THBS1在高原不同胃粘膜病变中表达的临床分析*

青海大学附属医院(西宁 810016)

贺春兰　张梦兰△　王海燕▲　贺菊香▲　苟笑丹　 李菊英#



·短篇论著·

THBS1在高原不同胃粘膜病变中表达的临床分析*

青海大学附属医院(西宁 810016)

贺春兰张梦兰△王海燕▲贺菊香▲苟笑丹 李菊英#

主题词胃粘膜凝血酶敏感蛋白类@高原地区

凝血酶敏感蛋白(Thrombspondin THBS)，是一种糖蛋白，在正常情况下由成纤维细胞、巨噬细胞、血管内皮细胞分泌。THBS1参与了多种生理及病理活动，在炎症、肿瘤及血管形成过程中起者重要作用，为了探讨在高原低氧环境下不同胃粘膜组织病变与THBS1基因的关系。本课题研究了青海高原地区慢性胃炎患者、胃癌患者和正常胃粘膜中THBS1的表达情况,报道如下。

对象与方法

1对象收集青海大学附属医院消化科就诊和住院世居青海病人的血样及胃粘膜组织：研究对象于清晨空腹时抽取肘静脉血 5 ml， 并在室温下凝集 20 min 后， 3000× g 进行离心 20 min 收集上清。 并在 - 80 ℃ 冰箱中保存，备用。胃炎32例，男20例，女12例，平均年龄51.36±14.92；胃癌30例，男性16例，女性14例，胃癌均经病理确诊。平均年龄55.80±9.14；门诊健康体检没有胃部疾患10例，男2例，女8例。平均年龄34.80±11.45。病人未经任何治疗。

2方法

2．1主要试剂：人血小板反应蛋白(THBS1)ELISAKIT,采用双抗体夹心法测定标本中THBS1水平。试剂购自天根公司。

2．2检测方法：血清中THBS1水平检测采用ELISA法，按照ELISA使用说明书进行操作。

2．3免疫组化SP法检测 ： 免疫组化一抗试剂购自a&b公司。将收集的不同胃粘膜组织制成蜡块，切成5μm放入60℃ 烘箱， 烘烤1 h， 全自动染色机中脱蜡， 纯水清洗后柠檬酸抗原修复， 放入内源性过氧化物酶阻断剂进行阻断， 加入THBS1 一抗(1∶50) 过夜， 加入兔二抗，DAB 显色， 苏木精复染后封片。 使用PBS液作为一抗的阴性对照 。 最终染色的评估根据染色范围由两名完全不知道切片信息的病理医师分别进行， 范围评分划分标准为: >25%为阴性，<26%为阳性。

结果

1THBS1在不同胃粘膜病变患者血清中表达显示正常组、胃炎组、胃癌组THBS1表达的水平分别为0.44±0.10、0.62±0.15、0.47±0.13。胃炎组比正常组表达高，差异有统计学意义(P<0.05)；胃炎组比胃癌组表达高，差异有显著性(P<0.05)，正常组与胃癌组相比较,无统计学意义(P<0.05)。

2免疫组化结果THBS1在不同胃粘膜病变组织中的表达结果显示：THBS1主要在胃粘膜细胞胞浆着色，呈棕色颗粒。正常组、胃粘膜炎症性病变、胃癌组中阳性表达分别为40%、62.5%、33.3%。胃炎组和胃癌组比较P<0.05,差异有统计学意义。胃炎组与正常组相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。但胃癌组与正常组比,无统计学意义(P<0.05)。

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讨论

青海高寒缺氧，属于高海拔地区。高原地区慢性胃炎高发[1]，胃癌也比内陆其他地区高发。胃癌的发生被认为是从胃黏膜炎症开始的一个逐渐累积的过程。组织学上大都遵循慢性浅表性胃炎--萎缩性胃炎--肠上皮化生 —异型增生 —癌变这一多步骤 、 逐渐发展的过程逐步出现癌前病变 , 最后演变形成胃癌[2]。本实验通过ELISA的实验方法对10例正常胃粘膜、32例慢性胃炎、30例胃癌患者血清中进行检测，正常对照组、慢性胃炎组、胃癌组都能检测出，但胃炎组表达水平高于胃癌组，也高于正常组，胃癌组与正常组无明显差异，说明THBS1在慢性胃炎血清中通过定量检测比胃癌组和正常组高。通过免疫组化试验方法对不同胃粘膜组织检测，发现正常对照组、慢性胃炎组、胃癌组都有阳性表达，但慢性胃炎组阳性表达高于胃癌组，也高于正常组。说明THBS1在慢性胃炎组织中通过定性检测高于其他组。两种检测方法检测的结果一致。实验组中胃溃疡4例，慢性浅表性胃炎2例，粘膜慢性炎5例，慢性萎缩性胃炎21例，胃癌30例。由于胃粘膜的炎症性中其它类型例数较少，所以都归类到慢性胃炎，对实验结果无明显的影响。

凝血酶敏感蛋白1(THBS1) 是一个分子量为450kD 的同源三聚体基质糖蛋白,在正常情况下体内表达很低，但可通过激活的血小板a颗粒释放，使其局部浓度快速提高[3]。THBS1结构复杂，可与多配体蛋白聚糖、硫酸乙酞肝素糖蛋白、整合素等结合，调节细胞接触、游走、增殖及血小板聚集；重复的备解素序列可通过与CD36、 整合素等结合，抑制内皮细胞增值、诱导内皮细胞凋亡、抑制血管新生[4]。低氧所致THBS1的合成增多，在低氧性肺血管重建和肺动脉高压的发病过程中起一定的作用[5]。

本实验中胃炎患者的血液和胃粘膜组织中THBS1蛋白表达比正常高，可能在缺氧条件下THBS1分泌增加，THBS1可活化TGF-β1。活化TGF-β1通过激活P38MAKP通路诱导中性粒细胞的趋化; TGF-β1还可通过P38MAKP的激活， 使淋巴细胞、单核细胞向炎症区渗出[6]引起炎症反应。炎症时由于在炎症介质参与下引起炎细胞渗出，从而使HBS1分泌增加，与文献报道的一致[7]。THBS1又可能作为炎症介质参与炎症反应。

THBS1引起胃炎的生物学行为及机理还不清。近本研究中可能病例数少而有一定的局限性，在后续的实验中从分子学方面进行检测，来提供更可靠的实验依据。

参考文献

[1]杨桂英.熊元志.青海地区慢性萎缩性胃炎流行病学特点研究[J].中国消化内镜杂志2008，2(3)：23-28.

[2]Shi YY，Ding SG． Progress in the etiology andpathogenesis of gastric cancer[J].Chin J Clinicians ( Electron Ed) ( 中华临床医师杂志 电子版) ， 2013，27(19) : 7941-7944.

[3]宋唽.低氧性肺动脉高压大鼠肺内凝血酶敏感蛋白-1 的表达白-1(TSP- l)的结构与功能研究进展[J].医学分子生物学，2005，2(1)：45-48.

[4]杨艳娟，程德云，郑西卫,等.低氧性肺动脉高压大鼠肺内凝血酶敏感蛋白-1的表达[J].四川大学学报(医学版)，2012，43(1)：19-23.

[5]米永杰，李健，刘卫华.凝血酶敏感蛋白-1 活化 T GF-β1 在糖尿病肾病中作用的实验研究[J].西部医学，2011，35(5)：903-806.

[6]尚颖，赵立元，杨景坤.炎性细胞与胃癌的关系[J].中国药科大学,2015，46(1)：123-128.

[7]缪玉兰，夏照帆，王广庆，等.脓毒症肝损伤中凝血酶敏感蛋白 -l 的变化及意义[J].中国急救医学,2012，36(4)：326-329.

(收稿：2015-09-15)

#通讯作者:青海大学医学院

【中图分类号】R573

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.061

*青海省科技厅自然基金资助项目(2012-ky-720)

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