GCC mRNA在早期老年直肠癌患者淋巴结中的表达与预后的关系

周小青　曾桂芳　杨斌　叶斌　李才胜　曾祥泰

【摘要】 目的：探讨早期老年直肠癌淋巴结中GCC mRNA表达与预后的关系及能否作为判定淋巴隐匿性转移的有效指标。方法：应用RT-PCR技术检测48例早期老年直肠癌淋巴结中GCC mRNA表达水平（GCC mRNA阳性组12例，GCC mRNA阴性组36例），并分析患者的局部复发率、远处转移率、3年无瘤生存率（DFS）、3年总生存率（OS）与不同GCC mRNA表达水平的关系。结果：GCC mRNA阴性组患者的局部复发率、远处转移率更低，3年无瘤生存率更高（P<0.05）。两组3年总生存率无明显差异。结论：早期老年直肠癌淋巴结中GCC mRNA不同表达状态患者的预后有差异，GCC mRNA可以作为直肠癌淋巴结微转移的有效检测指标，可以作为甄别早期老年直肠癌高危患者的可靠分子学指标，有利于高危患者后续辅助治疗的选择。

【关键词】 GCC mRNA； 早期； 老年； 直肠癌； 淋巴结； 预后

The Relationship between Lymph Node GCC mRNA Expression and Prognosis in Elder Patients of Early Stage Rectal Cancer/ZHOU Xiao-qing，ZENG Gui-fang，YANG Bin，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（06）：001-004

【Abstract】 Objective：To explore the relationship between GCC mRNA expression of lymph nodes and prognosis in elder patients of early stage rectal cancer .Method： The expression of GCC mRNA in lymph nodes of 48 elder patients of early stage rectal cancer were detected by RT-PCR method，they were divided into the GCC mRNA positive group for 12 cases and the negative groups for 36 cases. The relationship between local recurrence， distant metastasis rate， disease-free survival of 3 years （DFS），over-all survival （OS） and GCC mRNA expression levels of the two groups were analyzed.Result： The GCC mRNA negative group had lower local recurrence and distant metastasis rate， disease-free survival of 3 years was higher（P<0.05）.There was no significant difference in the overall survival rate of 3 years between the two groups.Conclusion： Lymph node GCC mRNA expression level is closely related to the prognosis of early stage rectal cancer in elder patients. It can be used as an effective molecular marker in lymph node micrometastase of rectal cancer.

【Key words】 GCC mRNA； Early stage； Elder patients； Rectal cancer； Lymph nodes； Prognosis

First-authors address：The Second Affiliated Hospital of Gannan Medical University，Ganzhou 341600，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.06.001

直肠癌是一种常见消化道肿瘤，好发于中老年患者，随着社会经济的高速发展，环境污染的加剧，高热卡、高脂、低素等不良饮食方式及缺乏运动等不良生活方式，直肠癌的发病率呈逐年增加趋势，我国大中型城市尤为明显，虽然随着直肠癌外科TME技术的推广及新的化疗药物与放疗技术的发展，直肠癌的综合治疗取得长足进步，但5年生存率仍徘徊在50%左右，大约50%的患者死于复发和转移，其中局部淋巴结转移是直肠癌复发的重要因素，早期患者，尤其是老年患者，总体预后相对较好，但其复发与转移率也高达20%～30%。临床一般将无淋巴结与远处转移的Ducks A、B期称为早期直肠癌，对于早期直肠癌患者，是否需要化疗，NCCN 指南明确Ducks A期术后无需化疗已成共识，对于Ducks B期患者目前争议仍很大，主要根据年龄、病理类型、脉管浸润与否、有无穿孔、淋巴结清扫数目等危因素综合考虑是否化疗，老年患者部分因基础疾病及高龄，耐受化疗相对较差，是否化疗仍缺乏共识。早期直肠癌淋巴结中癌细胞的隐匿性转移是其术后复发转移的重要因素。鸟苷酸环化酶 C（Guanylyl cyclases C，GCC/GUCYC）是受体鸟苷酸环化酶家族成员之一，在肠道上皮细胞高度表达，普遍过表达于结肠直肠癌细胞（>80%），但在正常淋巴中无表达，可作为结直肠癌的特异性标志分子[1]。本研究应用RT-PCR检测早期老年直肠癌患者淋巴结中GCC mRNA的表达状态，并分析患者预后与不同GCC mRNA表达状态的关系，以探讨GCC mRNA能否作为一个判断淋巴结微的可靠指标及其对直肠癌的分子分期以及预后判断的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010年1月-2012年6月本院收住的术前肠镜病理证实为直肠癌的患者，手术后即刻对标本中淋巴结进行解剖，以淋巴结纵轴为中心切开淋巴结，一分为二，编号处理，其中一份送病理检查，另一份留取冰冻保存，待病理回报后证实系直肠癌；清扫淋巴结数≥12枚且常规病理淋巴结为阴性的老年患者，选取对应患者的冰冻保存淋巴结进行解冻。共选取48例患者，其中男30例，女18例，年龄（66±5.6）岁，其中低分化腺癌10例，

中-高分化腺癌38例，TNM分期：T1 14例，

T2 16例，T3 10例，T4 8例。

1.2 试剂与方法 （1）实验方法详见操作规范[2-3]。（2）将48例患者根据PT-PCR检测GCC mRNA的表达分为阳性组12例与阴性组36例，对两组患者进行密切随访，第1～2年，每3个月一次，第3年以后，每6个月一次，随访期间常规体格检查，并予查血CEA、CA19-9、CA72-4，腹盆腔CT，胸部X-Ray，如癌标指标升高，常规腹盆腔CT未发现病灶时，予行PET-CT检查以明确。（3）复发与转移患者治疗：对于局部复发者，身体耐受良好，选择再次手术切除，而对于患者耐受差或拒绝手术者，选择局部放疗；对于转移者，如广泛转移者，选择mFOLFOX6或XELOX方案，部分患者根据K-RAS状况，选择联合C225等单抗治疗，如果局灶性肝转移，患者身体耐受良好，选择手术转移灶切除，如患者耐受差，笔者选择TACE或RF治疗，局部治疗后予FOLFOX6或XELOX方案化疗。

1.3 观察指标 比较两组患者的局部复发率、3年总生存率、无瘤生存时间等指标的差异。

1.4 统计学处理 采用SPSS 14.0统计学软件进行数据分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料以百分比表示，比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

淋巴结GCC mRNA阳性表达组局部复发率、远处转移率较阴性组高，3年无瘤生存率较阴性组差（P<0.05）；阴性组3年总生存率略高，但与阳性组比较差异无统计学意义（P>0.05）。相同T分期患者淋巴结GCC mRNA阳性组预后较阴性组差，阳性组脉管浸润率较阴性组高，其中T3～4淋巴结GCC mRNA表达阳性率明显高于T1～2，见表1～3。

3 讨论

直肠癌是一种常见消化道肿瘤，好发于中老年患者，随着社会经济的高速发展，老龄化进程的步入，环境污染的加剧，高热卡、高脂、低素等不良饮食方式及缺乏运动等，直肠癌的发病率在逐年增加，尤其在老年患者，成为危害人民生命健康的主要恶性肿瘤之一。随着各类新的抗肿瘤药物出现及新技术进展，尤其是1982年Heald教授提出全直肠系膜技术的应用（TME），直肠癌复发率由传统20%～40%下降至5%～10%，TME已成为中低位直肠癌根治术的金标准，但5年生存率仍徘徊在50%左右，大约50% 的患者最终死于直肠癌术后复发及肝转移，其中复发以会阴、盆壁、前列腺、阴道、子宫附件、吻合口、直肠周围组织及直肠系膜淋巴结多见，其中淋巴结转移是直肠癌复发与转移的重要原因，严重影响患者预后[4-5]；即使是不存在局部淋巴结转移的早期直肠癌患者，在复发患者中占比达20%～30%，如何降低患者的复发与转移成为难点。放化疗可降低复发与转移的发生，但既往对于早期直肠癌患者是否化疗，主要依据年龄、病理类型、肿瘤浸润深度、脉管浸润与否、有无穿孔、淋巴结清扫数目等高危因素综合考虑；然而老年患者，尤其是合并有基础疾病或高龄患者，化疗是否受益仍无共识，准确识别高危患者尤为重要，其中癌细胞在淋巴结中的隐匿性转移则是导致直肠癌术后复发转移的重要因素，目前是研究的热点[6]。

传统分期方法主要根据常规组织病理学检测结果，其主要缺点是常规病理仅检测少数淋巴结或仅能检测一个淋巴结的数个切面进行分析，组织病理学检查本身的敏感性相对局限，最高分辨率仅能从200个正常细胞中检出1个肿瘤细胞，易遗漏阳性淋巴结，尤其是对于隐匿性淋巴结转移患者，微转移灶癌细胞数偏少，容易造成假阴性，有低估患者实际分期之疑；故常规病理淋巴结阴性并不代表淋巴结没有肿瘤细胞浸润。随着基因组学与蛋白组学等分子生物技术的发展，尤其是逆转录多聚酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction， RT-PCR ） 技术的成熟和完善， 检测隐匿性转移肿瘤细胞已成为目前研究的热点[7-10]。RT-PCR技术检测隐匿性转移的优于测定蛋白质的免疫学技术，主要优点体现在：（1） 技术更简便易行，RT-PCR 相对免疫学技术易行， 只要待测基因序列， 即可设计引物作RT-PCR， 而免疫学技术则需不断生产特异性抗体；（2） 特异性更高，首先有些肿瘤细胞可转录组织特异性抗原的mRNA ，但无该抗原蛋白合成，其次mRNA 在细胞外很不稳定， 故只要在组织或体液中测出特异性RNA ， 就意味着有肿瘤细胞的存在，故检测mRNA特异性更高； （3） 敏感性更高，很少量的癌细胞即可被检出，可以检出约106～107个正常细胞中夹杂的一个肿瘤细胞，较传统病理200个正常细胞中检出1个肿瘤细胞敏感性更高； （4） 遗漏率低，提取整块淋巴结组织的RNA 进行检测， 克服了传统组织学检查和免疫组织化学方法只能切取数个淋巴结切面的缺点； （5） 更为省时省力，可以同时对大量标本进行检测并且整个过程只需1～2 d。

GCC是受体鸟苷酸环化酶家族成员之一，人类GUCYC基因定位于12号染色体[9-11]，约85 kb，有27个外显子，含3745 bp核苷酸序列；GUCYG在正常小肠黏膜上皮及直肠恶性肿瘤中表达，是直肠癌一个高度特异性的生物学指标[1，11-12]。

本研究利用RT-PCR检测早期老年直肠癌患者淋巴结中GCC mRNA的表达情况，分析不同表达与预后之间的关系，淋巴结GCC mRNA阳性组复发2例（16.67%），盆骶复发1例，髂血管旁淋巴结复发合并肝转移1例，多发肝转移1例，淋巴结GCC mRNA阴性组复发2例（5.56%），盆骶复发1例，腹主动脉旁淋巴结转移1例，肝单发转移1例。淋巴结GCC mRNA阳性组复发率较阴性组高，同时发现患者复发中位时间多在2年内，2年后复发率明显减少；3年无瘤生存期阳性组较阴性组短，相同T分期患者淋巴结GCC mRNA表达阳性组预后较阴性组差，其中T3、T4淋巴结GCC mRNA表达阳性率明显高于T1、T2；GCC mRNA阳性表达者预后差，3年总生存率目前无明显差异，可能同复发与转移后采取积极的手术与化疗及靶向治疗有关，其对于5年总生存率有无影响还需进一步随访观察，对于GCC mRNA表达者预后差，具体机制还有待探索，可能同GCC mRNA通过cGMP依赖的相关机制来调节大肠癌细胞的增殖和分化有关[13-16]。

本研究提示GCC mRNA可作为淋巴结隐匿性转移的可靠指标，对直肠癌的分子生物学分期以及预后判断有一定指导意义，有可能作为早期老年直肠癌辅助治疗的重要参考指标。

参考文献

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（收稿日期：2015-10-20） （本文编辑：蔡元元）