黄丝菌多糖的单糖成分及抗氧化活性探析

赵大群 丁祥 刘露 钱叶 侯怡铃

摘 要 实验采用黄丝菌（Canthar-ellus cibarius Fr）子实体，经热水提取、乙醇沉淀、柱层析以及透析处理，得到黄丝菌多糖（CC-1），采用三氟乙酸水解黄丝菌多糖样品形成单糖，结合高效液相色谱分析法（HPLC法）分析了其单糖成分；同时，研究了低浓度黄丝菌多糖的抗氧化活性。结果表明，黄丝菌多糖由甘露糖与木糖组成，比例为7∶1。抗氧化实验表明，黄丝菌多糖对ABTS+自由基的清除能力在0.5～5.0 mg/mL质量浓度范围内呈正相关，对DPPH-自由基也有一定清除作用。

关键词 黄丝菌多糖；高效液相色谱法；单糖成分；抗氧化活性

中图分类号：TS201.4 文献标志码：B 文章编号：1673-890X（2016）12--02

黄丝菌（Canthar-elluscibarius Fr.）又称鸡油菌、杏菌，是四川、云南地区一种常见野生食用菌。其子实体肉质，全菌杏黄色、蛋黄色或枇杷黄色，有浓郁的杏仁果香味[1，2]。本研究主要以黄丝菌菌体为原料纯化得到黄丝菌多糖（CC-1），通过高效液相色谱分析法（HPLC法）对黄丝菌多糖（CC-1）的单糖结构进行了分析，同时对低浓度黄丝菌多糖的抗氧化活性进行了初探，为黄丝菌多糖（CC-1）的开发利用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器

1.1.1 实验材料

黄丝菌采自四川省小金县海拔3 500 m的高原地带，由西华师范大学丁祥教授鉴定。

1.1.2 药品试剂

DPPH试剂，Sephadex G-100 column，浓硫酸、苯酚、无水乙醇、氢氧化钠、三氟乙酸；维生素C；ABTS试剂；其他化学试剂均为国产分析纯。

1.1.3 主要仪器

1260高效液相色谱分析仪，酶标仪（配有Gen5仪器控制及数据分析软件），离心机Centrifuge5418R；电热恒温水浴锅（W-1300083）。

1.2 实验方法

1.2.1 高效液相色谱法（HPLC）分析单糖成分

取多糖样品5 mg，用5 mL浓度为2 mol/mL的三氟乙酸溶解，在100 ℃水解6 h，除去三氟乙酸。将水解后的单糖产物以75%的乙腈作为流动相利用高效液相色谱分析法进行检测。

1.2.2 ABTS和DPPH自由基清除实验

参照相关文献ABTS和DPPH自由基清除实验[3]，实验组吸光度为A1；空白对照组吸光度值为A0；阳性对照组吸光度值为A2。

清除率=[1-（A1-A2）/A0]×100%

2 结果与分析

2.1 黄丝菌多糖的单糖组分鉴定

黄丝菌样品多糖经过高效液相色谱法处理后出现两个明显峰，时间分别是在6.923 min以及8.086 min，其峰值时间与木糖6.833 min和甘露糖7.975min对应单糖峰时间吻合，可知黄丝菌多糖的为木糖和甘露糖构成。两单糖对应的峰面积分别3.5831%和25.7403%，可知其两种单糖比例约为1∶7。

2.2 黄丝菌多糖清除ABTS自由基活性

在一定质量浓度范围内（0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mg/mL），ABTS的清除能力随着黄丝菌多糖浓度的增加而增强。黄丝菌多糖浓度为5.0 mg/mL时，清除率达至52.37%。当VC质量浓度为6 mg/mL时，对ABTS的清除率可达98.02%。

2.3 黄丝菌多糖清除DPPH自由基活性

在一定的浓度范围内（0.1、0.3、0.6、0.9、1.5、2.1、2.4 mg/mL），对DPPH自由基的清除能力不随着黄丝菌多糖浓度的增加而改变，清除率稳定在23.81%～32.91%。当黄丝菌多糖浓度为2.3 mg/mL时，DPPH自由基的清除率达32.91%，继续增加样品多糖浓度时，对DPPH自由基的清除能力没有提升。与VC相比，其DPPH自由基清除能力较弱。

3 讨论与结论

本实验采用黄丝菌子实体，经柱层析以及透析，得到黄丝菌多糖（CC-1），采用三氟乙酸全水解，结合高效液相色谱分析法（HPLC法）分析了其单糖成分[4，5]。结果表明，黄丝菌多糖由甘露糖与木糖组成，比例为7∶1。这是首次确定黄丝菌多糖（CC-1）的单糖类型和含量，为进一步确定其精细结构提供了很好的基础。

在细胞或组织的正常生理代谢过程中可诱导活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）的产生，活性氧可以导致细胞内脂、蛋白和DNA等的氧化损伤，诱发氧化应激，从而导致各种肿瘤、风湿性关节炎、糖尿病以及中枢神经系统疾病等。本研究采用的ABTS+和DPPH- 检测黄丝菌多糖（CC-1）的总抗氧化能力。实验结果显示，黄丝菌多糖对ABTS+自由基的清除能力与浓度呈正相关，对DPPH-自由基也有一定清除作用。黄丝菌多糖（CC-1）作为一种高分子化合物，在水溶液中呈现一定的胶体性质，且多糖的羟基基团被水分子包裹，难于接近位于DPPH中3个苯环氮中心的自由基，这可能是导致黄丝菌多糖（CC-1）DPPH自由基的清除率低于对ABTS+自由基清除率。

综上，黄丝菌多糖（CC-1）可以作为一种天然来源的抗氧化剂资源。但是关于黄丝菌多糖（CC-1）的精细结构及抗氧化相关分子机制还有待于进一步研究。

参考文献

[1]刘培贵，壬向华，于富强，等.中国大型高等真菌生物多样性的关键类群[J].云南植物研究，2003，25（3）：285-296.

[2]张传利，杨发军，桂雪梅，等.鸡油菌研究概况与展望[J].热带农业科技，2010，33（3）：35-39

[3]李世峰，陈桂琛，毕玉蓉，等.两种野生食用菌抗氧化及抗肿瘤活性研究[J].中国食用菌，2005，24（3）：58-63.

[4]张汇，鄢嫣，聂少平，等.黑灵芝不同部位多糖成分分析及抗氧化活性[J].食品科学，2011，32（1）：56-61.

[5]李华，窦晓兰，陆启玉，等.葡萄状枝瑚菌粗多糖的提取及其清除DPPH自由基活性[J].食用菌学报，2012，19（3）：69-72.

（责任编辑：赵中正）