对叶大戟总多酚超声提取工艺的研究

2016-05-18王小新周晓英新疆乌鲁木齐市中医医院南门二部药剂科乌鲁木齐8000新疆师范大学化学化工学院乌鲁木齐80054新疆医科大学药学院乌鲁木齐800

新疆医科大学学报 2016年3期

王小新，刘　冲，赵　璐，周晓英(新疆乌鲁木齐市中医医院南门二部药剂科，乌鲁木齐　8000;新疆师范大学化学化工学院，乌鲁木齐　80054;新疆医科大学药学院，乌鲁木齐　800)

对叶大戟总多酚超声提取工艺的研究

王小新1，刘冲2，赵璐3，周晓英3
(1新疆乌鲁木齐市中医医院南门二部药剂科，乌鲁木齐830001;2新疆师范大学化学化工学院，乌鲁木齐830054;3新疆医科大学药学院，乌鲁木齐830011)

摘要:目的研究优选对叶大戟总多酚乙醇超声提取的工艺。方法采用单因素考察及正交试验设计，以没食子酸的含量为考察指标优选对叶大戟总多酚提取工艺。结果对叶大戟总多酚超声提取工艺选择为70%的乙醇，药液比1∶40，超声时间30 min，超声温度40℃。结论此方法提取对叶大戟中总多酚效率高、结果稳定。

关键词:超声提取;对叶大戟;总多酚;正交试验

Study on ultrasonic extraction procedure of total polyphenols in Euphorbia sororia A．

WANG Xiaoxin1，LIU Chong2，ZHAO Lu3，ZHOU Xiaoying3
(1Department of Pharmacy，Branch of Nanmen，Xinjiang TCM Hospital of Urumqi，Urumqi830001，China;2School of Chemistry and Chemical Engineering，Xinjiang Normal University，Urumqi830054，China;3School of Pharmacy，Xinjiang Medical University，Urumqi830011，China)

Abstrac:Objective To optimize the ethanol ultrasonic extraction process for total polyphenols from Euphorbia sororia A．M ethods By using single－factor test and orthogonal test design，put the content of gallic acid as investigation index to optimize the extraction process for total polyphenols from Euphorbia sororia A．Results The ultrasonic optimum condition for the extraction of total polyphenols from Euphorbia sororia A was 30 min at 40℃with the amount of70%ethanol，and 1:40 of solid－liquid ratio．Conclusion The ultrasonic optimum condition was efficient and stable．

Keywords:ultrasonic extraction;Euphorbia sororia A．;total polyphenols;orthogonal test

维药对叶大戟(Euphorbia sororia A．)为大戟科大戟属一年生草本植物，以全草入药，主要分布于我国新疆和田和中亚地区，在维吾尔医中是一味常用药材，具有利水消肿、降压清脑、泻下杂虫的功效，多用于大便秘结、尿频、高血压头痛、肝硬化、水肿以及疥疮肿痛等病症［1］。对叶大戟中主要含有多酚、黄酮类化合物，以山柰酚3-O-吡喃葡萄糖苷、莨菪亭、β-谷甾醇为代表的多酚类成分是对叶大戟抗菌、降血脂、抗衰老和抗病毒的主要有效成分［2－3］。为了充分提取对叶大戟中的有效成分，采用单因素考察及正交试验设计［4－7］，本研究对对叶大戟中的总多酚提取工艺进行了研究，确定了适合对叶大戟中总多酚提取的工艺，报道如下。

1　仪器与材料

1．1实验仪器U-3310型紫外可见分光光度仪(日本株式会社日立高新技术那珂事业所); KQ2200DE型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司);Anke TDL-40B离心机(上海安亭科学仪器厂);DG160C型中药粉碎机(浙江省瑞安市春海药材器械厂);FA1004N电子天平(上海菁海仪器有限公司)。

1．2实验材料没食子酸标准品(成都市科龙化工试剂厂，批号:20130415);对叶大戟药材(新疆奇康哈博维药有限公司，批号:130816)，Folin-Cioealteu试剂(磷钼钨酸试液自制)，无水乙醇、碳酸钠均为分析纯，水为去离子水。

2　方法与结果

2．1对照品溶液的制备精密称取没食子酸标准品10mg于100 mL棕黄色容量瓶中，蒸馏水溶解定容至刻度，浓度为0．1 mg/mL，备用。

2．2供试品溶液的制备精密称取干燥的对叶大戟药材粉末1 g，置于100mL锥形瓶中，加入60%的乙醇溶液30 mL，温度30℃，时间30 min，功率100 W，频率40 KHz，过滤，将滤液转移至100 mL容量瓶中，去离子水定容至刻度，备用。

2．3最大吸收波长的测定取对照品溶液和供试品溶液各1 mL于25 mL比色管中，加入F-C试剂1 mL，再加入质量分数为20%的碳酸钠溶液2．0 mL，用去离子水定容至刻度线，摇匀，放置在50℃恒温水浴锅中，水浴40 min，在紫外波长500～800 nm范围扫描，确定最大吸收波长为758 nm。

2．4标准曲线的配制与线性关系精密吸取没食子酸对照品溶液0．1、0．2、0．3、0．4、0．5、0．6 mL置于10 mL棕色容量瓶中，按照“2．3”项下方法测定。以吸光度A为纵坐标，标品浓度C作为横坐标作图，并制作回归曲线，得到回归方程A=173．7C－0．004 3，r=0．999 1。按M(mg)=C×25 mL×4式进行含量计算，在0．001～0．006 mg/mL浓度范围内与没食子酸测定的吸光度A的线性回归良好。

2．5回收率试验取已知含量的样品6份，每份精密称取1 g，精密加入一定量没食子酸对照品溶液，按照“2．2”项下的方法制备供试品溶液，按照“2．3”项下方法测定，结果没食子酸平均回收率为97．48%，RSD为2．10%。

2．6单因素试验

图1　乙醇浓度对对叶大戟总多酚提取率的影响

2．6．1乙醇浓度对提取率的影响精密称取1 g药材5份，乙醇浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%，药液比1:30，超声40 min，超声温度50℃，超声提取2次，计算提取率。结果乙醇浓度为70%时，总多酚提取率最高，见图1。 2．6．2超声温度对提取率的影响精密称取1 g药材5份，乙醇浓度为70%，药液比为1:30，超声40 min，超声温度分别20℃、30℃、40℃、50℃、60℃进行超声提取，提取2次，计算提取率。结果超声温度为40℃时，总多酚提取率最高，见图2。

图2　超声温度对对叶大戟总多酚提取率的影响

2．6．3药液比对提取率的影响精密称取1 g药材5份，乙醇浓度70%，以药液比分别为:1:10、1:20、1:30、1:40、1:50，超声30 min，超声温度40℃，提取2次，计算提取率。结果药液比1:40时，总多酚提取率最高，见图3。

图3　药液比对对叶大戟总多酚提取率的影响

2．6．4超声时间对提取率的影响精密称取1 g药材5份，乙醇浓度70%，药液比1∶40，超声温度40℃，分别超声20、30、40、50、60 min，提取2次，计算提取率。结果提取时间为40 min时，总多酚提取率最高，见图4。

图4　时间对对叶大戟总多酚提取率的影响

2．6．5正交试验优化选择对叶大戟总多酚提取条件以乙醇浓度、药液比、超声温度和超声时间设计为正交试验，由此建立正交试验表(表1)。各因素对对叶大戟总多酚提取的影响主次顺序为C＞D＞A＞B，即超声温度＞提取时间＞乙醇浓度＞药液比。超声温度和提取时间为主要影响因素，乙醇浓度和药液比次之，最佳提取工艺为A2B2C3D1，即体积分数70%的乙醇，药液比为1:40，超声温度40℃，超声时间为30 min，见表2、3。

表1　正交设计因素水平表

表2　正交试验设计表及结果

表3　方差分析

2．6．6总多酚最佳工艺提取验证试验为考察上述工艺的稳定性，精密称取1 g药材，按照该工艺条件A2B2C3D1进行重复性试验3次，平均含量为11．163mg/g，RSD为0．049%，说明该提取工艺稳定。

3　结论

本研究以乙醇浓度、药液比、提取温度和提取时间为影响因素，并采用正交试验优化工艺。筛选出对叶大戟中总多酚最佳提取工艺为A2B2C3D1，即体积分数70%的乙醇，药液比为1:40，超声温度45℃，超声时间为30 min。对最佳提取工艺进行验证试验，提取的对叶大戟中总多酚含量可达11．163 mg/ g，RSD为0．049%，实验结果表明A2B2C3D1提取工艺简单、稳定性好，可为对叶大戟总多酚提取研究提供理论依据。

参考文献:

［1］李同琴，郭秋红，田质芬．大戟科植物药用历史沿革及价值讨论［J］．中医药学刊，2003，21(8):1349-1350．

［2］外塔尼古丽·卡米力．维药对叶大戟化学成分的分离鉴定及其活性研究［D］．新疆大学:2013．

［3］汪洪涛，陈成，余芳，等．紫叶李果实总多酚的提取工艺及抗氧化活性研究［J］．河南农业科学，2013，42(10):153-156．

［4］涂宝军，马利华，秦卫东，等．超声波辅助提取山药皮多酚工艺及酚类的鉴别研究［J］．中国食品添加剂，2014，25(1): 120-126．

［5］种新禄，侯晓林，陈佳佳，等．诃子中总多酚粗提取工艺及药理作用研究［J］．光谱实验室，2014，29(3):65-67．

［6］胡建军，周冀衡，柴家荣，等．多指标正交试验数据的优化分析及应用［J］．中国烟草学报，2008，14(2):9-14．

［7］马婷婷，田呈瑞，李龙柱，等．响应曲面法优化黄参茎叶多酚的提取工艺及抗氧化活性［J］．食品与生物技术学报，2013，32 (11):1673-1680．

(本文编辑施洋)

［收稿日期:2015-9-10］

通信作者:周晓英，女，硕士，教授，硕士生导师，研究方向:天然药物的质量控制与活性的筛选研究，E-mail:zhouxiaoying4@163．com。

作者简介:王小新(1970－)，女，本科，主管药剂师，研究方向:中药学基础研究。