地黄饮子脑脊液药物化学研究

●周小丽 赵媛 关圆圆

地黄饮子脑脊液药物化学研究

●周小丽 赵媛 关圆圆

目的：研究地黄饮子脑脊液药物化学特性。方法：应用UPLC-MS分析地黄饮子用药后血清样品情况，对比不同样品结果，将血中移行成分、代谢产物与生药来源确定下来。结果：经分析发现家兔血清中有9个血中移行成分，有1个产生代谢产物，2个为黄饮子的原型成分，远志、五味子药物贡献最大，其次为山茱萸、肉芙蓉、附子、麦冬、石菖蒲。结论：深入研究地黄饮子血中移行成分与代谢情况，为药物正确使用提供了依据，有助于进一步分析药物有效成分与作用。

地黄饮子；脑脊液；药物化学

传统药物化学方法是中药血清药物化学的基础，使用现代科技，可以有效对口服中药后血清成分进行检测，对药效相关性进行研究，是一门研究中药药效的科学。地黄饮子最早出现在《黄帝素问宣明论方》记载中，用于痰浊上乏、元虚衰的治疗。当前，地黄饮子已被当成一种中药使用，从黄饮子成分着手，分析其中药血清药物化学，明确代谢产物，可将药效物质基础确定下来，为临床应用提供指导。

1 资料与方法

1.1 应用仪器

仪器：应用超高效液相色谱仪、三重四级杆串联质谱仪、UPLC-MS联用系统，应用XR-ODSII（3.0mm×65mm）色普柱（SHIMADZU），高速冷冻离心机（TGL-15G-C），H56MC型超声震荡仪；SK-I快速混合器[1]。药材与试剂：所有药材有熟地黄、山茱萸、五味子、石斛、肉桂、大枣、生姜、石菖蒲、薄荷等；甲酸胺与五味子醇甲适量。实验动物为家养白兔，体重1.7～3.2kg。

1.2 方法

（1）制备地黄饮子与单味药材取黄饮子8味药材，每个药材10g，各药材充分混合然后研磨成粉末，将研磨好的混合粉末放到烤箱中，烘烤片刻，使药物保持恒重，取2g粉末与单味药材粉末50g，放置在12mL的称量瓶内，滴入适量甲醇溶液，让甲醇充分浸泡30min，然后超声20min，分离出清液，保持2000r·min-1离心频率，12min后调整为0.55um滤膜，选取滤出液作为标本溶液。

（2）制备五味子甲醇对照溶液称重10mg的五味子，将其放置在40mL的称量瓶内，添加适当的甲醇溶液，充分摇晃量瓶，使溶液混合稀释[2]，得到对照溶液。

（3）制备血清样品。称取15g的黄饮子组方药材，混合后滴入1200mL的乙醇试剂，充分对药液进行浸泡，第二天对药液进行超声离心20min，过滤药液时应用3层纱布，对浓缩后的药液添加蒸馏水再次稀释，稀释出200mL药液作为复方灌胃药液。取单味药各10g，混合后添加乙醇溶液100mL，超声离心20min[3]，后使用纱布过滤，添加蒸馏水稀释出200mL，将此部分溶液作为单味药灌胃药液。

1.3 样本分析

取以上样品，在相同环境下应用UPLC-MS分析并确定血中移行成分与来源。

2 结果

2.1 对地黄饮子血中移行成分进行认定

对比地黄饮子复方血清样品与空白血清样品，绘制色谱图，对不同色谱段保留时间与分子峰数据进行分析，发现黄饮子复方血清样品中存在9个移动成分，其保留时间为6.12min，有510个相对分子质量的成分；保留时间为5.06min，其中有154个相对分子质量成分；保留时间6.02min，相对分子质量为215的成分[4]。图1为某段UPLC-MS分析提取离子色谱。

图1 地黄饮子复方给药血清与空白血清样品UPLC-MS分析提取离子色谱

2.2 地黄饮子血中移行成分来源

通过对比复方样本与单味药材样本、血清样本，可以对地黄饮子血中移行成分生药来源与归属进行辨别与确认。经过五味子样品、血清本品、无味子醇甲与对照样品的对比，6号五味子醇甲保留时间无差异，在相对分子质量上两者相同，可以确定生药来源于五味子醇甲（详见图2）。剩余地黄饮子血中移行成分归属与6号存在相似性。其中，1号成分进入血液以后，产生了代谢产物，而2号成分进入血液中的成为为石菖蒲；3号成分为远志；4号成为与5号成分分别来源于麦冬与远志与附子；7、8号成分来源于巴戟天与山茱萸[5]；9号成为来源于肉苁蓉。从以上来源药物上看，五味子与远志成分贡献最大。

图2 五味子醇甲、体外样本、血清样本、地黄饮子复方给药血清与空白血清样品UPLC-MS分析提取离子色谱

3 讨论

本次研究对黄饮子的血清药物化学成分与作用机制进行了阐明，分析了地黄饮子血中移行成分，发现远志与五味子是最重要的两个来源药材。地黄饮子最早出自《黄帝内经》的相关描述中，功效较多，以滋肾阴、开窍化痰、补肾阳为主可以有效治疗冠心病、脑血栓等心脑血管疾病；对中风、神经性皮炎以及脑血管意外有显著预防与治疗作用；五味子在生津、收汗以及涩精等方面有着显著效果，可有效改善中枢神经功能，预防心血管疾病，抗血栓的功效也非常显著，在抗镇静、催眠上功效已达到认可；药物成分中，远志的安神补脑与开窍化痰的效果显著，相关报道还显示消肿功效与远志成分有关。而对神经的作用则体现在体力、智力提升，镇静、抗惊厥、抗痴呆上。本次研究显示，地黄饮子中五味子与远志发挥了重要功效，也是地黄饮子药效显著的重要原因。本次研究证实了这一结论，可以确定五味子与远志是治疗心脑血管疾病的有效药物、这一结果为药效判定提供了更为科学依据，为其他相关研究提供了更为可靠支持。

综上所述，经过以上临床研究表明，地黄饮子在治疗心脑血管疾病与老年痴呆上作用显著，可有效改善中枢神经功能，减少产生退行性疾病，减少认知障碍。

（作者单位：新乡医学院三全学院）