山甲复肝胶囊对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用

杨　洁　宋延平　刘建峰　丁殿利　 姜姗姗

陕西省中医药研究院(西安 710003)



山甲复肝胶囊对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用

杨洁宋延平刘建峰丁殿利△姜姗姗

陕西省中医药研究院(西安 710003)

摘要目的:探讨山甲复肝胶囊对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用及其初步机制。方法:SD大鼠60只，随机分为空白组、模型组、山甲复肝胶囊大、中、小剂量组(1.6g/Kg、0.8g/Kg、0.4g/Kg)及护肝宁片组(0.96g/Kg)，每组10只。除空白组外均以50%四氯化碳橄榄油溶液皮下注射,每周2次，0.1mL/100g，连续5周，制备慢性肝损伤模型。造模同时给药，5周后各组大鼠取血检测血清相关指标：谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)以及取肝组织进行HE染色观察病理学变化。结果:与模型组比较，山甲复肝胶囊大、中剂量组(1.6g/Kg、0.8g/Kg)能明显对抗四氯化碳慢性肝损伤致ALP、ALT、AST升高(P<0.05，P<0.01)，并能够降低肝组织病理学评分(P<0.01)。结论:山甲复肝胶囊能对四氯化碳造成的慢性肝损伤有对抗作用，具有一定的保肝作用。

主题词 药物性肝损伤, 慢性/中医药疗法四氯化碳@山甲复肝胶囊

慢性肝炎是我国的常见病和多发病，山甲复肝胶囊为传统复方制剂，具有益气健脾、养血活血、疏肝止痛的作用，临床主要用于慢性肝炎、肝硬化早期引起的肝郁脾虚证，症见脘腹胀满、两胁疼痛、面色黧黑、蜘蛛痣、肝掌等。因此，本研究拟通过建立四氯化碳致大鼠慢性肝损伤模型，观察山甲复肝胶囊对于慢性肝损伤的保护作用。

1材料1.1 实验动物SPF级雄性SD大鼠，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。空调调温，室温22～28℃，相对湿度40～60%，排气扇通风换气每天2次，每次1h。试验大鼠分笼喂养，水(常水)、标准颗粒饲料自由摄取。鼠舍保持整洁卫生。光/暗时间为12/12h。实验前禁食12h。实验期间自由进食饮水。实验动物饲养与使用皆遵循实验动物学会实验动物饲养与管理指南规定。实验动物质量许可证号：SCXK(陕)2012-003。

1.2试剂与药物山甲复肝胶囊，陕西中医肝肾病医院制备，批号140609，规格0.4g/粒。护肝宁片，吉林吉春制药股份有限公司生产，批号：140501，有效期：2017/04。规格：0.48g/片。四氯化碳，天津市科密欧化学试剂有限公司生产，批号：141102。橄榄油，上海嘉里食品工业有限公司生产。

2方法2.1分组、造模及给药SD大鼠60只，体重为(220±20)g,随机分为6组：分别为空白组、模型组、山甲复肝胶囊大、中、小剂量组(1.6g/Kg、0.8g/Kg、0.4g/Kg)及护肝宁片组(0.96g/Kg),每组10只。参考文献方法[1]进行造模，空白组以纯净水灌胃，其余各组灌胃四氯化碳(CCl4)50%橄榄油悬混液，按照1mL/Kg剂量，每周2次，连续5周。造模同时进行药物干预，造模与给药(或给水)时间间隔4h以上。空白对照组和模型组每天灌胃纯净水，山甲复肝胶囊大、中、小剂量组给药剂量分别为1.6g/Kg、0.8g/Kg、0.4g/Kg，护肝宁片组给药剂量为0.96g/Kg，以上各组每日给药1次，给药(或给水)体积为10mL/Kg，连续5周。末次给药24h后处死全部动物，取血标本做生化检验，分离肝脏，取部分置于4%多聚甲醛固定，制备石蜡切片，进行HE染色，供病理学检查。

2.2观察指标及检测方法2.2.1使用血液生化仪常规检测血清相关指标：谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)。

2.2.2肝脏组织均以4%多聚甲醛固定，在每只大鼠肝脏的三个肝小叶上均取材，进行常规HE染色，观察肝组织病理学改变。评分分级标准具体如下：肝细胞脂肪变:0分，无炎症；1分，汇管无炎症、变性及少数点灶状坏死灶；2分，轻度碎屑坏死变性，点状坏死或嗜酸小体；3分，中度碎屑坏死，变性，融汇坏死或见桥接坏死；4分，重度碎屑坏死，桥接坏死范围广，累及多个小叶(多小叶坏死)。按上述分级标准，对每只大鼠肝脏的3个肝小叶进行病理评分，3个的平均值作为该大鼠的慢性肝炎病理评分。

2.3统计学方法采用SPSS16.0软件进行统计，各组数据采用均数±标准差表示，组间采用方差分析，各指标间比较采用t检验，均与模型组比较,P<0.05有统计学意义。

3结果3.1血清ALT、AST、ALP测定结果模型组大鼠的ALP、ALT、AST与空白组相比，均有显著性升高(P<0.01)，由此可以看出，造模大鼠肝细胞已造成了严重损伤。与模型组相比，阳性组、大剂量组、中剂量组均能显著性降低ALP(P<0.05,P<0.01)、ALT(P<0.01)和AST(P<0.01)。说明本品大、中剂量均具有保护肝细胞，减轻CCl4对肝细胞的损伤的作用。结果见表1。

3.2病理组织学检查空白组肝小叶结构完整，未见脂肪变性、炎症和气球样坏死；模型组肝细胞出现脂肪变，部分气球样变，散在少许炎症细胞浸润；大剂量组肝小叶结构完整，少量有炎细胞浸润；中剂量组肝小叶结构完整，少量有炎细胞浸润；小剂量组镜下可见脂肪变，散在少许炎症细胞浸润；阳性组肝小叶结构完整，少量有炎细胞浸润。山甲复肝胶囊各组各种病理改变均较CCl4模型组有所减轻，且随剂量增加而药物作用有增强的趋势，能够降低肝组织学评分，说明本品对慢性肝炎有一定的治疗作用。病理评分见表2，病理照片见图1。

表1　山甲复肝胶囊对慢性肝损伤大鼠ALP、ALT及AST的影响

注：与模型组比较△P<0.05 ,▲P<0.01

图1　山甲复肝胶囊对CCl4损伤大鼠肝组织病理形态改变的影响(HE×100)

组别剂量nHE染色评分空白组———100.00±0.00△模型组———102.20±0.32阳性组0.96g/Kg100.75±0.38△大剂量组1.6g/Kg100.38±0.47△中剂量组0.8g/Kg100.88±0.22△小剂量组0.4g/Kg101.88±0.44

注：与模型组比较△P<0.01

4讨论目前对于肝损伤的防治研究,多通过建立实验性肝损伤动物模型来进一步筛选治疗肝损伤药物、并探讨其作用机制。药物、酒精、化学物质等直接或间接诱导肝细胞生物膜系统发生脂质过氧化作用，活化细胞死亡程序等，出现以ALT、AST、ALP等指标升高为主要表现的各种肝功失常,其损伤过程大多与氧化应激和免疫有关。中医药在治疗肝损伤研究中表现出了稳定的疗效和独特的优势，因此加大中药治疗肝损伤的研究具有重要的现实意义[2-6]。

研究结果显示，山甲复肝胶囊1.6g/Kg、0.8g/Kg组ALT、AST、ALP较模型组明显降低，表明该药物使肝细胞得到了有效的保护,明显遏制了肝损伤的程度,同时病理结果显示出具有抑制肝纤维化的效果，提示该复方作用机制可能是抗肝纤维化作用方法，与药物直接减轻肝损伤、保护肝脏细胞、影响结缔组织代谢等多条途径发挥作用相关。

参考文献

[1]陈奇.中药药理研究方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2006:725-729.

[2]王欣.丹栀逍遥丸对肝损伤大鼠的影响[J].海南医学院学报2012,18(8):1040-1046.

[3]覃洪含，夏星，王勤，等.三叶香茶菜对大鼠慢性肝损伤的保护作用[J].时珍国医国药，2013,24(6):1372-1373.

[4]罗亦灵，石磊，王颖珏，等.复方龙葵颗粒对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的保护作用[J].中药药理与临床，2014，30(1)：105-109.

[5]黄若干，何飞，覃佩莉，等.黄根片对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的影响[J].中国药师，2014，17(8)：1285-1288.

[6]黄秀曼，杜钢军，孙婷，等. 过山蕨总黄酮对肝损伤的保护作用[J].中草药，2012,43(12):2458-2463.

(收稿2015-12-16；修回2016-01-05)

【中图分类号】R575

【文献标识码】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.05.050

△陕西中医肝肾病医院(西安 710000)