈动脉粥样硬化家兔ICAIVI-1、IL-6表达的影响[J].中国中医急症，2015,24(3)：396-398.

[3]Niu N,Sun SZ,Han B,et al. Relationship of ox-LDL/LOX-1 and vascular endothelial dysfunction of diet induced obese immature rats and nicotinic acids intervention outcomes [J].Zhonghua Yixue Zazhi，2013,93(42):388-393.

[4]张蕾，张琪，游云，等. 基于代谢组学技术探讨高脂血症及动脉粥样硬化痰瘀证候的演变规律[J].中国中西医结合杂志,2015,35(7):823-833.

[5]郭姣，朴胜华，石忠峰，等.高脂血症中医证候分布规律文献研究[J].广州中医药大学学报，2013,30(5):609-632.

(收稿2015-12-14；修回2016-01-11)

Effect of Tiaozhi Roumai granule on the expression of ICAM-1 in arterial wall gene in rats with hyperlipidemia

The Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine( Xianyang 712000)

Yang Zhihong Li Jingwei Yuan Youcaietal

ABSTRACTObjective: To study the effect of Tiaozhi Roumai granule on intercellular adhesion molecule -1 (ICAM-1) expression of aorta in rats with hyperlipemia . Methods: 72 male SD rats were randomly divided into 6 groups: control group(n=12), model group,Tiaozhi Roumai granules in high ,middle,low dose group and Western medicine group. Blank group was assigned to receive normal diet. Model group was given high fat .the expression of ICAM-1 ineach group rats’ arterial were detected by the method of RT-PCR . Results: Compared with the blank group,the expression of ICAM-1 gene was significantly increased in model group, the difference was statistically significant(P< 0.01); compared with the model group ,the expression of ICAM-1 gene in each group have different degrees of decline, effect of Tiaozhi Roumai granule high,meddle dose group have significant difference (P< 0.01). Conclusion:Tiaozhi Roumai granule can decline the expression of ICAM-1 in experimental hyperlipidemia rats’ artery,it may be one of the mechanism of its prevention and treatment of atherosclerosis.

KEY WORDSHyperlipidemias/traditional Chinese medicine therapyAnimal experimentation @Tiaozhi Roumai granule

【中图分类号】R589.2

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.05.048

*陕西省自然科学基金资助项目(2009JM4012)

△陕西省渭河发电厂医院(咸阳712000)

▲陕西中医药大学( 咸阳712046)

◇陕西中医药大学第二附属医院(咸阳 712000)