解整合素-金属蛋白酶33基因F1、L1、T1位点多态性与维吾尔族成人哮喘的相关性研究

米合热古力·司马义，胡　昕，王　晶，杨晓萍，李　鲁，王　菲，齐曼古力·吾守尔(新疆医科大学第一附属医院呼吸科，老年病科，健康体检中心，检验中心，乌鲁木齐　800;昌吉分院，新疆　昌吉　800)



解整合素-金属蛋白酶33基因F1、L1、T1位点多态性与维吾尔族成人哮喘的相关性研究

米合热古力·司马义1，胡昕1，王晶2，杨晓萍3，李鲁4，王菲5，齐曼古力·吾守尔5
(新疆医科大学第一附属医院1呼吸科，2老年病科，3健康体检中心，4检验中心，乌鲁木齐830054;5昌吉分院，新疆昌吉831100)

摘要:目的探讨解整合素-金属蛋白酶33基因(ADAM33)F1、L1、T1位点单核苷酸多态性与新疆维吾尔族成人支气管哮喘的相关性。方法采用限制性片段长度多态性方法分析206例维吾尔族成人支气管哮喘患者(哮喘组)与140例维吾尔族成人健康体检者(对照组)ADAM33基因F1、L1、T1位点单核苷酸多态性，并对其中部分进行基因检测验证。结果两组ADAM33基因T1位点3种基因型分布差异有统计学意义(χ2=10．472，P=0．005)，等位基因频率分布差异有统计学意义(χ2=11．192，P=0．001，OR=1．883，95%CI=1．296～2．737)。与AA基book=258,ebook=8因型比较，G等位基因的携带者(AG、AG+GG)基因型均能明显增加哮喘发生的危险(P分别为0．003、0．009，OR分别为3．889、1．815，95%CI分别1．523～9．928、1．156～2．850)。结论ADAM33基因T1位点单核苷酸多态性与新疆维吾尔族成人支气管哮喘具有明显相关性。

关键词:解整合素-金属蛋白酶33基因;支气管哮喘;单核苷酸多态性

近年来，支气管哮喘(简称哮喘)发病率和急性加重率明显增加，环境因素和遗传基因是发病的主要原因，通过氧化应激和损伤、炎症通路和异常免疫反应、增强过敏原的敏感性和气道重塑机制诱发和加重哮喘［1］。其中，去整合素-金属蛋白酶33基因(ADAM33，a disintegrin and metalloproteinase 33)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)成为研究热门，其在不同种族、民族的人群中与哮喘及其相关表型的关系不尽相同。本研究采用病例-对照的研究方法，探讨ADAM33基因F1、L1、T1位点与维吾尔族哮喘的关系，为哮喘个体化治疗和预后提供线索。

1　资料与方法

1．1研究对象选择2012年4月－2013年4月经新疆医科大学第一附属医院呼吸科明确诊断哮喘的维吾尔族患者206例(哮喘组)。选择新疆医科大学第一附属医院健康体检中心的维吾尔族的健康体检者140例为对照组。根据中华医学会呼吸病学分会哮喘学组2008年制定的支气管哮喘防治指南的诊断标准［2］明确诊断为哮喘。所有研究对象均为长期居住在新疆3代或3代以上。哮喘组:男性81例，女性125例，平均年龄(42．89±14．03)岁;对照组:男性55例，女性85例，平均年龄(40．22±14．56)岁。两组年龄、性别差异均无统计学意义，具有可比性。该研究已通过新疆医科大学第一附属医院伦理委员会审核，且所有受试对象均取得知情同意。

1．2主要实验仪器PCR反应扩增仪(美国，Mycycler)，凝胶成像系统(美国，Gel-Doc 2000)。

1．3方法

1．3．1全血基因组DNA提取提取－80℃冰箱中冷冻储存的外周静脉血2 mL，用全血基因组DNA提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取基因组DNA。

1．3．2PCR扩增(1)PCR反应体系:总体系20μL，包括基因组DNA 2μL、PCR Mix 10μL、上下游引物(10μmoL/L)各0．5μL、去离子水7μL(上下游引物和Tap酶见表1);(2)PCR反应条件:预变性95℃5min，变性95℃30s，退火68℃45s，延伸72℃60s，20个循环，每循环退火温度降低0．5℃，变性95℃30s，退火58℃30s，延伸72℃40s，20个循环，修复延伸72℃6 min。PCR扩增产物凝胶电泳图见图1。

表1　ADAM 33基因PCR引物序列与扩增参数

图1　PCR扩增产物凝胶电泳图

1．3．3 SNP-RFLP检测步骤(1)酶切体系:PCR反应体系10μL，酶(10Μ/μL)0．1μL，去离子水3．4μL，10×Bμffer R 1．5μL，37℃温箱中过夜;(2)酶切产物滴入浓度为3%琼脂糖凝胶梳孔中，放入电泳槽中电泳，时间为30min，在紫外线下观察结果并保存分析。(3)DNA序列测定:部分送往上海生工生物工程有限公司行DNA序列测定。

1．4统计学处理采用SPSS16．0软件进行统计学分析。两样本计量资料比较采用独立样本t检验，多样本计量资料比较采用F检验，组间基因型和等位基因频率的比较采用χ2检验，不同基因型和等位基因对哮喘的相对危险度用单变量Logistic回归分析。以P＜0．05为差异有统计学意义。

2　结果

2．1 ADAM 33基因各位点的Hardy-W einberg(HW)遗传平衡定律的检验按照Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验，T1位点为P＞0．05，结果表明两组研究样本的群体代表性好，符合H-W遗传平衡定律，T1位点PCR产物酶切片段电泳图，见图2;F1、L1位点P＜0．05，不符合H-W遗传平衡定律(图3、4)，故不予以讨论(表2)。

图2　T1位点PCR产物酶切片段电泳图

图3　F1位点PCR产物酶切片段电泳图

图4　L1位点PCR产物酶切片段电泳图

2．2 ADAM 33基因各位点的基因型及等位基因频率哮喘组和对照组中ADAM33基因T1位点3种基因型分布差异有统计学意义(χ2=10．472，P=0．005)。ADAM33基因T1位点等位基因频率分布差异有统计学意义(χ2=11．192，P=0．001，OR= 1．883，95%CI=1．296～2．737)(表3)。

经过单变量的Logistic回归分析结果表明，与AA基因型比较，G等位基因的携带者(AG、AG+ GG)基因型均能明显增加哮喘发生的危险(P分别为0．003、0．009，OR分别为3．889、1．815，95%CI分别1．523～9．928、1．156～2．850)(表4)。

表2　哮喘组和对照组中ADAM 33基因SNP位点的Hardy-Weinberg遗传平衡检测

表3　两组ADAM 33基因T1位点基因型与等位基因频率分布比较/例(%)

表4　T1位点不同基因型与发生哮喘的相关性/例

3　讨论

哮喘是临床上最常见的慢性气道疾病之一，而全球哮喘患者的控制率仍低于GINA指南的要求［3］，已经成为一个值得关注的公共卫生问题。以往研究结果显示:ADAM33基因目前已经确定为哮喘的易感基因，但是该已经在不同地域、不同人群中表达不同，与哮喘的关联性结果不尽相同［4－5］。维吾尔族是一个较少与外界通婚的民族，其遗传背景相对稳定。

本研究显示:维吾尔族人群ADAM33基因F1、L1位点的不符合H-W遗传平衡定律，群体代表性欠佳，因此未予以讨论，有待于进一步扩大样本量再做进一步的阐述和探讨。ADAM33基因T1位点3种基因型分布频率有统计学意义，与汉族、高加索人群有所不同，可推断其基因多态分布具有民族特异性。等位基因T1(G)位点增加哮喘的发病风险。本研究与Hirota等［6］、邱玉明等［7］研究结果较为一致。熊俊艳等［8］在研究广州市哮喘儿童时发现ADAM33基因T1位点多态性与其发病无明显相关;余宏川等［9］研究显示陕西关中地区汉族儿童哮喘与ADAM33基因T1位点多态性不相关，也不影响血浆IgE水平，与本研究结果不一致。

本研究初步探讨了维吾尔族人群哮喘与ADAM33基因T1位点多态性的关联性，ADAM33基因的功能、蛋白等方面有待进一步研究，深入探讨该基因在哮喘发生、发展过程中的作用机制，可为哮喘个体化治疗提供一定的依据，更好地防治哮喘。

参考文献:

［1］Nishimura KK，Galanter JM，Roth LA，et al．Early-life air pollution and asthma risk in minority children．The GALA II and SAGE II studies［J］．Am JRespir Crit Care Med，2013，188(3):309-318．

［2］中华医学会呼吸病分会哮喘学组．支气管哮喘的定义、诊断、治疗和管理方案［J］．中华结核和呼吸杂志，2008，31(3): 177-185．

［3］苏楠，林江涛，刘国栋，等．我国八省市支气管哮喘患者对疾病管理与认知现状调查［J］．中华内科杂志，2015，54(8): 680-683．

［4］Primakoff P，Myles DG．The ADAM gene family:surface proteins with adhesion and protease activity［J］．Trends Genet，2000，16 (2):83-87．

［5］Tripathi P，Awasthi S，Prasad R，et al．Association of ADAM33 gene polymorphisms with adult-onset asthma and its severity in an Indian adult population［J］．JGenet，2011，90(2):265-273．

［6］Hirota T，Hasegawa K，Obara K，et al．Association between ADAM33 polymorphisms and adult asthma in the Japanese population ［J］．Clin ExpAllergy，2006，36(7):884-891．

［7］邱玉明，罗雅玲，赖文岩，等．ADAM33基因Met764Thr位点多态性与支气管哮喘发病及患者肺功能的相关性［J］．中华结核和呼吸杂志，2007，30(7):518-521．

［8］熊俊艳，何启强，蒋卓勤，等．ADAM33基因T1位点多态性与支气管哮喘发病的相关性［J］．实用临床儿科杂志，2009，24 (16):1241-1243．

［9］余宏川，陈强国，李延琪，等．解整合素-金属蛋白酶33基因T1位点多态性与哮喘相关性研究［J］．临床儿科杂志，2011，29 (9):852-855．

(本文编辑杨晨晨)

Correlation study on polymorphism in ADAM 33 gene and bronchial asthma in adults in Xinjiang Uyghur population

M ihereguli SimayiI1，HU Xin1，WANG Jing2，YANG Xiaoping3，LI Lu4，WANG Fei5，QimanguliW ushouer5
(1Department of Respiration，2Department of Geratology，3Physical Examination Center，4Medical Laboratories，The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，
Urumqi830054，China;5Changji Branch，The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Changji831100，China)

Abstract:Objective To investigate the correlation of the F1，L1，T1 locus in ADAM33 gene polymorphism with bronchial asthma of Uyghur adults in Xinjiang．M ethods PCR-RFLP was used to determine polymorphism of F1，L1，T1 locus in ADAM33 gene in 206 Uygur patientswith bronchial asthma(asthma group)and 140 Uygur healthy individuals(control group)，in which a part of the samples were detected for genetic verification．Results The comparison of three genotypes of the T1 in ADAM33 had statistical significance in asthma group and control group (χ2=10．472，P=0．005)．Allelic frequencies had statistical significance．Compared with“AA”，G allele carriers (both AG and AG+GG)could elevate the risk of asthma occurs(P=0．003，0．009;OR=3．889，1．815，95%CI =1．523－9．928，1．156－2．850)．Conclusion The polymorphism of the T1 locus in ADAM33 gene possessed significant correlation with Uygur population in Xinjiang．

Keywords:ADAM33gene;bronchial asthma;single nucleotide polymorphism

［收稿日期:2015-12-06］

通信作者:齐曼古力·吾守尔，女(维吾尔族)，主任医师，教授，博士生导师，研究方向:支气管哮喘的临床应用与基础研究，E-mail:qimenw@hotmail．com。

作者简介:米合热古力·司马义(1967－)，女(维吾尔族)，本科，副主任医师，研究方向:支气管哮喘的临床应用。

基金项目:国家自然科学基金(81160004，81100026)

doi:10．3969/j．issn．1009-5551．2016．03．001

中图分类号:R562．2+5

文献标识码:A

文章编号:1009-5551(2016)03-0257-04