不同受精方式的囊胚发育速度及其临床结局分析

唐永梅，韦继红，韦立红，牟联俊，徐丽湘，秦祖兴，唐　妮

(广西柳州市妇幼保健院，广西 柳州 545001)



不同受精方式的囊胚发育速度及其临床结局分析

唐永梅，韦继红，韦立红，牟联俊，徐丽湘，秦祖兴，唐妮

(广西柳州市妇幼保健院，广西 柳州 545001)

[摘要]目的探讨不同受精方式对囊胚发育速度的影响及不同发育速度的囊胚对临床结局的影响。方法回顾性分析行囊胚培养和移植的患者资料，按受精方式不同分常规体外受精(IVF)组和卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)组，观察2组新鲜培养周期的囊胚形成率、移植囊胚后的临床妊娠率、种植率以及冻融囊胚不同胚龄的移植结局，比较不同发育速度的囊胚在新鲜周期和冻融周期的移植结局。结果具有相同D3优胚率时，IVF组囊胚形成率和D5形成率明显高于ICSI组，新鲜囊胚和冻融囊胚移植临床妊娠率和种植率比较差异无统计学意义(P均>0.05)。D5形成的囊胚比D6形成的囊胚优胚率、囊胚种植率及妊娠率高(P均<0.05)。结论受精方式影响囊胚发育速度，IVF受精可以提高囊胚形成率和D5囊胚形成率；囊胚发育速度影响囊胚移植的临床结局，移植D5囊胚比移植D6囊胚的妊娠率及种植率高。

[关键词]受精方式；囊胚形成率；妊娠率；种植率

在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)治疗中，移植胚胎的发育潜能决定着妊娠结局。目前根据形态学评估指标外，还要结合每个发育阶段胚胎的专有特征综合评价，以期准确评价胚胎活力，挑选有活力的胚胎进行移植。其中胚胎分裂速度是胚胎发育潜能的重要指标。大样本研究发现，发育停滞或卵裂过慢、过快胚胎中染色体异常发生率较正常胚胎显著升高[1-2]。在稳定的胚胎培养微环境下，胚胎体外培养延长至囊胚期，以囊胚的形成及形态学特征反映胚胎的生命力[3]，而囊胚形成率是衡量胚胎质量和发育潜力的金标准[4]。本研究探讨了不同受精方式对囊胚发育速度的影响及不同发育速度的囊胚对临床结局的影响，旨在为有效提高临床妊娠率，改善胚胎移植方案提供实验依据。

1临床资料

1.1一般资料回顾性分析2013年1—12月在柳州市妇幼保健院生殖中心行IVF/ICSI治疗的不孕症患者资料，根据受精方式不同分为IVF组和ICSI组，然后根据移植囊胚的胚龄分为D5组和D6组。冻融囊胚移植周期入选标准为仅移植D5囊胚或D6囊胚的周期共计611个周期纳入本研究。冻融囊胚内膜准备方法采用自然周期、激素替代周期或促排卵周期。

1.2囊胚培养和移植囊胚培养基采用序贯培养基(瑞典Vitrolife)，D3胚胎从G1培养液移入G2培养液，于37 ℃，6%CO2和5% O2环境培养。对形成的囊胚按照Gardner囊胚评分方法进行评级。持续观察D5和D6囊胚形成情况，形成3CC以上囊胚即可进行移植或冷冻。冷冻和解冻试剂均采用玻璃化试剂(美国Medicult)。解冻后的囊胚在囊胚培养滴中培养2 h后重新扩张到具有正常内细胞团和滋养外胚层形态视为存活。移植囊胚数不超过2个。囊胚移植后12 d检测血、尿阳性者确认为生化妊娠，囊胚移植后28 d B超检查发现有妊娠囊视为临床妊娠。妊娠者予以黄体酮支持10～12周。

1.3观察指标观察不同受精方式的新鲜培养周期的囊胚形成率、移植囊胚后的临床妊娠率、种植率以及冻融囊胚不同胚龄的移植结局，比较不同发育速度的囊胚在新鲜周期和冻融周期的移植结局。

1.4统计学方法采用SPSS 13.0统计软件进行统计处理，均数比较采用t检验，率的比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1患者一般情况纳入研究的1 222例患者的1 227个囊胚培养周期，其中IVF有1 036个周期，ICSI 191个周期。行新鲜囊胚移植249个周期，其中移植D5囊胚218个周期，移植D6囊胚31个周期；行冻融囊胚移植611个周期，其中移植D5囊胚344个周期，移植D6囊胚267个周期。

2.2不同受精方式的新鲜囊胚培养及移植结局2组具有相同D3优胚率，IVF组的囊胚形成率和D5形成率显著高于ICSI组，2组D5优胚率均显著高于D6优胚率(P均<0.05)，但2组临床妊娠率和种植率比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

2.3不同受精方式的冻融囊胚移植结局2组同级别囊胚移植具有相似的临床妊娠率、种植率和流产率(P均>0.05)。见表2。

表1　不同受精方式的新鲜囊胚培养及移植结局　%

表2　不同受精方式的冻融囊胚移植结局

2.4新鲜周期和冻融周期D5和D6囊胚移植妊娠结局比较在新鲜移植周期中，D5组囊胚优胚率、临床妊娠率、种植率均显著高于D6组(P均<0.05)，而早期流产率差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。在冻融胚胎移植周期中，D5组囊胚优胚率、临床妊娠率和种植率与D6组比较差异有统计学意义(P均<0.05)，而早期流产率差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

3讨论

表3　新鲜周期D5和D6囊胚移植妊娠结局的比较

表4　冻融周期D5和D6囊胚移植妊娠结局的比较

胚胎体外培养成囊胚的过程有助于胚胎的自我筛选，囊胚期移植使胚胎发育和子宫内膜的生理阶段同步化，宫颈黏液减少，利于移植操作，同时缩短了胚胎植入宫腔后进一步发育与着床之间的间隔，且子宫收缩逐渐减少，可减少胚胎排出体外的机会[5]。选择高质量的囊胚移植不但可以显著提高胚胎着床率及临床妊娠率，还可减少多胎妊娠发生的风险[6]。

胚胎的质量影响囊胚形成率、囊胚质量和种植率。随着胚胎碎片的增多，囊胚形成率降低，囊胚的细胞数目尤其是滋养外胚层数目减少。胚胎碎片会影响细胞之间的连接，干扰细胞的融合、囊腔和囊胚的形成；碎片释放的有毒物质会损伤其邻近的细胞，使其凋亡；碎片还会减少胞质的体积，耗竭胚胎发育所需要的细胞器，造成卵裂球和/或胞浆的损失；囊胚形成率与卵裂速度成正比，卵裂速度较快的胚胎更容易形成优质囊胚[7-9]。Loutradi等[10]报道严重畸形精子在受精率、卵裂率、优胚率等方面明显低于非严重畸形精子组。因为畸形精子的超微结构的异常、内部DNA的微缺失等导致的功能缺陷通过ICSI后将影响胚胎的发育潜能，从而使受精率、卵裂率、优胚率等有所下降。这也解释了本研究结果新鲜周期胚胎培养囊胚时，具有相同D3优胚率，IVF组的囊胚形成率和D5囊胚形成率明显高于ICSI组的原因，但不同受精方式获得的相同级别的冻融囊胚移植可获得相似的妊娠率和种植率。

囊胚发育速度反映了胚胎质量和发育潜能。岳超敏等[11]通过单囊胚移植周期亦发现，第5天发育为囊胚的胚胎比第6天的囊胚具有较高的种植率。Kovalevsky等[12]比较D5、D6和D7 3组囊胚，发现D5囊胚种植率、临床妊娠率和持续妊娠率明显高于D6、D7组的囊胚，认为囊胚发育速度能够影响囊胚移植的结局。本研究结果显示，在新鲜周期囊胚培养中不论受精方式， D5形成的囊胚均比D6形成的囊胚优胚率高，意味着囊胚形成延迟的胚胎质量较差，所以移植囊胚时，具有较高优胚率组的临床妊娠率和种植率更高，当囊胚优胚率相似时，D6囊胚与D5囊胚具有相似的妊娠率，Alfaraawati等[13]利用滋养层活检对囊胚进行非整倍体发生率时发现，发育延迟的囊胚非整倍体率显著高于正常发育组。这也解释了移植D5囊胚比D6囊胚可获得更好的妊娠结局的原因之一。但Sunkara等[14]对1995—2008年的相关冻融囊胚移植的研究资料进行meta分析得出结论：D5囊胚比D6囊胚具有较高的临床妊娠率和持续妊娠率，但在评分一致的情况下，D6囊胚与D5囊胚具有相似的妊娠率。这也提示在行冻融囊胚移植时既要考虑胚龄，同时还应该参考囊胚评级。囊胚培养是体外筛选胚胎的好方法，但目前认为原核期胚胎发育成囊胚并不完全说明它具有生存能力，囊胚培养体系还不够完善，囊胚的评分标准还有待细化，体外延长培养过程的不利环境可以影响胚胎的生长发育，降低胚胎冷冻率，甚至会增加患者无囊胚移植的风险。

总之，胚胎培养体外延长至囊胚期使胚胎的发育潜能在体外得到进一步筛选，囊胚移植更符合生理要求，可减少移植胚胎数量、降低多胎妊娠率但不降低临床妊娠率。囊胚的发育速度及形态学特征可反映胚胎的生命力，囊胚形成率可衡量胚胎质量和发育潜力，这是在我们进行胚胎移植和冻融胚胎移植时要考虑的因素。在人类辅助生殖技术上我们要尽可能地选择接近生理条件的体外受精方式，以最大限度地保护好卵子的发育潜能，同时还要选择发育速度正常的健康胚胎移植，使辅助生殖技术更好地为人类造福。

[参考文献]

[1]Magli MC,Gianaroli L,Ferraretti AP,et al. Embryo morphology and developmeare dependent on the chromosomal complenment[J]. Fertil Steril,2007,87(3):534-543

[2]Rehman KS,Bukulmez O,Langley M,et al. Late stages of embryo progression are a much better predictor of clinical pregnancy than early cleavage in intracytoplasmic sperm injection and in vitro fertilization cycles with blastocyst-stage transfer[J]. Fertil Steril,2007,87(5):1041-1052

[3]Papanikolsou EG,Camus M,Kolibianakis,et al. In vitro fertilization with single blastocyst-stage versus single cleavage stage embryos[J]. N Engl J Med,2006,354(11):1139-1146

[4]Luna M,Copperman AB,Duke M,et al. Human blastocy morphological quality is significantly improved in embryos classified as fast on day 3(>or=10 cells),bringing into question current embryo logical dogma[J]. Fertil Steril,2008,89(2):358-363

[5]Mangalraj AM,Muthukumar K,Aleyamma T,et al. Blastocyst-stage transfer vs cleavage stage emberyo transfer[J]. Hum Reprod Sci，2009,2(1):23-26

[6]Racowsky C,Combelles CM,Nureddin A,et al. Day 3 and day 5 morphological predictors of emberyo viability[J]. Reprod Biomed Online,2003,6(3):2634-2643

[7]Hardy K,Stark J,Winston，R M. Maintenance of the inner cell mass in human blastocysts from fragmented embryos[J]. Biol Reprod,2003,68(4):1165-1169

[8]Eftekhari-Yazdi P,Valojerdi M R,Ashtiani S K,et al. Effect of fragment removal on blastocyst formation and quality of human embryos[J]. Reprod Biomed Online,2006,13(6):823-832

[9]Neuber E,Rinaudo P,Trimarchi J R,et al. Sequential assessment of individually cultured human embryos as an indicator of subsequent good quality blastocyst development[J]. Hum Reprod,2003,18(6):1307-1312

[10] Loutradi K E,Tarlatzis B C,Goulis D G,et al. The effects of sperm quality on embryo development after intracytoplasmic sperm injection[J]. J Assist Reprod Genet,2006,23(2):69-74

[11] 岳超敏，方丛，宫晓，等. 囊胚解冻过夜培养后对妊娠结局的影响[J]. 中山大学学报：医学科学版，2013,34(3)：415-421

[12] Kovalevsky G,Carney SM,Morrison LS,et al. Should embryos developing to blastocysts on day 7 be cryopreserved and transferred :an analysis of pregnancy and implantation rate[J]. Fertil Steril,2013,100(4):1008-1012

[13] Alfaraawati S,Fragouli E,Colls P,et al. The relationship between blastocyst morphology ,chromosomal abnormality,and embryo gender[J]. Fertil Steril,2011,95(2):520-524

[14] Sunkara SK,Siozos A,Botton VN,et al. The influence of delayed blastocyst formation on the outcome of frozenthawed blastocyst transfer:a systematic review and meta-analysis[J]. Hum Reprod,2010,25(8):1906-1915

Analysis of growth speed of blastaea and clinical outcomes of different fertilization type

TANG Yongmei, WEI Jihong, WEI Lihong, MOU Lianjun, XU Lixiang, QIN Zuxing, TANG Ni

(Liuzhou maternal and child health hospital, Liuzhou 545001, Guangxi, China)

Abstract:Objective It is to explore the effect of different fertilization type on growth factor of blastaea and the effect of different speed on clinical outcomes. Methods The data of patients accepted blastaea culture and transplantation were retrospectively analyzed. They were divided into normal in vitro fertilization (IVF) group and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) group according to the fertilization. The production rate of blastaea in fresh culture stage, clinical pregnant rate after blastaea transplantation, implantation rate and transplantation outcome of different embryonic age of frozen-thawed embryo were observed, the implantation results of embryo with different growth speed between fresh culture stage and frozen-thawed stage were compared in both groups. Results When with the same D3 high qualified embryo rate, the production rate of blastaea and D5 production rate in IVF group were higher than that in ICSI group, there was no significant difference in clinical pregnant rate and implantation rate between fresh blastaea and frozen-thawed ones (P>0.05). The high qualified embryo rate, implantation rate and pregnant rate of blastaea in D5 were higher than that in the ones in D6(P<0.05).Conclusion Fertilization type could influence the growth speed of blastaea, IVF could increase the production rate of blastaea and D5 production rate; blastaea growth speed could influence clinical outcome of blastaea transplantation, D5 blastaea's pregnant rate and implantation rate were higher.

Key words:fertilization type; production rate of blastaea; pregnant rate; implantation rate

[收稿日期]2015-03-30

[中图分类号]R711.6

[文献标识码]A

[文章编号]1008-8849(2016)08-0813-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.08.005

[基金项目]广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(Z2013604)

[作者简介]唐永梅，女，副主任医师，在职研究生，研究方向为生殖医学实验室技术。