高效液相色谱法测定熟肉中罗丹明B染料结果不确定度的评定

刘晓琳，花　锦，傅英文，高媛惠，杜利君

（山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心，山西太原　030024）



高效液相色谱法测定熟肉中罗丹明B染料结果不确定度的评定

刘晓琳，花锦，傅英文，高媛惠，杜利君

（山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心，山西太原030024）

摘要：因检测需要，制定了实验室非标准方法“高效液相色谱法测定熟肉制品中罗丹明B的含量”，按照测定方法和程序进行熟肉中罗丹明B的测定，对其不确定度进行分析和评估，并根据评估结果提出使用和改进本非标准方法的建议。

关键词：高效液相色谱法；熟肉制品；罗丹明B；不确定度；评定

0　引言

罗丹明B（Rhodamine B）又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料。美国曾对该物质进行了研究，显示其具有较强致癌性。1993年起在欧美一些国家和地区也已明令禁止用于食品中[1]，日本也是明令禁止使用该物质，曾经用作食品添加剂的我国也于2008年明确规定不允许作为食品添加剂及食品染色。由于罗丹明B具有持久鲜艳的颜色特性，于是有商贩在加工熟肉时非法添加罗丹明B来改善熟肉的品相。本文根据实验室非标制定的方法，对测定熟肉中罗丹明B染料结果的测量不确定[2]进行了评定。评定从2个方面进行，即方法重复性的不确定度和方法数学模型中涉及各个分量的不确定度。

1　试验部分

试样经乙酸乙酯-环己烷溶剂提取，经过凝胶色谱净化系统（GPC）净化，最后用高效液相色谱法测定和确证，采用外标峰面积法定量。

2　被测量的数学模型

式中：Y——试样中罗丹明B的含量，mg/kg；

A——样液中罗丹明B的峰面积，muv；

As——标准工作液中罗丹明B的峰面积，muv；

cs——标准工作液中罗丹明B质量浓度，μg/mL；

V——样液的最终定容体积，mL；

m——质量，kg。

3　分析和量化不确定度分量

3.1重复性不确定度评定

熟肉中罗丹明B染料经提取、GPC净化浓缩和定容，再用高效液相色谱法测定，每一环节都可能会引入不确定度。要一步一步地找到其不确定度的来源很困难，一般情况下可采用方法中确认的试验数据（重复性）进行统一评定。

对方法的重复性进行了确证，方可使用方法，熟肉样品添加罗丹明B，质量浓度为0.005 mg/kg，依照标准操作步骤重复试验10次，标准偏差为0.012 mg即重复性u（rep）=0.012 mg，试验中不包括全部实验室的偏倚分量，如果能够产生偏倚的量（试样的质量），应对其进行单独的评定。

3.2数学模型中所涉及分量的不确定度

3.2.1质量的不确定度

称取样品3 g，使用分度值为0.01 g的天平。独立的不确定度分量来自天平的校准，其重复性已包括在回收率试验当中。所用天平需经检定合格，根据JJG 98[3]，其最大的允许差为±0.01 g，按照矩形分布处理，以下为引入的标准不确定度：

3.2.2体积的不确定度

该方法由体积的不确定度主要源于校准和温度。

（1）校准。该方法的定容体积为5.0 mL，定容体积的准确性直接影响到最终的结果。用移液枪获得该体积，按照JJG 646—2006[4]，A级5 mL的移液枪最大允许差为0.02 mL，按照三角分布处理，以下为引入的标准不确定度：

（2）温度。温度在20±4℃变化，实验室用水的膨胀系数为2.1×10-4，以下为引入的标准不确定度：

（3）体积合成的不确定度。

（2）标准工作液配制引入的不确定度。在已校准的万分之一天平上称取标准品，用A级100 mL的容量瓶配制。在稀释过程中，使用了100 mL容量瓶、1 mL移液枪2次。

（3）体积。所用A级100 mL容量瓶的最大允许差为±0.10 mL，1 mL移液枪的最大允许差为±0.008 mL，由此引入的不确定度分别为：

3.2.3标准工作液浓度引入的不确定度

（1）标准品的纯度。标准物质罗丹明B的纯度为98%±1.0%，使用均匀分布处理，以下为引入的标准不确定度：

稀释过程中，移液枪和容量瓶中的溶液基本处于相同温度，所以可忽略温度带来的影响。

（4）质量。使用减量法来称量标准品的质量，不确定度的主要来源是天平的校准与称量中的变动性，称量中的变动性归并于重复标准偏差中。而天平校准引入的不确定度来自天平的线性、分辨力2个方面，因为2次称量的质量值处于很窄的范围内，所以分辨力所带来影响可忽略不计。

根据天平的线性为±0.15 mg，采用矩形分布处理，以下为引入的标准不确定度：

由减量法涉及的2次独立称量，以下为天平校准引入的标准不确定度：

标准工作液浓度的不确定度合成

按照公式计算标准工作液浓度合成的不确定度：

3.2.4标准工作液峰面积的不确定度

标准工作液的重复性已被包含于回收率的不确定度之中，峰面积偏倚的不确定度由仪器校准引入。来自仪器校准证书上仪器的衰减器相对误差为0.8%，使用均匀分布处理，以下是峰面积的相对标准不确定度：

3.2.5样品峰面积的不确定度

同3.2.4中所述，样品峰面积的相对不确定度u（A）同样为0.004 6。

3.2.6进样量的不确定度

被测量的计算公式中并没有涉及进样量，但实际使用了它们的比值。采用同一进样器等体积进样，比值变动性归并到重复性考虑，重复性的不确定度已包含于回收率。注入标准工作液和样品时温度变化不大，温度的影响可以忽略。由于2个进样量的强相关性，使得校准对体积比值的影响为0。

3.2.7数学模型涉及量合成的不确定度

通过以下计算得到：

3.3计算合成的不确定度

方法重复性引入的不确定度与数学模型中各量的合成不确定度是2个不相关的量，因此被测量的合成不确定度为：

通过计算得出：

4　测量结果及其不确定度的报告

取包含因子k=2计算扩展不确定度为uRhodamine= 0.04 mg/kg，检测结果为罗丹明B 0.26±0.04 mg/kg。

5　结论

为了有效提高测试结果的准确性，严格控制不确定度贡献大的、占主导地位的分量，严格控制这些分量代表的操作环节，可以有限地降低测量不确定度u。

不确定度与测试相关的各个因素，如方法、环境、设备等有很多关系，体现了测试状态和水平；而测试方法的重复性，仅仅表示几次或几组结果的简单比较限制，不确定度的评估已包含了再现性[5]，在合格判定中也存在困难并无法体现检测的真值信息。

参考文献：

［1］中华人民共和国重庆出入境检验检疫局. SN/T 2430—2010进出口食品中罗丹明B的检测方法［S］.北京：中国标准出版社，2010.

［2］中国计量科学研究院. JJF 1059—1999测量不确定度评定和表示［S］.北京：中国计量出版社，1999.

［3］中国计量科学研究院. JJG 98—1990中华人民共和国计量检定规程非自动天平（试行）［S］.北京：中国计量出版社，1990.

［4］中国计量科学研究院. JJG 646—2006中华人民共和国国家计量检定规程［S］.北京：中国计量出版社，2006.

［5］刘智敏.实验室认可中的不确定度和统计分析［M］.北京：中国标准出版社，2007：65.

Estimation of Uncertainty in Determination of Rhodamine B in Cooked Meat with HPLC

LIU Xiaolin，HUA Jin，FU Yingwen，GAO Yuanhui，DU Lijun
（Shanxi Exit/Entry Inspection and Quarantine Bureau，Taiyuan，Shanxi 030024，China）

Abstract：Non- standard laboratory method on determination of Rhodamine cooked meat with HPLC is developed for the detection. Acorrding to the determination methods and procedures，the content of Rhodamine cooked meat is determined. Uncertainty of measurement is analyzed and evaluated，suggestions based on the assessment results are proposed for applying and improving the non- standard method.

Key words：HPLC；cooked meat；Rhodamine B；uncertainty；estimation

作者简介：刘晓琳（1988—），女，本科，助理工程师，研究方向为食品安全。

收稿日期：2015- 10- 21

文章编号：1671- 9646（2016）03b- 0039- 02

中图分类号：TS251.7

文献标志码：A

doi：10.16693/j.cnki.1671- 9646（X）.2016.03.038