免疫比浊法测定D-二聚体抗脂浊能力

陕西省咸阳市第一人民医院检验科(咸阳 712000)

薛　伟



·临床检验·

免疫比浊法测定D-二聚体抗脂浊能力

陕西省咸阳市第一人民医院检验科(咸阳 712000)

薛伟

摘要目的： 分析免疫比浊法测定D-二聚体及其抗脂浊的能力，了解该种方法的特点和脂血在其测定中的干扰程度。方法： 根据NCCLS文件，对免疫比浊法测定D-二聚体进行正确性实验、血浆样本测定和抗脂浊实验。结果： 在D-二聚体水平<1.5μg/ml时D/C、D/3两种检测模式结果具有统计学差异(P⟨0.05)；乳糜1200浊度对D-D浓度的免疫比浊结果具有负干扰且浊度在1200～4800范围内其负干扰成一次线性趋势。 结论： 免疫比浊法测定D-二聚体具有较好的效果，但在样本乳糜浊度较大时应充分考虑到甘油三酯对检测结果的影响并采取措施进行校正以保证结果的准确性。

主题词免疫法@D-二聚体 @抗脂浊能力

D-二聚体作为纤溶酶水解交联纤维蛋白后形成的特异性降解产物，其高敏感和高预测性使得它成为体内高凝状态和纤溶亢进、体内血浆凝血因子活化和纤维蛋白溶解系统作用启动的首选分子标记物[1]。免疫比浊法作为测定D-二聚体血浆水平的检测方法获得了广泛的应用[2]，但有研究表明此种方法易受脂血干扰。因此本研究根据NCCLS文件对免疫比浊法测定D-二聚体及其抗脂浊的能力进行了分析以了解该种方法的特点和血脂在其测定中的干扰程度。

材料与方法

1仪器与试剂选用法国Stago STA-R全自动血凝仪，配套D-二聚体试剂。

2分析样本质控定值血浆为法国Stago公司生产的原装正常和病理(STA-Liatest control N+P)质控血浆；患者血浆样本根据实验设计选取本院门诊、住院患者及健康体检者新鲜抗凝全血100例，血样用3.2% 109mmol/L枸缘酸钠抗凝，以3000r/min，离心10min分离出血浆。

3方法

3.1正确性实验:根据NCCLS EP15-A2文件对于精密度评价的要求，使用N值和P值的质控定值血浆连续测定10次并计算均值，观察结果是否在厂家提供的质控参考范围内。

3.2血浆样本测定:利用STAGO血凝分析仪的2种免疫比浊测量模式定量测量本研究收取的100份标本的D-二聚体水平。

3.3抗脂浊实验：根据NCCLS EP7-A文件，将包含甘油三酯的干扰血浆按100%、80%、60%、40%和20%稀释后与待测样本血浆进行1∶9比例的混合，重复3次测定样本的均值。

4统计学方法应用SPSS19.0进行统计学分析，分析方法包括t检验、线性回归分析，P⟨0.05表示差异具有统计学意义。

结果

1正确度质控定值血浆经测定后，正常水平(N值)的均值为0.28μg/ml，病理水平(P值)的均值为1.98μg/ml，结果在厂家提供的质控参考范围内，即N值0～0.5μg/ml，P值1.65～2.45μg/ml。

2血浆测定D/C模式对正常水平血浆的D-二聚体测定结果为0.71±0.091μg/ml，对病理水平血浆的D-二聚体测定结果为2.51±0.159μg/ml；用D/3模式进行检测时，正常水平血浆的D-二聚体测定结果为0.31±0.038μg/ml，对病理水平血浆的D-二聚体测定结果为2.9±0.096μg/ml。以D-二聚体水平1.5μg/ml为界，对100例数据进行t检验，结果显示，在D-二聚体水平<1.5μg/ml时两种检测模式的结果是有统计学差异的(t=8.46，P⟨0.05)，而D-二聚体水平>1.5μg/ml时两种检测模式的结果不具有统计学差异(t=0.22，P<0.05)，具体见表1。

表1　两种检测模式对两水平D-二聚体的检测结果

3抗脂浊实验不同乳糜浓度对D-二聚体的测定结果为，对照样本三次D-二聚体浓度分别为1.635、1.598和1.619μg/mL，均值为1.617±0.186；乳糜浊度为1200时，本三次D-二聚体浓度分别为1.529、1.438和1.517μg/mL，均值为1.495±0.049，乳糜1200浊度对D-D浓度的免疫比浊结果具有负干扰，具体结果见表2。根据研究结果，对不同乳糜浓度对D-二聚体测定的干扰影响进行回归分析成一次线性趋势，线性方程结果为：Y=1.596-0.0006694X。

表2　不同乳糜浓度对D-二聚体测定的干扰影响

讨论

血浆D-二聚体是交联纤维蛋白在纤溶酶作用下的降解产物，它在临床上有着广泛的应用[3]。测定血浆D-二聚体的方法目前应用最多的就是免疫比浊法[4]，它把D-D的单克隆抗体包被于乳胶颗粒上与样本中的抗原特异性结合从而使浊度增加，通过测定浊度的变化就能获得D-二聚体的浓度[5]。免疫比浊法具有高敏感性、较高特异性、较好阴性预测值、定量测量、快速稳定等优点，已被美国食品药品管理局批准用于肺栓塞、深静脉血栓性疾病排除诊断[6]。

本研究从正常和病理两个水平的质控定值血浆进行正确度实验，结果表明该方法的正确性较高；运用D/3、D/C两种模式测定D-二聚体水平，结果显示在D-二聚体水平<1.5μg/ml时两种检测模式的结果是有统计学差异的，而D-二聚体水平>1.5μg/ml时两种检测模式的结果不具有统计学差异；实验结果表明乳糜1200浊度对免疫比浊法检测有负干扰影响。随着浊度的升高，当乳糜浊度<4800时，不同乳糜浓度对D-二聚体测定的干扰成线性回归趋势，线性回归方程为Y=1.596-0.0006694X，提示用免疫比浊法测定D-二聚体时要考虑高血脂等患者脂浊对测定结果的影响。

免疫比浊法测定D-二聚体其结果可直接影响临床疾病判断，其中D/3模式为血凝分析仪的标准测定模式，而D/C模式是专业人员根据本院实际疾病情况设定的模式，主要用于标本的稀释[7]。在实际检测过程中，可以根据D-二聚体浓度，以1.5μg/ml为界，灵活选用两种模式以充分利用仪器检测特性、节约试剂成本[8]。此外，要考虑到乳糜对免疫比浊法测定D-二聚体的线性负干扰影响，通过完善标本采集运送及保存程序、严格甄别抗凝剂的选择与运用、对高浊度样本进行甘油三酯浓度检测并对相应D-二聚体结果进行校正等方法减少脂浊对免疫比浊法测定D-二聚体浓度结果的影响。

参考文献

[1] 官燕飞,彭建明,刘树沅,等.STA-R凝血分析仪检测D-二聚体的性能验证[J].国际检验医学杂志,2013,34(14):1875-1877.

[2] 马升俊.免疫比浊法检测血浆D-二聚体的性能评价[J].国际检验医学杂志,2013,34(5):602-604.

[3] 张勇，吉海明，王芳云,等.急性冠脉综合症患者血清脂联素、纤维蛋白原和D-二聚体的变化及临床意义[J].陕西医学杂志,2014,43(8):1044.

[4] 崔巍.从 D-二聚体检测体系的变更谈检验与临床沟通[J].检验医学,2015,30(4):311-313.

[5] 周静,孙家瑜,孙加冠.五种D-二聚体检测方法用于排除可疑静脉血栓栓塞症的临床评价[J].四川大学学报：医学版,2009,40(6):1078-1081.

[6] 许俊.胶乳凝集比浊法与荧光偏振免疫法检测卡马西平血药浓度的相关性分析[J].实验与检验医学,2014,32(4):453-454.

[7] 封莉,吴兴福,王凤平.浅析提高免疫比浊法测定D二聚体的准确性[J].血栓与止血学,2012,18(5):224-226.

[8] 聂滨,陶天陆.应用 EP7-A2文件评价免疫比浊法测定 D-二聚体抗脂浊能力[J].检验医学,2015,30(4):324-326.

(收稿：2015-11-28)

Evaluation on the anti-lipid turbidity capability of D-dimer by immunoturbidimetry

Department of Clinical Laboratory,the First People's Hospital of Xianyang(Xianyang 712000)

Xue Wei

ABSTRACTObjective：To analysis immune turbidimetric method determination of plasma D-dimer levels and the anti-lipid turbidity capability of D-dimer by immunoturbidimetry, in order to understand the characteristics and blood lipid in the determination of the degree of interference. Methods：According to NCCLS documents, use correct experiment, plasma sample determination and anti-lipid turbidity experiment on the immune turbidimetric method determination of D -dimer. Results： When the D-dimer levels <1.5μg/ml, the difference between detection mode D/C and detection mode D/3 are statistically significant difference (t=8.46,P< 0.05); chylous turbidity of 1200 has negative interference on the immune turbidimetric method determination of plasma D-D, when turbidity within 1200-4800, the scope of the negative interference show a linear trend. Conclusion：The immune turbidimetric method determination of D-dimer has a good effect, but if turbidity chyle is larger in sample, we should fully take into account the effects of hypertriglyceridemia on the test results and take measures to ensure the accuracy of the correction.

KEY WORDSImmunization@D-dimer@Anti-turbidity ability

【中图分类号】R392

【文献标识码】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.04.057